TECHNIQUES DANALYSES BIOLOGIQUES

TRAVAUX PRATIQUES
Titrage des acides amins par pHmtrie

fonctionnels caractristiques : un groupe carboxylique -COOH et un groupe amin NH2, situ en par rapport au carboxyle. Certains possdent en outre un groupement ionisables dans leur radical : groupements carboxyle des acides aspartique et glutamique, OH phnolique de la tyrosine, imidazole de lhistidine, guanidine de larginine, entre autres. Il est important de connatre les caractristiques de titrage (pK) de ces diffrentes fonctions. Elles permettent de mieux comprendre le mode de fonctionnement des enzymes (fonctions ionisables situes au centre actif). Le comportement des peptides et des protines en lectrophorse et en chromatographie dchange dions, etc. Le titrage doit souvent tre raliser sur les molcules moins complexes que sont les peptides et les protines.

Les acides amins , possdent tous lexception de la proline, au moins 2 groupes

1. Principe Prenons lexemple le plus simple, celui de la glycine, acide amin neuter, ne possdant pas de fonction ionisable sur la chane latrale. En solution aqueuse, elle se prsente sous forme dun ion bipolaire (Zwittrion). Cet ion la fois cation par NH3+ et anion par COO-. - En prsence dun acide, lion bipolaire se comporte comme une base et peut fixer un proton ; la constante de dissociation est K1. - En prsence dune base, lion bipolaire se comporte comme un acide et peut librer un proton ; la constante de dissociation K2. On peut rsumer ceci de la faon suivante :

1. Courbe de titration dun acide amine.

3. Manipulation Introduire dans un bcher de 100 ml : 40 ml de solution de glycocolle = glycine 0.04 M le barreau aimant. Placer le bcher sur lagitateur magntique, lancer lagitation, lire le pH ajouter 0.6 ml de Hcl 1N, Noter le pH. - continuer ajouter la mme solution de Hcl goutte goutte (maximum 1.4 2 ml au total) jusqu obtenir un pH de 2. - la solution de glycocolle acidifie par les 1.4 2 ml de Hcl 1N, ajouter une solution de NaOH 0.1 N, 0.5, en notant la valeur de pH aprs chaque addition, jusqu atteindre un pH de 11.5 12. 4. Compte-rendu -Courbe de titrage de la glycine des pH en fonction des ml de NaOH verss : -Dtermination graphique de pK1, pK2 et pHi (emplacement exact des ces valeurs : voir courbe de titrage dun acide amin simple). - Calcul du pHi dont la valeur est comparer celle obtenue graphiquement. - dtermination des formes ioniques et leur % chaque pH. ( pH trs acide et trs basique). 4.Conclusion : intrt de la titration de lacide amin.