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TECHNIQUES D'ANALYSES BIOLOGIQUES

CORRIG: EPREUVE DE MOYENNE DURE
E.M.D N1 ANNE 2003/2004 >VERSION IMPRIMABLE

1-

Exercice 1 :

Une prpara on de Lactate Dshydrognase (LDH) est u lise dans lexprimenta on suivante. On cons tue une srie de 3 essais dont la composi on est la suivante ;

Essai n H2O Solu on talon (ml) Prpara on de LDH (ml) Rac f du Biuret(ml) Absorbance mesure aprs 30 min

1 2

2 2 8 0.02 8 0.25 8 0.29

Concentra on de la solu on talon : 1mg/ml. Trajet op que : 1 cm. Quelle est la concentra on en protines dans la prpara on de LDH ? Rponse : la concentra on en protines de la prpara on enzyma que est de : 1.174 mg/ml. 2La LDH catalyse la rac on :

Pyruvate + NADH + H+ - - - > Lactate + NAD+

Dans la cuve dun spectrophotomtre, on introduit 2.95 ml dun tampon adquat contenant du pyruvate et du NADH+H+ en concentra ons saturantes. On ajoute 50 l de la prpara on de LDH prcdemment u lise. Comment varie labsorbance ? jus er votre rponse. Rponse : Labsorbance varie en fonc on de la longueur donde u lise. Jus ca on : Labsorbance dcrot lorsquon u lise la longueur donde spcique du co-facteur NADH+H+. Labsorbance est maximum correspondant la concentra on ini ale du NADH+H+ prsent dans le tube essai (tube n 2 au temps t0). On suit la varia on dabsorbance en fonc on du temps, elle est gale 0.048 min . Le coecient dabsorbance molaire de NADH+ H est de 6300 M-1.cm . a) Donner la dni on du coecient dabsorp on molaire et sa rela on avec labsorbance.
+ -1 -1

Rponse : Le coecient dex nc on molaire est caractris que de la substance doser. Sa valeur est constante pour une solu on donner. La valeur de labsorbance est gale au coecient dex nc on molaire pour une concentra on molaire de la solu on tudier.

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b)

Calculer la quan t de NADH transforme en 1 min.

Rponse : 22.86 nmole de NADH transforme en 1 min.

Exercice 2 :

Dans un protocole opratoire ncessitant une dprotinisa on, il est indiqu de centrifuger 10min 3500 tours/min. Sachant que lon u lise un rotor dont le rayon de centrifuga on est de 50 mm, calculer la valeur de lacclra on en mul ple de g. Quelle serait la valeur de lacclra on centrifuge si on u lise un autre rotor de rayon de centrifuga on gale 8 cm ? Quelle conclusion en rez vous ? Rponse : Environ 700 g et 1156 g lacclra on augmente avec le rayon de centrifuga on.

Exercice 3 :

Une solu on dacide sulfurique a les concentra ons suivantes : Densit 1.83, degr de puret en masse 94%. a) b) Quelle est sa concentra on molaire ? Comment procdez vous pour prparer 300 ml dune solu on dacide sulfurique de concentra on molaire 0.125 par r de la solu on concentre ayant les caractris ques ci-dessous ?

Rponse : a) 18.30 mol/l. b) 2.2.01 ml de H2SO4 concentr complter 300 ml.

Exercice 4 (Ques ons de cours) Citez les techniques de photomtrie dmission atomique que vous connaissez ? Quelle est celle qui donne les meilleurs rsultats exprimentaux ? Quels inconvnients prsente t-elle ? Rponse : Voir cours.

EmailA.Bedrane & F.Lahfa

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