FERMENTACION EN ESTADO SLIDO

TEMAS
1. Introduccin 2. Escala de laboratorio 3. Escalas piloto e industrial 4. SSF con aireacin forzada 5. SSF sin aireacin forzada 6. SSF mezclado continuo 7. SSF intermitente A D A R D R A

FERMENTACION EN ESTADO SLIDO (SSF)

Es un proceso microbiolgico que ocurre comnmente en la superficie de materiales slidos que tienen la propiedad de absorber y contener agua, con o sin nutrientes solubles

Viniegra-Gonzlez (1997)

INTRODUCCION
 Pan egipcio, protena comestible japonesa  Objetivos: Aumentar el contenido proteico alimentos,

mejorar su conservacin, cambiar sus caractersticas fsicas, el color, el olor o el sabor de los mismos.  Ejemplos:
Koji (Aspergillus oryzae sobre cereales cocidos) Queso Roquefort (Penicillium roqueforti en leche de oveja) Shoyu, Miso y Ontjom

 Necesidades:

Polucin de suelos Uso potencial de biorremediacin Alternativas de alimentos para animales

CARACTERISTICAS
 Contenido bajo de agua  Fase de gas entre las partculas  Baja conductividad elctrica (aire vs. agua)  Gran cantidad de matrices (Composicin,

tamao, resistencia mecnica, porosidad

Hongos

(Crecimiento actividades enzimticas)

apical,

VENTAJAS
 Medios de cultivo simples (Subproductos agrcolas con alto      

contenido de nutrientes) Baja actividad del agua (Evita contaminacin de bacterias y levaduras) Reactores ms pequeos (Concentracin del sustrato mayor al igual que la productividad volumtrica) Aireacin forzada facilitada por la porosidad del soporte (Alta transferencia de O2) Conidios como inculo en los procesos de crecimiento de hongos (menores costos y manipulaciones en el inculo) Tecnologa limpia Calidad de enzimas superior Glucosidasa (Calor) Fitasa (Estabilidad en peletizacin) Proteasa (Digestin de protenas)

 La transferencia de oxigeno puede ser limitante segn el diseo del          

DESVENTAJAS

reactor Su aplicacin se limita a microorganismos que crecen en bajos contenidos de humedad Temperatura y humedad del medio Morfologa de los microorganismos (en especial de los hongos) debido a su resistencia a la agitacin Esterilidad Escalado (Generacin de calor y heterogeneidad) Extraccin del calor metablico a gran escala sin control Medicin de pH, T, contenido de humedad y concentraciones Procesos de transferencia de masa son limitados por la difusin. Diseo de reactores y el escalado poco caracterizados. Tiempo de fermentacin mayor (microorganismos con bajas velocidades especficas de crecimiento)

PROCESO SSF

APLICACIONES
 Abono orgnico  Ensilado  Maduracin de quesos  Cultivo de championes

INFLUENCIA DE FACTORES AMBIENTALES

Humedad y actividad del agua (aw).  Porcentaje de humedad entre 30 y 80%, segn el slido utilizado, el microorganismo y el objetivo del proceso (formacin de producto, crecimiento de la biomasa).
 Actividad del agua (aw): Caracteriza las interacciones

agua-medio slido.

 aw: Humedad relativa de la atmsfera gaseosa en equilibrio

con el sustrato. Ejerce influencia sobre el crecimiento, la formacin de productos y el crecimiento celular.

pH

INFLUENCIA DE FACTORES AMBIENTALES

 Afecta el desarrollo de los procesos SSF  Imposible de controlar, debido a la ausencia de instrumentos

capaces de medir el pH en la capa de lquido que rodea el slido.  El pH cambia por diferentes razones: Disminuye por la secrecin de cidos orgnicos (actico y lctico) durante el proceso. La fuente de nitrgeno utilizada influye mucho en la tendencia que sigue el pH  Investigaciones para formular medios de cultivo que permitan mantener, de manera natural, el pH en un intervalo deseado durante el proceso.
Raimbault y Alazard (1980): Crecimiento de Aspergillus niger en harina de yuca y una mezcla de sulfato de amonio - urea de 3 a 2 (calculado en base al nitrgeno) para mantener el pH en el intervalo de 5 a 6.2 (favorable para el crecimiento del microorganismo).

INFLUENCIA DE FACTORES AMBIENTALES

Temperatura
 Ejerce una accin determinante en el conjunto de actividades celulares

(crecimiento y la formacin de productos)  Control crtico por la alta concentracin de sustrato por unidad de volumen y la baja conductividad trmica del sistema heterogneo slido lquido - gas, lo que favorece la acumulacin del calor metablico en el sistema y el aumento de la temperatura del cultivo que favorece tres aspectos negativos:
La actividad microbiana se desacelera o se detiene. Se deshidrata el medio slido. El metabolismo se desva como un mecanismo de defensa ante el calor o ante la deshidratacin.

 Intercambio de calor por conveccin forzada con elevadas tasas de

aireacin que con frecuencia deshidratan al medio.  Utilizacin del calor latente de vaporizacin del agua para eliminar el calor metablico de manera rpida y efectiva.

INFLUENCIA DE FACTORES AMBIENTALES

Concentracin y disponibilidad del sustrato
 Nutrientes necesarios balanceados para favorecer el crecimiento del

microorganismo, la eficiencia de conversin energtica y la respiracin.

Conocimiento de la composicin de la biomasa del microorganismo empleado Conocimiento de los coeficientes de rendimiento para la formacin de biomasa y producto, y los valores de la energa de mantenimiento para establecer los requerimientos de las fuentes de carbono.

INFLUENCIA DE FACTORES AMBIENTALES

Aireacin
 Microorganismos aerobios  Suministrar oxgeno, extraer CO2 formado y calor metablico

evolucionado  Flujo ptimo de aire debe considerar:

Naturaleza del microorganismo Requerimientos de oxgeno para el crecimiento y/o la formacin del producto deseado Velocidad de generacin de calor metablico Concentracin crtica del dixido de carbono y otros metabolitos voltiles Espesor de la masa de slido

 La aireacin en SSF es fcil porque la superficie de contacto es

mayor entre el aire y el lquido que est absorbido en las partculas

INFLUENCIA DE FACTORES AMBIENTALES

El inculo  Tipo de inculo
Micelio: Mejor competitividad del hongo, reduccin de posibles colonizaciones del sustrato por microorganismos contaminantes y la colonizacin ms rpida del hongo debido por los bajos tiempos de incubacin Esporas: Reduccin de los costos en la etapa de propagacin del microorganismo.

TIPOS DE REACTORES

ESCALA LABORATORIO
 Los primeros

reactores en estado slido eran cajas de Petri y Erlenmeyers.  Un equipo de ORSTOM dise el modelo de columnas para estudios en SSF.
Reactor usado en escala de laboratorio patentado por ORSTOM.

NUEVA GENERACIN
computarizado  Muestreo sin contaminacin  Permite elaborar perfiles de crecimiento vs. Variables asociadas
5- Medidor de humedad 6- Resistencia calefactora 7- Medidor de temperatura en agua 8- Medidor de flujo

 Control

1- Tapa 2- Termmetro en el medio 3- Cilindro de acero 4- Termmetro para aire de ingreso

9- Medidor de nivel 10- Aislante

REACTORES SSF CON MEZCLADO

REACTOR DE TAMBOR ROTATORIO  Mejora la transferencia de masa y calor  Permite la homogenizacin de las variables  Puede generar inconvenientes asociados a aglomeracin

1- Entrada de aire 2- Junta rotatoria 3- Acople 4- Toberas de aire

5- Lnea de aire 6- Rodillos 7- Tambor rotatorio 8- Medio slido 9- Llantas

REACTOR DE TAMBOR PERFORADO

 Incrementa la

distribucin de oxgeno  Puede generarse taponamiento por el medio slido y el microorganismo

MEZCLADOR DE PALAS
 Posee el mezclado ms eficiente

1- Entrada de aire 2- Termocuplas 3- Chaqueta 4- Palas

5- Salida de aire 6- Motor 7- Reactor 8- Medio slido 9- Eje de agitacin

BIOREACTOR ZYMOTIS LAB

 Usado en

fermentaciones estticas  Alta transferencia de calor  Pueden haber inconvenientes para la transferencia de Oxgeno

ESCALAS PILOTO E INDUSTRIAL

 Poca diversidad Transferencia de calor Acanalamientos de aire Hinchamiento del medio Resistencia mecnica de microorganismos a la agitacin Requerimientos de oxigeno Rango de temperatura Mtodos apropiados de inoculacin Necesidad del pretratamiento del sustrato Esterilidad Facilidad de llenado, vaciado y limpieza del reactor

ESCALAS PILOTO E INDUSTRIAL

 Clasificacin: Aire circulando alrededor del sustrato Aire circulando a travs del sustrato
Sin mezclado Intermitentes Camas mezcladas continuas

BIOREACTORES SSF CON AIREACIN FORZADA

 Se introduce aire a travs de un tamiz, que soporta

al sustrato.  Es un reactor simple que puede procesar unos pocos kilogramos de medio slido seco.  Herramienta para:
Analizar empricamente la evolucin global de un proceso y determinar parmetros como temperatura y humedad relativa del medio. Estudiar la difusin del oxgeno y los fenmenos de transferencia de masa y calor.

 Son muy tiles en

ausencia de modelos matemticos para el escalado.  No tienen agitacin mecnica. Agitacin manual.  Estn limitados por la produccin metablica de calor. Inevitables gradientes de T.
(1)

 La mayora del

calor es eliminado por conveccin y por la evaporacin del agua que hay en el medio. Por lo cual se debe adicionar agua de manera uniforme.

(1)

BIOREACTOR ZYMOTIS
platos perforados en los cuales se coloca el medio slido.  Aire estril pasa a travs de cada plato.  Debajo de cada plato hay un intercambiador de calor.
(1)

 Es una torre con

BIOREACTOR ZYMOTIS
 Los platos son esterilizados previamente con aire

seco o con vapor.  Cada plato funciona como una enorme caja de petri.  Los platos son incubados en amplios cuartos, que tienen un filtro de aire (0.2 m o menor).  Hay una dispersin de agua sobre los cuartos para mantener la atmsfera saturada.

PLAFRACTOR
 Diseado por Biocon (compaa India)  El aire que entra y sale del sistema es

filtrado para retirar microorganismos.  El reactor esta sellado, de manera que est libre de contaminantes externo.  Remocin de calor por medios conductivos.  Como el aire es mal conductor se usa agua como fluido de enfriamiento.

 Canales de

cultivo:
Fluidos para esterilizacin Ajuste de humedad y O2. Extraccin de sustancia de inters despus del cultivo.
(1)

 Canales sin cultivo:

Fluidos de enfriamiento o calentamiento.

 Dentro de cada mdulo tiene un brazo de

mezcla que gira alrededor del eje central del mdulo.  Se usa principalmente para produccin de metabolitos.

 La matriz que soporta los nutrientes se

esteriliza y enfra dentro del reactor.  El inculo es adicionado y mezclado de forma asptica despus de que el medio se ha esterilizado.

BIOREACTORES SSF SIN AIREACIN FORZADA

 Es la ms sencilla y practicada desde siglos atrs.  El micro organismo puede ser transferido al

reactor como un molde insertado en el medio de cultivo.  Corresponde a la mayora de sistemas de fermentacin en bandejas, aplicados en fermentacin de quesos.  Requiere grandes reas para el proceso.  Es difcil mantener asptico el proceso

REACTOR KOJI

1- Caja Koji 2- Vlvula de agua 3- Lmpara UV 4-8-13- Sopladores de aire

5- 11- Filtros de aire 6- Salida de aire 7- Humidificador 9- Calentador

10- Recirculacin de aire 12- Entrada de aire 14- Bandejas 15- Soportes

REACTOR DE MEZCLA CONTINUA CON AIREACIN.

 Es un tambor rotatorio que sirve para maximizar la

exposicin de cada partcula con el aire circulado.  Se usa en laboratorio y en escala pre-piloto.  Micelio y partculas de sustrato pueden aglomerarse impidiendo una buena transferencia de masa, calor y oxgeno.  Incrementar la velocidad de rotacin del tambor, afecta el crecimiento del micelio debido a efectos cortante.

TAMBOR ROTATORIO DISCONTINUO

 Opera igual que

el anterior.  Entre una agitacin y la otra acta como un reactor de platos.

 Hay diseos en los cuales hay un control de

temperatura (termocoupla en el medio) con el cual se aumenta o se disminuye la rotacin del tambor de acuerdo al aumento o disminucin de la T.

SSF INTERMITENTE MEZCLADO CON AIREACION FORZADA

 Lechos empacados con aire acondicionado

fluyendo a travs de ellos.  Agitacin peridica  Roco de agua cuando se requiera  Alto rango de capacidades (Kg Ton) segn esterilidad

SSF INTERMITENTE MEZCLADO CON AIREACION FORZADA

PROCESOS NO ESTRILES  Koji rotatorio automtico
Usado en Asia para la fabricacin de salsas de soya Control computacional de T y flujo de aire y agitacin Inoculacin ex-situ Rectangular con circulacin de aire a travs del medio con agitacin peridica Simple y bsico

SSF INTERMITENTE MEZCLADO CON AIREACION FORZADA

Koji rotatorio automtico

SSF INTERMITENTE MEZCLADO CON AIREACION FORZADA

 Grupo INRA en Dijon (Francia) T y humedad del medio reguladas con T, humedad relativa y flujo de aire Roco de agua y agitacin peridica Mediciones on-line de la masa de medio Estimacin automtica de la perdida de masa debido a la respiracin Bomba de inoculacin y agua de suministro. Software especializado para el control del acondicionamiento del aire Modelo matemtico para mantener la humedad del medio Pasterizacin in-situ Facilidad de escalado

SSF INTERMITENTE MEZCLADO CON AIREACION FORZADA

PROCESOS ESTRILES  Pequeos sin aplicacin industrial publicada  Necesarios por:
Legislacin en algunas industrias Altos tiempos de cultivo por bajas velocidades de crecimiento de los microorganismos utilizados

 Wageningen University (Holland ) Escala piloto Para biopesticida Sustrato de granos de cereales hmedos Recipiente cnicomezclado con una cinta en la pared Esterilizable in-situ con vapor Sensores de temperatura a lo largo del lecho

SSF INTERMITENTE MEZCLADO CON AIREACION FORZADA

 Durand Planetary mixing device Manejado con un micro-computador Fed-Batch Produccion de conidios para control biologico No existen escalados

SSF INTERMITENTE MEZCLADO CON AIREACION FORZADA

 Durand

DIFERENCIAS ENTRE REACTORES SSF

REFERENCIAS
1. 2. 3.

4.

Durand A., Bioreactor designs for solid state fermentation, Biochemical Engineering Journal 13 (2003) 113125 Pandey Ashok, Solid-state fermentation, Biotechnology Division, Regional Research Laboratory, Biochemical Engineering Journal 13 (2003) 8184 Raghavarao K.S.M.S, Ranganathan T.V, Karanth N.G, Some engineering aspects of solid-state fermentation, Biochemical Engineering Journal 13 (2003) 127135 Suryanarayan Shrikumar, Current industrial practice in solid state fermentations for secondary metabolite production: the Biocon India experience, Biochemical Engineering Journal 13 (2003) 189195