Que agente etiolgico en base a este estudio de laboratorio cree que sea el agente causal por comer una

cuarta parte del alimento que est en la primera parte del examen
B. Material

o o o o o o o

Matraces Erlenmeyer. Pipetas estriles de 10 mL y 1 mL. Gradillas. Tubos de ensayo de 16 x 160 mm. Asa de cultivo. Placas de Petri de 90 mm. Estufa de cultivo. Bao Maria.

C. Medios de cultivo y reactivos

Caldo de cultivo pH 8 Agar Salmonella-Shigella (S-S) Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato (Xylose Lysine Desoxycholate: XLD) Agar MacConkey Agar lisina hierro (Lysine Iron Agar: LIA) Agar TSI Kligler Caldo Urea

D. Fases del aislamiento e identificacin

1. 2. 3.

Filtracin de Membrana y Preenriquecimiento en medio lquido. Aislamiento diferencial sobre medios slidos selectivos. Confirmacin bioqumica de las colonias sospechosas.

En condiciones aspticas, se utiliza un filto de membrana de 0,45 m de tamao de poro que se coloca en el portafiltros de la rampa de filtracin de vaco.

Se coloca el embudo del filtro previamente esterilizado.

Se inicia la filtracin de los 100 mL de agua.

Una vez finalizado, se recoge el filtro con unas pinzas estriles y se coloca dentro de un matraz con Caldo de Cultivo pH 8.

Se incuba el matraz a 37C durante 1-5 das.

F. Fase 2.-Aislamiento diferencial en medios slidos selectivos

A partir del cultivo obtenido en el preenriquecimiento sembrar, por duplicado, con asa de cultivo sobre: Agar (S-S)

Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato (Xylose Lysine Desoxycholate: XLD)

Agar MacConkey

COLONIAS SOSPECHOSAS AGAR XILOSA-LISINA-DESOXICOLATO (XLD): CRECIMIENTO CARACTERSTICO

(Hacer clic sobre cada placa para aumentar)

COLONIAS SOSPECHOSAS AGAR MAC CONKEY: CRECIMIENTO CARACTERSTICO (Hacer clic sobre cada placa para aumentar)

COLONIAS SOSPECHOSAS
Le aconsejamos que se ejercite en la interpretacin de las imgenes comprobando su correcta interpretacin haciendo clic en cada pregunta en la letra azul que antecede a la opcin que le parezca correcta. Debe selecionar las placas de los distintos medios selectivos en las que observe un crecimiento tpico de

Ejemplo 1

Ejemplo 2

Ejemplo 3

Agar S-S
(Hacer clic sobre cada placa para aumentar) En este caso:

Agar XLD
(Hacer clic sobre cada placa para aumentar) En este caso:

Agar MacConkey
(Hacer clic sobre cada placa para aumentar) En este caso:

a) Placa seleccionada b) Placa no selecionada

Ejemplo 4

a) Placa seleccionada b) Placa no selecionada

Ejemplo 5

a) Placa seleccionada b) Placa no selecionada

Ejemplo 6

Agar XLD

(Hacer clic sobre cada placa para aumentar)

Agar XLD
(Hacer clic sobre cada placa para aumentar) En este caso:

Agar MacConkey

(Hacer clic sobre cada placa para aumentar)

En este caso:

a) Placa seleccionada b) Placa no selecionada

a) Placa seleccionada

En este caso:

b) Placa no selecionada

a) Placa seleccionada b) Placa no selecionada

Se trata de interpretar los resultados obtenidos en las siembras sobre agares selectivos en busca de colonias sospechosas . Para ello: 1. Observe las placas buscando colonias sospechosas de Shighella 1. Observe tambin las placas buscando colonias no sospechosas de Shigella 2. Conteste a las preguntas

(Hacer clic sobre cada placa para aumentar) Placa S-S1 Placa S-S3 Contestacin a las preguntas 1. Se han encontrado colonias sospechosas de Shigella en las placas de "agar Salmonella-Shigella": a) S-S4 Placa S-S2 Placa S-S4

AGAR (S-S)

b) S-S3, S-S2 c) S-S6, S-S4, S-S5 2. No se han encontrado colonias sospechosas de Shigella en las placas de Salmonella-Shigella: a) S-S1, S-S4 b) S-S1, S-S2, S-S3 c) S-S3

AGAR XILOSA-LISINA-DESOXICOLATO (XLD)

(Hacer clic sobre cada placa para aumentar) Placa XLD1 Placa XLD3 Contestacin a las preguntas 3. Se han encontrado colonias sospechosas de Shigella en las placas de Xilosa-Lisina-Desoxicolato: a) XLD4, XLD3 b) XLD1, XLD2 c) XLD1 4. No se han encontrado colonias sospechosas de Shigella en las placas de Xilosa-Lisina-Desoxicolato: a) XLD1 b) XLD2, XLD3, XLD4 c) XLD4, XLD3 Placa XLD2 Placa XLD4

(Hacer clic sobre cada placa para aumentar) Placa Mac1 Placa Mac3 Contestacin a las preguntas 5. Se han encontrado colonias sospechosas de Shigella en las placas de MaConkey: a) Mac2, Mac3, Mac4 b) Mac2 c) Mac2, Mac4 6. No se han encontrado colonias sospechosas de Shigella en las placas deMaConkey: a) Mac1 b) Mac4, Mac2 c) Mac4, Mac3, Mac1 Placa Mac2 Placa Mac4

AGAR MAC CONKEY

G. Fase 3.-Identificacin Bioqumica Esta identificacin se suele realizar en 2 subfases: Subfase 4A: Identificacin bioqumica inicial con unas pruebas determinadas: Generalmente, fermentacin de glucosa y lactosa (TSI), descarboxilacin de la lisina (LIA) y utilizacin de la urea. Subfase 4B: Identificacin bioqumica final con un sistema multipruebas: Generalmente con las 20 pruebas de la galera API20E. Esta subfase slo se realiza con las cepas seleccionadas en la subfase anterior.

Sembrar cada colonia en Agar Hierro Triple Azcar (TSI), con aguja de cultivo, primero en el fondo por picadura y luego, en la superficie inclinada por estra. Sembrar, por picadura en el fondo y por estra en la superficie inclinada del medio Agar Lisina Hierro (LIA). Sembrar, con asa de siembra en Caldo Urea. Incubar los tubos de TSI y Urea a 37 C durante 24 horas y los de agar LIA a 37 C durante 24-48 horas.

Le aconsejamos que se ejercite en la interpretacin de las imgenes comprobando su correcta interpretacin haciendo clic en cada pregunta en la letra azul que antecede a la opcin que le parezca correcta. Debe selecionar los tubos de las distintas prubas bioqumicas en las que observe una reaccin tpica de Shigella. Ejemplo 1 Ejemplo 2 Ejemplo 3 Ejemplo 4

Agar TSI
En este caso:

Agar TSI
En este caso:

Agar TSI
En este caso:

Agar TSI
En este caso:

a) Tubo seleccionado b) Tubo no selecionado

Ejemplo 4

a) Tubo seleccionado b) Tubo no selecionado

Ejemplo 5

a) Tubo seleccionado b) Tubo no selecionado

Ejemplo 6

a) Tubo seleccionado b) Tubo no selecionado

Agar LIA
En este caso:

Agar LIA
En este caso:

Agar LIA
En este caso:

Agar LIA
En este caso:

a) Tubo seleccionado b) Tubo no selecionado

Colonias

a) Tubo seleccionado b) Tubo no selecionado

a) Tubo seleccionado b) Tubo no selecionado

a) Tubo seleccionado b) Tubo no selecionado

Lectura de resultados de la confirmacin bioqumica inicial del supuesto prctico

TSI

LIA
7. Esta colonia debe ser:
Seleccionada Desechada

Colonia 1

8. Esta colonia debe ser:

Colonia 2 Seleccionada Desechada

9. Esta colonia debe ser:

Colonia 3 Seleccionada Desechada

10. Esta colonia debe ser:

Colonia 4 Seleccionada Desechada

11. Esta colonia debe ser:

Colonia 5 Seleccionada Desechada

12. Esta colonia debe ser:

Colonia 6 Seleccionada Desechada

13. Esta colonia debe ser:

Colonia 7 Seleccionada Desechada

Con las colonias seleccionadas en la identificacin bioqumica inicial se efecta lo siguiente: Criterios Si la confirmacin bioqumica ha resultado positiva para alguna de las cepas : Contestacin a las preguntas 18. El aislamiento e investigacin en la muestra del supuesto prctico ha dado como resultado: a) Presencia de b) Ausencia de

I. Resumen 100 mL de agua + 100 mL de Caldo de Cultivo pH 8 Incubar 37C/1-5 das - Agar Salmonella-Shigella (S-S) - Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato (Xylose Lysine Desoxycholate: XLD) - Agar MacConkey Seleccionar colonias tpicas - Agar TSI. Incubar 37C/24 horas

1 Filtracin de Membrana y Preenriquecimiento en medio lquido

2 Aislamiento diferencial sobre medios slidos selectivos.

3 Confirmacin Bioqumica

- Agar LIA. Incubar 37C/24 horas - Citrato de Urea Si dan resultados tpicos de Shigella, realizar Galeria API 20E. Expresar los resultados como:

4 Expresin de los resultados

Presencia de Shigella en 100 mL de agua Ausencia de Shigella en 100 mL de agua