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COURS DE

PARASITOLOGIE
DUT ABB
Notions gnrales

Auteur : Bruno Flamand,

IUT de Dijon

NOTIONS GENERALES DE PARASITOLOGIE Parasitisme: mode dassociation permanente ou temporaire de 2 tres vivants , lhte et le parasite, dont un seul, le parasite, tire bnfice. Lassociation est plus ou moins nfaste lhte. Cycle volutif: suite inluctable de transformations, se droulant dans un ordre prcis, que doit subir un parasite pour passer dune gnration la suivante, avec ou sans passage par le milieu extrieur. Cycle direct-parasite monoxne: volution parasitaire chez un seul hte Cycle indirect-parasite htroxne: volution parasitaire chez plusieurs htes successifs Ectoparasites: peau,cavits accessibles

Endoparasites: cavits profondes, tissus


Hte dfinitif: hberge forme adulte et multiplication sexue Hte intermdiaire: hberge forme larvaire et multiplication asexue

Quelques maladies parasitaires humaines et leurs agents:


Helminthiases (vers) Oxyurose: Oxyure Tniase: Taenia Distomatoses: Douves Protozooses (unicellulaires) Bilharzioses: Schistosomes Onchocercose et Filarioses lymphatiques: Filaires Ascaridiase: Ascaris

Paludisme: Plasmodiums
Amibiase: Amibe Entamoeba histolytica Toxoplasmose: Toxoplasma gondii

Leishmanioses: Leishmania
Maladie du sommeil: Trypanosome

Parasitoses intestinales et/ou hpatiques,:


Oxyurose, Ascaridiase, Trichocphalose, Taeniase, Bothriocphalose, Echinococcose, Distomatose, Bilharziose, Amibiase, Giardiase, Cyclosporose, Cryptosporidiose, Isosporose, Parasitoses uro-gnitales: Trichomonase, Parasitoses pulmonaires: Pneumocystose, Parasitoses sanguines, ou lymphatiques, ou du systme phagocytaire: Paludisme, Trypanosomiases, Leishmanioses, Toxoplasmose, Filarioses

EXTRAIT DE LA CLASSIFICATION DES PARASITES HUMAINS

PROTOZOAIRES Embranchement Apicomplexa Emb. Sarcomastigophora Classe Sporozoasida Classe Lobosasida


Plasmodiums Toxoplasma gondii* Sarcocystis hominis* Tsospora belli* Entamoeba histolytica* Amibes non pathognes*

Classe Zoomastogophorasida
Trypanosoma brucei Trypanosoma cruzi Leishmania* Giardia intestinalis* Chilomastix mesnili* Trichomonas vaginalis*

Cryptosporidium parvum *
Cyclospora cyanetensis

Emb. Microspora
Encephalitozoon *

Emb. Ciliophora
Balantidium coli*

*parasitoses autochtones: trouves en France, en rgion tempre

METAZOAIRES Embranchement Nmathelminthes Classe Nmatodes Espces Ovipares Trichuris trichura* Entrobius vermicularis* Ascaris lumbricoides* Ankylostoma duodenale* Necator americanus* Strongyloides stercoralis* Toxocara canis/cati* Espces Vivipares Trichinella spiralis* Wuchereria bancrofti Brugia malayi Loa Loa Onchocerca volvulus Dracunculus mdinensis

METAZOAIRES

Embranchement Plathelminthes Classe Trmatodes (non segment) Fasciola hpatica* Dicrocoelium dendriticum Classe Cestodes (segment) Taenia saginata* Taenia solium

Clonorchis sinensis
Schistosoma

Diphyllobothrium latum*
Hymenolepsis nana* Echinococcus granulosus* Echinococcus multilocularis*

METAZOAIRES Embranchement Arthropodes Classe Insectes

Ordre des Anoploures Pediculus corporis Pediculus capitis Ordre des Hmiptres Cimex lectularius Triatoma megista

Ordre des Siphonaptres Pulex irritans Xenopsylla cheopsis Ordre des Diptres Anophles Phlebotomus

Rhodnius prolixus

Glossina palpalis

COPROLOGIE PARASITAIRE Interrogatoire du patient indispensable: origine gographique, voyage, immuno-dpression, signes cliniques, Prlvement des selles: -2 3 fois sur quelques jours (raret parasitaire, mission discontinue dlments parasitaires) -viter alimentation riches en rsidus (lgumes verts, secs, fruits) -transport rapide au labo

-si examen diffr, fixation du prlvement (eau formole, milieu de conservation MIF) Examen parasitologique:
-macroscopique des selles -microscopique direct -microscopique aprs techniques de concentration classique -microscopique aprs techniques spciales selon renseignements

COPROLOGIE PARASITAIRE Examen macro: -aspect selles (dures, moules, molles, pteuses, liquides) -couleur, prsence de sang ou glaires -prsence dlments nutritionnels -prsence de parasites macroscopiques (vers ou fragments de vers: anneaux Tnia, ascaris, oxyures) Examen micro (x10 et x40) : -ufs ou larves de vers helminthes -kystes ou forme vgtative de protozoaires -en NaCl 9g/L ou en Lugol -coloration MIF (Merthiolate-Iode-Formol): fixation et conservation

TECHNIQUES DE CONCENTRATION ou DENRICHISSEMENT


But: obtenir partir dune grande quantit de selles, les lments parasitaires (oeufs, larves, kystes) trop rares lexamen direct dans un faible volume. #Techniques physiques de sdimentation ou de flottation: -Mthode de Faust,Ingalls (ufs Schistosoma,Ascaris, larves anguillule) Diluer 5g de selles dans 300 ml deau glycrole 0,5%, Raliser 3 sdimentations successives 1H, 45min., 30min.-en verre pied, en jetant le surnageant , et Examiner le culot de sdimentation. -Mthode de Willis (ufs Ankylostoma, Hymenolepsis)

Diluer les selles au 1/10 dans NaCl satur (25%), filtrer sur chinois, verser la solution dans un tube essai pour former un mnisque bomb, placer une lamelle dessus pendant 5 min., retirer la lamelle et dposer sur lame, observer rapidement avant cristallisation.

#Techniques physico-chimiques ou diphasiques (bonne techniques de concentration de tous les oeufs et kystes)

-MIF Concentration
Diluer les selles au 1/10 dans solution MIF, tamiser sur chinois, ajouter 10 ml de filtrat et 4 ml dther dans un tube centrifuger, agiter nergiquement, laisser reposer 2 min., centrifuger 1min. 1700 rpm Aprs centrifugation 4 couches superposes, ther lipidique, rsidus lipophiles, solution de dilution, et culot examiner. Retourner rapidement le tube, ajouter une goutte de NaCl 9g/L au culot, et examiner entre lame et lamelle. -Technique de Ritchie Diluer 3 g de selles dans 10 vol. de NaCl 9g/L, tamiser sur chinois, laisser sdimenter qq sec., centrifuger, liminer le surnageant, et resuspendre le culot dans NaCl 9g/L. Recommencer cette opration jusqu obtention dun surnageant clair, reprendre alors le culot dans formol 10% en NaCl, laisser reposer, agiter nergiquement, ajouter 3 ml dther, centrifuger 2min 1500 rpm, liminer le surnageant, examiner le culot entre lame et lamelle

TECHNIQUES SPECIALES et COLORATIONS SPECIALES -Mthode de Baermann et Lee modifie: recherche larves danguillules grce la proprit dhydro-thermo-tropisme positif des larves -Scotch-Test de Graham: mise en vidence ufs doxyures -Numration des ufs: permet parfois dapprcier le degr dinfestation par les vers adultes -Culture de protozoaires: amibes et flagells -Coloration de Ziehl-Neelsen-Henriksen-Pohlenz: mise en vidence des oocystes de Cryptosporidium -Coloration de Weber modifie: recherche des microsporidies

AUTRES EXAMENS PARASITOLOGIQUES Urines ufs de Schistosoma haematobium (et parfois S.mansoni) forme vgtative Trichomonas vaginalis (coloration MGG) LBA Pneumocystis carinii (coloration Gomori-Grocott) Toxoplasma gondii (coloration Giemsa modifi) Cryptosporidium (coloration Ziehl-Neelsen modifie, IF acridine orange) Prlvement gnito-urinaire Moelle osseuse, ganglions, suc dermique Trichomonas vaginalis (MGG) Leishmania (MGG)

EXAMEN PARASITOLOGIQUE DU SANG Principaux parasites recherchs: Plasmodiums, Microfilaires sanguicoles, Trypanosomes.

Examen direct: mobilit des Trypanosomes et Microfilaires


Frottis sanguin avec coloration MGG ou Giemsa Goutte paisse colore au Giemsa ANALYSES IMMUNOLOGIQUES PARASITAIRES Toutes les techniques: IFI, ELISA, Agglutination, Immunodiffusion, soit pour la recherche dAg parasitaires, soit pour la srologie

Moins pratiqus mais existants, et indispensables (et parfois seule mthode de diagnostic) pour certaines parasitoses (Ex: srologie toxoplasmose)
ANALYSES de BIOLOGIE MOLECULAIRE