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03/16/2012

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Analyses microbiologiques de l'eau à l'hôpital

Dr. Dominique Blanc, MER, PD
Laboratoire d'épidémiologie
Service de Médecine préventive hospitalière

L’eau à l’hôpital

Consommation par patient: 750 - 1000 litres par jour

Consommation domestique par personne: 150 – 200 litres par jour

Les différentes eaux et leur utilisations
• Eaux potables • Eaux techniques • Eaux stériles conditionnées • Eaux bactériologiquement maîtrisées

soins: douche préopératoire. plâtre Alimentation humaine Alimentation humaine Eaux conditionnées en bouteilles Eaux des fontaines réfrigérées . lavage des mains.Eaux potables (froide et chaude) Types Eau du réseau d’adduction Utilisation Alimentation humaine. hygiène corporelle. lavement et goutte-à-goutte rectal. lavage gastrique.

Glace alimentaire et non alimentaire Refroidissement de l'air ou de système .Eaux techniques Type • eau pour la climatisation • eau pour la production de glace • Eau des tours de refroidissement Utilisation Humidification de l'air.

Eaux stériles conditionnées Conforme à l’essai de stérilité (Pharmacopée) Type • eau purifiée (bidistillée) stérile Utilisation Destinées aux soins et à la production de médicaments non injectables Préparation des médicaments injectables Utilisée à la pharmacie • eau stérile qualité injectable • eau stérile pour préparation des injectables .

Eaux bactériologiquement maîtrisées • • • • • Eau Eau Eau Eau Eau purifiée hautement purifiée de dialyse de rinçage des fibroscopes pour la stérilisation centrale .

Eau purifiée • Pharmacopée Européenne: eau utilisée pour la fabrication de médicaments non stériles • Norme: <102 germes aérobies mésophiles revivifiables /ml .

Eau hautement purifiée • Pharmacopée Européenne: eau utilisée pour la fabrication de médicaments non stériles lorsqu'une eau de qualité élevée est nécessaire • Norme: <10 germes aérobies mésophiles revivifiables / 100 ml .

Eau pour dilution des solutions concentrées pour hémodialyse Pharmacopée Européenne (6.0) • Nombre de germes aérobies viables totaux: <102 microorganismes/ml = eau purifiée ! .

European Best Practice Guidelines for Haemodialysis Eau hautement purifiée • Recommandée pour: – Hémodialyse conventionnelle – Hémodialyse conventionnelle à haut flux • Obligatoire: – Hémofiltration en ligne Nephrol Dial Transplant 2002. 17 (suppl 7):45-62 .

Eau de rinçage des L/D. norme 15883-1 • chap. 100 ml d’eau de rinçage finale – Pas de quantité minimale admissible !!! – Le but est de suivre les tendances de la biocontamination et de définir ses propres niveaux d'actions .2. 6.4: • Effectuer un dénombrement de la flore bactérienne mésophile aérobie viable – Filtration sur membrane d’un échantillon de min.4.

2.norme 15883-4 • chap.Eau de rinçage final des L/D d’endoscopes thermolabiles .3 et 6.3 – <10 cfu/ 100 ml de bactéries mésophile aérobie viable – Absence de Pseudomonas aeruginosa / 100 ml – Absence de Legionella / 100 ml – Absence de Mycobacteria / 100 ml . 4.9.

guideline Euro. OFSP Eau hautement purifiée Germes totaux Eaux pour dialyse conventionnelle Eaux pour hémodiafiltration Germes totaux Germes totaux Eau de rinçage des L/D Germes totaux. fibroscopes légionelles.Surveillance microbiologique des eaux à l'hôpital Type d'eau Eau purifiée Recherche Germes totaux Normes Pha. Eur. Pseudomonas. Pha. mycobactéries Eau potable Eau des tours de refroidissement Légionelles Légionelles . OFSP Rec. Euro. Pha. guideline Norme ISO 15883-4 Rec. Eur. Eur.

Comment mesurer le nombre de germes ? Quelques notions de microbiologie… .

non cultivable Compte viable Morte Compte total .Enumération des germes Compte cultivable ou revivifiable Viable. cultivable Viable.

cultivable Viable. non cultivable Colorations biochimiques Morte Microscopie .Méthodes de dénombrement Culture : une particule donne naissance à une colonie: ufc (ou cfu) Viable.

air.Germe viable non cultivable • Métabolisme de la bactérie trop différent de celui qu’elle devrait utiliser dans le milieu de culture (stress) • Pas de croissance sur le milieu de culture (manque facteur de croissance) • Pas de croissance dans les conditions de culture (T . durée …) Influence sur le dénombrement des germes!!! .

Température et croissance bactérienne • Psychrophiles: 10 C (-5 à 15 C) • Psychrotrophes: 25 C (035 C) • Mésophiles: 35 C (20 à 40 C) • Thermophiles: 45-50 C .

méthode incorporation Milieu KAB.Effet du milieu. Zbl Bakt. 185:112 . 1987. méthode étalement Milieu R2A. méthode incorporation Korsholm et Sogaard. de la méthode d’ensemencement et de la durée d’incubation sur le dénombrement de germes totaux dans l’eau minérale 10'000 1'000 100 10 Incubation 2 versus 5 j: 10 X Milieux KAB versus R2A: 100 X Milieu R2A. Hyg. B.

Croissance des germes: fonction des conditions de culture • Composition du milieu (pauvre.. riche.) • Température d’incubation • Atmosphère d’incubation • Durée d’incubation .

c'est sa variation au cours du temps qu'il faut suivre • Nécessite que le laboratoire utilise toujours la même méthode .Enumération des germes • Aucune méthode ne permet de définir une mesure absolue • Cette mesure relative est un indicateur • Comme tout indicateur.

dans une matrice de polymères produite par l'organisme lui-même. médecine.) .. industrie. protozoaires…) attachés à une surface. algues..Biofilm Assemblage d'organismes microscopiques (bactéries. Formation de biofilm: sur n'importe quelle surface qui est exposée à un liquide non stérile (environnement.

Répartition des germes dans un volume d'eau Culture de laboratoire Prélèvement d'environnement .

Charge faible en microorganismes: Filtration sur membrane • Volume: 10 ml – 1000 ml • Déposez la membrane sur la surface d’une plaque gélosée • Dénombrez les colonies qui se sont développées Pharmacopée Européenne .

2 ml – étalez l’échantillon sur le milieu gélosé – Si nécessaire. Pharmacopée Européenne .Charge moyenne en microorganismes: Dénombrement sur plaques par étalement en surface – Volume: 0.1 – 0. diluez l’échantillon afin d’obtenir un nombre présumé <300 colonies.

005 Seuil Pha Eur Eau hautement purifiée Seuils CHUV Seuil Pha Eur Eau purifiée 1 2 1 10 10 20 0.1 10 20 100 100 200 400 500 100 200 400 0.05 0.Quel volume d'eau analyser ? Volume 200 μl 20 ml 100 ml 200 ml 1 0.5 1 2 5 10 20 100 1000 cfu/ml cfu/plaque 1 2 4 20 200 .

EN ISO 19458 Qualité de l’eau: Echantillonnage pour analyse microbiologique • Plan et points de prélèvements – Représentatifs de toute la variation géographique et temporelle – L’hétérogénéité du système doit être prise en considération • Ex. les point d’un réseau ne sont pas équivalents car il peut exister des culs-de-sac et des sections où le débit est réduit .

) Traitement Patient . filtration etc.Quelle eau analyser ? Eau de ville (100 cfu/ml) Dialysat frais Eau purifiée Filtre Dialysat utilisé Concentré Dialyseur (osmose inverse.

Technique de prélèvement EN ISO 19458 Qualité de l’eau: Échantillonnage pour analyse microbiologique • Formation du personnel effectuant les prélèvements • Flacons de prélèvements: propres et stériles (si réutilisé: attention à ce que le processus de lavage/désinfection ne laisse pas des résidus de désinfectants) .

Technique de prélèvement EN ISO 19458 Qualité de l’eau: Échantillonnage pour analyse microbiologique • Prélèvement à un robinet: Type d’eau Eau dans le réseau principal Eau telle qu’elle parvient au robinet Eau telle qu’elle est utilisée Retirer les accessoires et les inserts Oui Oui Non Désinfecter Rincer Oui Oui Non Oui Non (bref) Non Désinfection: flambage. solution alcoolique ou chlorée Rinçage: abondant (???) ou bref pour annuler les effets de la désinfection du robinet .

le bouchon du flacon ne doit pas entrer en contact avec aucun élément (doigts. Ne pas utiliser cet échantillon d’eau pour la mesure de la T ou autre paramètre mesuré sur site . sol. dents) – Laisser un volume d’air dans le flacon de sorte à permettre l’agitation appropriée avant l’analyse – Fermer le flacon immédiatement. poche.Technique de prélèvement EN ISO 19458 Qualité de l’eau: Échantillonnage pour analyse microbiologique • Prélèvement à un robinet: – Veiller à ce que les échantillons soient prélevés de façon aseptique avec des mains propres ou en utilisant des gants stériles (désinfection des mains et port de gants non stérile). en protégeant l’échantillon contre les courants d’air et les éclaboussures – Pendant le remplissage.

heure et site du prélèvement Nom de la personne ayant prélevé l’échantillon Nature de l’échantillon Objectif de l’analyse (choix des méthodes) Autres si nécessaires (T .Formulaire de prélèvement EN ISO 19458 Qualité de l’eau: Échantillonnage pour analyse microbiologique • Identifier et étiqueter le flacon de manière unique • Remplir le formulaire de prélèvement avant ou immédiatement après le prélèvement – – – – – – – Nom et adresse du client Liste des paramètres à analyser Date. …) .

.

Transport et conservation EN ISO 19458 Qualité de l’eau: Échantillonnage pour analyse microbiologique • Transport – Protéger les prélèvements contre les rayonnements solaires (effet de stérilisation…) – Réfrigérer les échantillons (mais pas les congeler! ->mort de >99% des cellules) • Si la microflore se multiplie: la vitesse de multiplication est d’autant plus grande que la T est élevée • Si la microflore est en train de mourir. plus la fiabilité des résultats est diminuée – < 8h. (le jour même) . la réaction est accélérée lorsque la T augmente • Délai – Plus le délai est long entre le prélèvement et l’analyse en laboratoire.

Qualité de l’eau de rinçage final des L/D d’endoscopes thermolabiles (ISO 15883-4) • Bactéries mésophiles aérobies viables: – Avant la mise en production – Régulièrement après la mise en production: • Chaque semaine jusqu’à ce qu’il ait été établi que la qualité de l’eau est régulière. Legionella et mycobacteria – Avant la mise en production – Au moins annuellement .aeruginosa. puis à des intervalles plus étendus • P.Fréquence des tests Ex.

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