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Chapitre 3/ PREPARATION DE LA SUSPENSION MERE Sance 1 : DEFINITIONS ET RECEPTION DES ECHANTILLONS INTRODUCTION/ Le prlvement effectu dans le but de raliser

une analyse microbiologique est une tape trs importante de la chaine analytique. Il est primordial de s'assurer de l'intgrit et de la reprsentativit des chantillons. La mthode de prlvement peut influencer grandement les rsultats obtenus. Cette mthode comprend les tapes de l'arrive des chantillons au laboratoire de microbiologie jusqu'au broyage des chantillons, c'est dire jusqu' l'obtention de la suspension mre. Les chantillons doivent tre en tout temps manipuls en respectant l'ensemble des rgles d'asepsie de manire viter toute contamination. 1-DEFINITIONS/ 1-1- suspension mre : appele aussi dilution primaire, c'est une solution ou mulsion ou suspension obtenue aprs qu'une quantit pese ou mesure du produit analyser ou de l'chantillon pour essai prpar partir de ce produit ait t mlang si ncessaire en utilisant un homognisateur et en observant des prcautions appropries avec neuf fois la mme quantit de diluant en laissant les grandes particules se dposer, si elles existent. Remarque 1:Dans certains cas, il peut tre ncessaire d'ajouter davantage de diluant, notamment pout les produits donnant une suspension mre1/10 trop visqueuse ou trop paisse. On devra tenir compte par la suite des oprations et dans l'expression des rsultats. -Remarque 2:Cette premire dilution permet une limite de dtection minimum de 10UFC (unit formant colonie) par gramme. S'il est souhaitable pour certains dnombrements dans certains produits de descendre au-dessous de ce seuil, il est possible de raliser une suspension avec une quantit infrieure de diluant. Par contre, il doit tre convenu que l'ensemencement de cette suspension peut ventuellement entrainer des difficults lies au dsquilibre du rapport inoculum/milieu.

1-2- dilutions dcimales: Ce sont des suspensions, des mulsions ou des solutions obtenues en mlangeant un volume dtermin de la dilution primaire avec neuf fois le mme volume de diluant appropri et en rptant cette opration sur chaque dilution ainsi prpare jusqu' obtention d'une gamme de dilutions dcimales appropries pour l'ensemencement des milieux de culture.

2-MATERIEL ET EQUIPEMENTS DE BASE/ - Balance analytique de porte suffisante avec prcision de lecture de 0.1g ou appareil de dilution automatique de type dilumat facultatif - Bouillons d'enrichissement ou diluants en volumes de 225ml+ou- 2% ou autres volumes selon les cas - Couteaux, fourchettes, spatules, forceps, ciseaux, scalpels, cuillres striles. - Homognisateur de type pristaltique de typeSTOMACHER avec des sacs striles en plastique. - Pipettes bactriologiques striles de 10.0ml.

3-RECEPTION, ENTREPOSAGE ET DECONGELATION DES ECHANTILLONS

3-1- Vrification des conditions de transport et de l'intgrit des contenants: Lorsque les dlais de transport sont inferieurs ou gaux 36 heures et la temprature de conservation inferieure ou gale 4C des chantillons sont adquats, vrifier les contenants afin de dtecter tout dfaut physique. Inspecter minutieusement les sacs de plastique, les bouteilles, et des autres contenants afin de vrifier s'il y a prsence de trous, de fissures, ou de pertes de liquides. Vrifier si l'eau de la glacire ne s'est pas infiltre dans l'chantillon. S'assurer que les sacs de plastique soient trs bien rouls et ferms hermtiquement. N'importe laquelle des irrgularits cites invalide l'chantillon pour l'analyse microbiologique et le client concern doit tre inform pour procder un autre prlvement si ncessaire. 3-2-Identification et enregistrement des chantillons: S'assurer que chaque chantillon est tiquet et accompagn d'une demande d'analyse lui attribuant un numro de laboratoire et renfermant toutes les informations y tant rattaches. 3-3- Entreposage des chantillons: Dans les conditions optimales, on doit toujours analyser les chantillons immdiatement, ou dans le plus cours dlai aprs leur rception au laboratoire. Si exceptionnellement l'analyse doit tre reporte, entreposer les chantillons -20C, la temprature de la pice ou +4C selon la nature de l'chantillon. L'interprtation des rsultats doit tenir compte de cette priode d'entreposage. Les chantillons d'aliments prissables ne doivent pas tre entreposs plus de 36 heures une temprature variant de 0 4C entre le prlvement et l'analyse au laboratoire. Les produits non prissables, les conserves ou les aliments secs, doivent tre conservs la temprature de la pice dans un endroit rserv cet effet Les aliments reus congels doivent tre entreposs -20C jusqu'au moment de l'analyse. Afin de maintenir la chaine de froid, les chantillons plus de 15 minutes hors du rfrigrateur. 3-4- Dconglation des chantillons: Habituellement,les chantillons sont dcongels 2 -4 C pendant un maximum de 18 heures.Si une dconglation rapde est ncssaire,ils peuvent etre dcongels moins de 40C pour une dure maximale de 15 miunutes.Dans tel cas si l'chantillon est dcongel rapidement dans un bainmarie,une agitation continuelle doit etre applique