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DISCIPLINA: Biologia Celular PROFESSOR: Ulisses Cesar de Araujo ROTEIRO DE AULA PRTICA TTULO Observao das estruturas celulares

por microscopia ptica INTRODUO Existem dois nveis de organizao das clulas- o nvel procaritico que inclui os domnios Archae e Eubacteria e o nvel eucaritico - Eucaria, ao qual pertencem todos os demais seres vivos (protistas, fungos, animais e vegetais). Entre os procariotos h uma evidente simplicidade estrutural e reprodutiva, enquanto que a organizao eucaritica claramente evoluiu com o aumento de complexidade estrutural - aumento de tamanho e compartimentao -, aperfeioamento de funes metablicas com diviso de trabalho e especializao (organelas), alm da aquisio de genomas grandes, com enorme quantidade de DNA extra. OBJETIVOS Identificar a diversidade entre clulas; Analisar estruturas em diversos tipos de clulas; Utilizar corretamente o microscpio (figura identificando suas partes- em anexo), observando os cuidados necessrios sua conservao Avaliar a importncia do microscpio como instrumento imprescindvel observao de estruturas celulares. MATERIAL microscpio ptico bquer contendo gua da torneira conta-gotas papel toalha ou de filtro soluo de azul de metileno a 1% vidro de relgio ou placa de Petri lminas e lamnulas soluo salina a 8%

- infuso de alface ou gua natural - ramo de Eldea (Anacharis canadensis)

PROCEDIMENTOS A - Observao das clulas da eldea


Material: - microscpio, lmina, lamnula - folhas de Elodea sp. - gua, soluo salina 8% - Papel de filtro Procedimento: 1 Retire uma folhinha da planta aqutica (Elodea sp.), e utilizando gua, prepare uma lmina para observar ao microscpio. 2 Use a lente de pequeno aumento para ter uma idia geral da folha e, em seguida, coloque um aumento maior. Observe os corpsculos verdes (cloroplastos) que preenchem as clulas. Tente localizar o ncleo e o citoplasma. Fique atento para ver se os cloroplastos se movimentam (ciclose).

Faa o desenho cientfico deste tecido vegetal.

3 Para evidenciarmos a ocorrncia de osmose, basta pingar uma gota de soluo salina 8% sobre um bordo da lamnula, e no lado oposto, utilizarmos um pedao de papel de filtro para substituirmos a gua pela soluo salina 8% entre a lmina e a lamnula. Observe as modificaes sofridas pelas clulas deste tecido, faa o desenho cientfico e tire suas concluses.

B - Observao das clulas da mucosa bucal


Material: - microscpio, lmina, lamnula. - papel filtro, swab - corante (azul de metileno)

a) Bocheche com gua potvel a fim de limpar a cavidade bucal; b) Como auxlio de uma esptula ou swab, raspe a face interna (mucosa) da bochecha; c) Despreze o material mucoso obtido e raspe a novamente, na mesma regio; d) Deposite o material coletado em uma lmina limpa e, em seguida, pingue uma gota de soluo de azul de metileno sobre a mesma; e) Cubra o material com uma lamnula limpa e deixe corar por 10 minutos; f) Coloque a lmina entre dois discos de papel de filtro dobrado, e numa superfcie perfeitamente plana, proceda ao esmagamento do material, pressionando a lamnula como o dedo polegar; g) Leve a preparao ao microscpio e movimente a platina, percorra o campo a fim de localizar as clulas. Faa observaes com as objetivas de mdio e maior aumentos;
Observe ao microscpio e procure identificar as clulas. Conseguiu observar as clulas? Qual o seu aspecto geral? Observou o ncleo? Faa o desenho cientfico da clula observada. Desenhe o que voc observou:

C - Observao da infuso de alface / gua natural A infuso de alface deve ser preparada macerando-se uma pequena folha de alface em gua natural. Deixe repousar por dois ou trs dias em local ventilado, protegido da luz direta do sol, para que flora. Algumas fontes de guas naturais so naturalmente ricas em germens tornando desnecessrio o enriquecimento com a alface, porm podemos tentar observar estes mananciais diretamente. Nesse caso, centrifugue uma pequena amostra de gua para decantar/concentrar os organismos. a) Coloque uma gota da infuso de alface ou de gua natural sobre a lmina. Em seguida, faa a disperso do material, com o auxlio do estilete. b) Cubra a preparao com a lamnula; c) Leve a lmina ao microscpio e observe a preparao com as objetivas de 4x, 20x e 40x; d) Caso observe estruturas menores mveis, pingue uma gota de leo de imerso na lamnula e utilize a objetiva de imerso para identificao dos procariotas. e) Desenhe as clulas observadas. (compare com as clulas contidas nas pranchas do final do documento). ATIVIDADES 1. Identifique as clulas observadas em: procariticas ou eucariticas, animais ou vegetais, descrevendo diferenas entre estes tipos celulares. 2. Entre os unicelulares, podemos destacar sua diversidade em mecanismos utilizados para locomoo, sobretudo nos protozorios. Que estruturas celulares so responsveis pela locomoo nos protozorios? 4. A eldea representa um vegetal. Que caractersticas so peculiares s suas clulas? 6. Explique a importncia da organizao compartimentada, caracterstica das clulas eucariticas;

ANEXO Partes do Microscpio ptico de Campo Claro

Partes que compem o microscpio

1. Oculares: contm as lentes oculares, as quais fornecem um poder de aumento de 10x a 15x, geralmente.
por aqui que voc olha atravs.

2. Revlver: segura as lentes objetivas e pode ser girada facilmente para mudar o aumento. 3. Lentes objetivas: geralmente, h trs ou quatro lentes objetivas em um microscpio, consistindo de poderes
de aumento de 4x, 10x, 40x e 100x. A fim de obter o aumento total de uma imagem, voc precisa multiplicar o aumento das lentes oculares pelo aumento das lentes objetivas. Portanto, se voc utilizar em conjunto uma lente ocular de 10x com uma lente objetiva de 40x, o aumento total de 10 x 40 = 400 vezes.

4. Presilhas: seguram a lmina no lugar. 5. Platina: uma plataforma plana que suporta a lmina sendo analisada. 6. Diafragma: controla a intensidade e o tamanho do cone de luz projetado sobre o espcime. Como uma regra
geral, quanto mais transparente o espcime, menos luz requerida.

7. Fonte de luz: projeta luz para cima atravs do diafragma, lmina e lentes. 8. Base: suporta o microscpio. 9. Condensador: ajuda a focar a luz sobre a amostra analisada. particularmente til quando utilizado em
conjunto com as lentes objetivas mais poderosas.

10. Brao: suporta o microscpio quando carregado. 11. Boto macromtrico: quando o boto girado, a platina movida para cima ou para baixo, a fim de promover
um ajuste grosso de foco.

12. Boto micromtrico: utilizado para um ajuste fino de foco.


Como utiliz-lo O Microscpio o instrumento destinado a observar seres e coisas to pequenas que se tornam invisveis a olho nu. Fundamentalmente, o microscpio est formado por um conjunto de peas mveis (parte mecnica) e por uma associao de lentes (parte ptica). A partir do momento em que o homem aprendeu e conseguiu polir a primeira lente, tornou-se possvel o descobrimento de um mundo at ento inimaginado, povoado de numerosos e variados seres. A princpio, o microscpio era formado por uma simples lente de aumento. Posteriormente, a associao de lentes tornou-se possveis maiores aumentos e, com isto, o homem comeou a espionar aquele mundo at ento invisvel, descobrindo mais e mais, medida que a tcnica no preparo das lentes e a utilizao de corantes evoluam. Hoje em dia, no s usamos os microscpios comuns com lentes e luz, mas tambm microscpios eletrnicos que se utilizam de campos eletromagnticos e feixes de eltrons, conseguindo com esta nova tcnica, aumentos que ultrapassam a 100.000 vezes. um mergulho no mundo do infinitamente pequeno.

Repare, quanto maior for o aumento, menor ser a rea observada. Toda vez que for observar alguma coisa ao microscpio, use sempre a objetiva de menor aumento em primeiro lugar, pois ela lhe dar maior viso do material. Em seguida use o segundo aumento. Eleve o canho e troque a objetiva girando o revlver e torne a focalizar com todo cuidado. Ateno: O foco de uma lente, isto , o ponto em que a imagem aparece com maior nitidez, varia com a potncia da lente. Como temos objetivas com diferentes aumentos, isto significa que teremos diferentes focos. Quanto mais potente for a lente objetiva, tanto mais prxima ela estar da lamnula, aumentando assim o risco de quebr-la, portanto, cuidado!

Ateno: A objetiva 100x dever ser usada em microscopia de imerso, isto , coloca-se sobre a lmina uma gota de leo de cedro e, sobre esta gota, mergulha-se a objetiva. A funo do leo de cedro proporcionar maior iluminao ao canho. Em termos de formao de imagem fundamental entendermos o significado de 3 conceitos muito importantes, que so o poder de ampliao, o poder de resoluo e o limite de resoluo. Poder de ampliao: capacidade de um aparelho aumentar n vezes uma imagem. Na microscopia dado pelo produto entre a ampliao das oculares e a ampliao das objetivas. Poder de resoluo: capacidade de um aparelho fornecer imagens distintas de dois pontos distintos. Limite de resoluo: distncia mnima a que dois pontos podem estar para o aparelho os mostrar individualizados. O que determina a riqueza dos detalhes da imagem fornecida por um sistema de imagens o seu poder de resoluo e no o poder de ampliar o tamanho dos objetos. A capacidade de aumentar s tem valor prtico se for acompanhado de um aumento do poder de resoluo. Esse limite de resoluo depende essencialmente da objetiva, j que as oculares no podem acrescentar detalhes imagem, pois sua funo aumentar de tamanho essa imagem que projetada no seu plano de focagem pela objetiva.

O aumento de uma imagem vista ao microscpio ptico sempre o produto dos aumentos fornecido pela ocular, multiplicado pelos aumentos fornecidos pela lente objetiva usada. Portanto, se voc estiver usando uma ocular de 10 X e uma objetiva de 40 X, a imagem observada estar _____________________ vezes aumentada.

Ateno: Em qualquer trabalho com o microscpio, de grande importncia uma iluminao adequada. Se o material estiver muito iluminado ou com pouca luz, no dar uma viso ntida e real. Tenha sempre em mente todos os recursos de que o microscpio dispe para se obter melhor contraste. Como montar uma lmina e observar ao microscpio a coloque sobre uma lmina limpa e desengordurada uma gota de gua; b tome uma lamnula, tambm limpa e desengordurada e encoste um dos lados na lmina, bem prximo da gota, de modo que o lquido se espalhe em toda extenso da lamnula; c agora, vagarosamente, v baixando a lamnula, s a soltando quando o ngulo formado pela lmina e lamnula for bem pequeno. Procedendo assim, voc evitar a formao de bolhas de ar que podero prejudicar o seu trabalho; d se houver excesso de gua por fora da lamnula ou se a lamnula estiver frouxa, deveremos absorver o excesso de gua com um papel de filtro. Ateno: Tenha o cuidado de fazer a montagem da lmina sem deixar nenhuma bolha de ar entre lmina e lamnula; em certas montagens isto ter grande importncia.

1) Agora coloque a lmina preparada no microscpio seguindo as etapas abaixo: a eleve o canho girando o parafuso macromtrico; b prenda a lmina com o material a ser observado nas pinas encontradas sobre a mesa de platina; c Acenda a fonte luminosa de modo que a luz reflita atravs da lmina, deixando o campo do microscpio bem iluminado; d gire o revlver e coloque a objetiva de menor aumento; e Gire o parafuso macromtrico at chegar bem prximo da lmina, (Ateno: Esta operao dever ser realizada, olhando pelo lado de fora e no pela ocular, pois assim procedendo voc evitar quebrar a lamnula, estragando o material e perdendo tempo); f olhando pela ocular, voc suspender vagarosamente o canho, at que consiga ver alguma coisa; g a focalizao final dever ser feita com o micromtrico, girando-o para frente e para trs at conseguir o ponto onde a imagem tem maior nitidez (o foco). h)Depois vai mudando a objetiva para a de 10x e depois para a de 40x, sempre observando.

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