VIRUS RESPIRATORIO SINCICIAL BOVINO (BRSV)

ETIOLOGA El Virus Respiratorio Sincicial Bovino (VRSB) es la causa de una neumona viral primariamente en ganado bajo los 6 meses de edad, en terneros de 1 ao y ganado adulto (Radostits et al., 2007). Este virus fue por primera vez detectado el ao 1970, y luego fue identificado en 1974 (Paccaud y Jacquier, 1970; Wellemans et al., 1970). Es un virus envuelto, posee una molcula de ARN de hebra simple, no segmentada y de sentido negativo (Murphy et al., 1999; Sharma y Adklakha, 2009). Pertenece al orden Mononegavirales, familia Paramyxoviridae, subfamilia Paramyxovirinae y al gnero Pneumovirus (Maclachlan y Dubovi, 2011). Los virus de la familia Paramyxoviridae son usualmente esfricos con un dimetro de 100-150 nm., poseen filamentos de varios micrmetros de largo. Tiene una bicapa lipdica que contiene protenas de la matriz y puntas de glicoprotenas (Sharma y Adklakha, 2009). Estas glicoprotenas son la protena G de 84 kDa responsable de la unin del virus a la clula blanco y la protena F de 20-48 kDa que tiene que ver con la entrada del virus a la clulas y su posterior diseminacin entre clulas por fusin celular, ambas son fundamentales en la patognesis de la infeccin. Contienen una nucleocpside con forma de espinas de pescado helicoidalmente simtrica, esta tiene 600-800 nm. de largo y 13 nm. de dimetro en el caso de los Pneumovirus (Murphy et al., 1999; Berrios-Etchegaray, 2011). Su genoma tiene un tamao de 15-16 kb y presenta 6 a 10 genes separados por secuencias conservadas no codificantes de trmino, poliadenilaciones y seales de inicio. El orden de genes es generalmente conservado dentro de la familia, los virus pertenecientes al gnero Pneumovirus contiene 10 genes los cuales

codifican 10 protenas, de las cuales la mayora son estructurales (Murphy et al., 1999). Antignicamente est relacionado con el virus respiratorio sincicial humano (VRSH) aunque no son serolgicamente idnticos. Tambin puede afectar a los bovinos los que pueden ser reservorios para este virus (Berrios-Etchegaray, 2011). Poseen un estrecho rango de hospedadores y han sido identificados solo en vertebrados, principalmente en mamferos y aves. Son lbiles al calor o a la desecacin y son destruidos fcilmente por desinfectantes y solventes lipdicos (Murphy et al., 1999).

EPIDEMIOLOGA El VRSB es el principal componente del Complejo Respiratorio Bovino (BerriosEtchegaray, 2011). Estudios en vacas lecheras, indican que el 90 % de las infecciones primarias ocurren en terneros y vaquillas; poco en ganado por sobre 2 aos, y todo el ganado en el rebao son seropositivos cuando tienen sobre 3 aos de edad (Radostits et al., 2007). Tambin la enfermedad ha sido reportada en distintas reas y bajo diferentes sistemas de manejo en sistemas lecheros y de carne (Paccaud y Jacquier, 1970). En las vacas lecheras, introducciones recientes de ganado joven pueden introducir la infeccin en el ganado local que no han tenido exposiciones previas al virus, o en los cuales su inmunidad, por infecciones previas, ha disminuido (Radostits et al., 2007). Los teneros lactantes de carne con anticuerpos VRSB calostrales no estn protegidos contra la infeccin, pero la incidencia y severidad de la enfermedad clnica est asociado inversamente a los niveles de anticuerpos maternos en teneros bajo los 3 meses. El alto porcentaje de reinfeccin ocurre mayormente en vacas durante su primera lactancia. Animales viejos pueden tener inmunidad ms efectiva debido a exposiciones previas (Radostits et al., 2007).

Tambin la enfermedad ocurren en terneros de carne lactantes de 1-8 meses de edad en pradera, con madres sin ninguna historia de estrs previo. Una ocurrencia comn es en teneros de carne destetados de 6-8 meses de edad despus de 2-3 semanas del destete y en confinamiento. Ganado de 1 ao en engorde a corral tambin son susceptibles (Radostits et al., 2007). La infeccin inaparente del ganado tambin es muy comn (Maclachlan y Dubovi, 2011). Encuestas seroepidemiolgicas en ganado de engorda resulto que la seroconversin del virus puede ocurrir por sobre el 70% de los animales 1 mes despus de su llegada. Animales con bajos ttulos para el virus presentan mayor riesgo, en cambio los que presentan altos niveles de anticuerpos sricos contra VRSB estn asociados a menor riesgo de una enfermedad respiratoria (Radostits et al., 2007). Hay evidencia de que el virus circula durante el verano y primavera a muy bajos niveles o simplemente no circula (Radostits et al., 2007). La infeccin se produce a menudo durante los meses de invierno cuando el ganado son mantenidos en condiciones de confinamiento, sin embargo, han habido importantes brotes en rebaos de vacas y teneros en verano (Maclachlan y Dubovi, 2011). La infeccin persistente en algunas vacas en el rebao puede ser un medio por el cual el virus sobrevive durante el verano, pero un estado estacionario de reinfeccin en vacas seropositivas a travs del ao a niveles bajos, puede mantener un reservorio de infeccin (Radostits et al., 2007). El virus se disemina rpidamente, probablemente a travs de aerosoles o gotas de excreciones del tracto respiratorio. Los anticuerpos prexistentes, que pueden derivar de manera pasiva desde la transferencia materna o de manera activa a travs de una infeccin previa o vacunacin, no previenen la replicacin y excrecin del virus, aunque los signos clnicos puede que sean menores (Maclachlan y Dubovi, 2011).

La tasa de morbilidad en el rebao de la enfermedad clnica puede variar desde 30-50% o mas alta, En el caso de la letalidad, la tasa es usualmente baja, 3-5 % pero puede ser ms alta (Radostits et al., 2007).

PATOGENIA El VRSB causa rinitis, traquetis, bronquitis, bronquiolitis y una neumona intersticial leve. En infecciones naturales, las lesiones principales son la bronquitis y la bronquiolitis en porciones craneoventrales del pulmn adems de enfisema y edema extendido por los pulmones. Estas zonas del pulmn estn pobremente ventiladas y se produce una hipoxemia arterial asociada a la alteracin de la ventilacin y perfusin (Radostits et al., 2007). La patognesis de la neumona aguda fatal por VRSB no es muy clara. Se producen lesiones exudativas o necrotizantes, bronquiolitis, atelectasia, edema intersticial y enfisema. La enfermedad es precedida de una enfermedad respiratoria leve, varios das antes, lo que sugiere que la hipersensibilidad puede jugar un rol en las lesiones pulmonares (Radostits et al., 2007). Presenta un perodo de incubacin entre 5 y 7 das (Berrios-Etchegaray, 2011). La etapa siguiente puede producirse una leve mejora de la enfermedad respiratoria leve y es asociada al comienzo de la enfermedad respiratoria ms severa. El anticuerpo IgE especifico del virus puede jugar un rol en la patognesis de la enfermedad severa, como parte de la reaccin de hipersensibilidad (Radostits et al., 2007). La enfermedad severa altamente letal est asociada a la degranulacin de mastocitos (por la unin de alrgeno-IgE-mastocito), los cuales producen cambios significativos en el tono muscular y la permeabilidad vascular del tracto respiratorio. Las sustancias liberadas son al menos, parcialmente responsables por el edema pulmonar, a travs de la vasoconstriccin y el aumento de la permeabilidad dada por la histamina. El efecto de la histamina en terneros y ganado joven, produce una alteracin de la funcin respiratoria, a travs de contraccin de la trquea y venas lo que produce hipertensin (Radostits et al., 2007).

Esto trae como consecuencia una predominancia de la respuesta de Th2, con liberacin preferencial de citoquinas inflamatorias en ausencia de una respuesta de las clulas T CD8. Esta respuesta anormal de las clulas Th2 con eosinofilia pueden ser reproducidas por inmunizacin con vacunas recombinantes que expresan solo la protena G del virus. Esta protena es una de las ms singulares entre las protenas virales como resultado de su alto grado de glicolizacin, una propiedad que puede ayudar a evadir la vigilancia inmunitaria y comprometer esfuerzo para desarrollar una vacuna efectiva (Maclachlan y Dubovi, 2011). Esta reaccin inflamatoria produce que los septos interalveolares e interlobulares a menudo queden fibrticos, hiperplasia de los neumocitos tipo II y del epitelio bronquiolar. Tambin se observan clulas gigantes multinucleadas o sincicios (Radostits et al., 2007; Ellis et al., 1996; Berrios-Etchegaray, 2011).

SIGNOLOGA Signos clnicos de infeccin en ganado ms viejo, particularmente aquellos que fueron expuestos previamente al virus, presentan signos menos severos. En casos ms de enfermedad leve, presentan fiebre, anorexia y descenso en la produccin de leche por 3-5 das. En vacas lactantes produce un considerable descenso de la produccin diaria de leche (Radostits et al., 2007). En brotes de enfermedad aguda, la enfermedad es ms severa. Se produce tos no productiva, disnea y descarga nasal bilateral. Fiebre entre 40-42 C, anorexia y descenso en la produccin de leche. En la auscultacin de los pulmones se escucha una respiracin ruidosa sobre la zona ventral lo que indica consolidaciones y sibilancias indicando bronquiolitis (Radostits et al., 2007).

DIAGNSTICO Es difcil obtener un diagnostico etiolgico definitivo, porque el virus es muy lbil en muestras de tejido y la deteccin del virus en especmenes es pobre, debido a tcnicas de laboratorio inadecuadas (Radostits et al., 2007).

Es importante no confundir con el Virus Sincicial Bovino que pertenece a la subfamilia Spumaviriane de la familia Retroviridae y que es un virus apatgeno para el bovino (Berrios-Etchegaray, 2011). La alta prevalencia de ttulos de anticuerpos y la necesidad de personal capacitado para procesar e interpretar las pruebas diagnosticas, ha obstaculizado el desarrollo de una rutina diagnostica. Un aislado exitoso del virus, de un caso tpico de la enfermedad es poco frecuente y puede tomar 11-21 das debido a la tarda aparicin de efecto citoptico (Radostits et al., 2007). El aislamiento del virus se confirma con la utilizacin de suero hiperinmune (Smith et al., 1975). Debido a todo estas dificultades, el aislamiento del virus no es comnmente recomendado como un acercamiento diagnostico (Radostits et al., 2007). La muestra ideal del virus es el aspirado transtraqueal en etapas tempranas de la enfermedad. La muestra tambin provee clulas para la tcnica de tincin de anticuerpos con inmunofluorescencia (IFA). El anticuerpo fluorescente es una de las pruebas ms rpidas, seguros y sensitivas para diagnosticar la infeccin (Radostits et al., 2007). La fluorescencia positiva est limitada a 2-4 das en corderos infectados experimentalmente con VRSB, tambin se pueden producir inmunofluorescencias no especficas cuando se examina material nasofarngeo (Thomas y Stott, 1981). El ensayo PCR es rpido, sensitivo y puede ser recomendado como mtodo de eleccin para el anlisis clnico. La presencia del virus puede ser determinada por el uso de PCR en muestras nasales tomadas en la fase aguda de un brote sospechoso y tambin en homogeneizados de rganos (Radostits et al., 2007; Quinting et al., 2007). El virus puede ser detectado y cuantificado en cultivos celulares con el RT-PCR y ensayos cuantitativos y competitivos de RT-PCR (Radostits et al., 2007). Una comparacin entre ELISA, inmunoensayo de captura de antgenos (EIA) e inmunofluorescencia indirecta (IIF) con RT-PCR. ELISA mostr tener una sensibilidad de 60% y especificidad de 100% comparado con RT-PCR. En el caso

de EIA e IIF tienen una sensibilidad de 47% y una especificidad de 99% y 97% respectivamente, comparados con RT-PCR (Brodersen, 2010). La inmunohistoqumica (IHC) tiene una ventaja por sobre la IIF y es que la tincin permanente muestra el antgeno a travs del microscopio en asociacin con las lesiones. La tincin usada es formalina la cual aborda el problema de labilidad de los tejidos y perdidas del antgeno (Haines et al., 1989). La prueba estndar para los anticuerpos VRSB es la prueba neutralizacin del virus. Lo ideal es usar muestras de enfermedad aguda y de animales convalecientes (Radostits et al., 2007).

TRATAMIENTO Antimicrobianos de amplio espectro por 3-5 das para neumona secundaria bacteriana. Recuperacin ocurre gradualmente en un periodo de 3-5 das. Tambin se pueden usar AINES pero no hay evidencia de que sea efectivo (Radostits et al., 2007).

PREVENCIN Y CONTROL Un acercamiento racional al control seria un buen manejo del rebao para minimizar los estresores como la inadecuada ventilacin. Los ingresos de nuevos animales al rebao deben ir primero a cuarentena por 2-3 semanas antes de mezclarlos con el rebao (Radostits et al., 2007). Calostro El calostro es importante para combatir las infecciones por su composicin posee inmunoglobulinas maternas, se ha evaluado el efecto del VRSB en terneros no alimentados con calostro y otro grupo alimentado con calostro, el resultado fue que los privados de calostro desarrollaron una enfermedad mas severa que los alimentados con calostro (Belknap et al., 1993). Sin embargo la presencia de

anticuerpos pasivos ha mostrado efectos negativos cuando son los terneros son vacunados (Radostits et al., 2007). Vacunas e inmunizacin Varias vacunas vivas modificadas e inactivadas estn disponibles para el control, pero hay algunas pruebas clnicas que estn evaluando la eficacia de la vacuna bajo condiciones naturales. Porque los terneros bajo 6 meses de edad son infectados ms frecuentemente por el virus a pesar de la presencia de anticuerpos calostrales, por lo tanto, existe necesidad de una vacuna que sea efectiva para los terneros (Radostits et al., 2007). Los intentos de vacunacin contra los virus respiratorios sinciciales comenzaron con el uso de una vacuna inactivada con formalina, esta no solo fall en prevenir la enfermedad si no que indujo una respuesta clnica exagerada a la infeccin natural en jvenes vacunados (Kapikjan et al., 1969). Se realiz un estudio para determinar si las vacunas inactivadas inducan la misma respuesta de anticuerpos que una vacuna viva modificada. Los terneros que recibieron la vacuna viva modificada produjeron un titulo ms alto de anticuerpos neutralizantes que los terneros que recibieron la vacuna inactivada. Sin embargo se han utilizado diferentes adyuvantes a las vacunas inactivadas con el objetivo de generar altos niveles de anticuerpos neutralizantes, proteger contra la infeccin natural e inducir la respuesta de linfocitos Th1 en vez de la Th2 (Brodersen, 2010). Existen vacunas combinadas como la CattleMaster 4 que contiene el VRSB como virus vivo modificado, el que induce una respuesta local por IgA y sistmica mediada por anticuerpos antiprotenas F y G, adems de la inmunidad celular. Esta vacuna no cruza la placenta, no elimina virus despus de su administracin, no es inmunosupresora ni abortiva. Se administran dos dosis separadas por 2 y 4 semanas. Se pueden vacunar a vacas gestantes (Berrios-Etchegaray, 2011).

La presencia de anticuerpos pasivos interfieren con la inmunizacin a travs de la vacunacin de terneros con vacunas inactivadas, por lo que las vacunas tienen que ser efectivas y sobrepasar el efecto inmunosupresivo de los anticuerpos calostrales (Radostits et al., 2007). Para solucionar esto, las investigaciones de los ltimos aos se han centrado en utilizar vacunas intranasales contra el VRSB, las cuales han probado ser eficaces en terneros sin anticuerpos maternos, los cuales desarrollaron signos leves de la enfermedad en comparacin con el grupo control (no vacunado) (Xue et al., 2010). En otro estudio, donde se vacunaron grupos seronegativos y seropositivos intranasalmente con una vacuna viva modificada de administracin subcutnea, tuvo como resultados que en ambos grupo se produjo una enfermedad respiratoria severa, pero en el grupo seropositivo se produjeron mayores cambios en la temperatura rectal y mayor nmero de das diseminando el virus (Ellis et al., 2010).

SITUACIN EN CHILE La infeccin por el VRSB se detect mediante inmunofluorescencia al constatarse la presencia de antgenos del VRSB en aspirado nasofarngeo de 13 teneros provenientes de la provincia de Valdivia, sugirindose que el VRSB jugara un papel de importancia en los problemas respiratorios de terneros (Riedemann et al., 1993). Posteriormente se detect una seroprevalencia predial de 100% y una seroprevalencia individual de 51,8% (Riedemann et al., 1996).

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