CONTENIDO

/ INTRODUCCIN / ACTIVADORES METLICOS / NOMENCLATURA / CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS / / CATALISIS MOLECULAR / EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUBSTRATO SOBRE LA CATALISIS ENZIMATICA / / REPRESENTACIN GRFICA DE LINEWEAVER Y BURK / EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA / EFECTO DE LA TEMPERATURA / EFECTO DE ACTIVADORES / / ESPECIFICIDAD ABSOLUTA / ESPECIFICIDAD RELATIVA / INHIBICIN ENZIMATICA / PGINA PRINCIPAL

INTRODUCCIN
Las enzimas son biocatalizadores de naturaleza proteica. Todas las reacciones qumicas del metabolismo celular se realizan gracias a la accin de catalizadores o enzimas. La sustancia sobre la que acta una enzima se denomina substrato. Pasteur descubri que la fermentacin del azcar mediante levaduras, con su conversin en alcohol etlico y anhdrido carbnico es catalizada por fermentos o enzimas. En 1897 Buchner logr extraer de las clulas de levadura las enzimas que catalizan la fermentacin alcohlica. Sumner en 1926, aisl en forma cristalina la enzima ureasa, a partir de extractos obtenidos de Cannavalia enzyformis (Fabaceae) la que hidroliza la urea segn la siguiente reaccin:
UREASA

(NH2)2 CO + H2O

CO2 + 2 NH3

En 1930, Northrop aisl en forma cristalina las enzimas digestivas: pepsina, tripsina y quimotripsina. En la actualidad se conocen ms de 2000 enzimas que han sido aisladas en forma cristalina.

En trminos generales los catalizadores se caracterizan por las siguientes propiedades: 1 Son eficaces en pequeas cantidades. Tienen un nmero de recambio alto, que varia entre 100 y 36 millones (anhidrasa carbnica). El nmero de recambio o actividad molar, se define como la cantidad de substrato transformado en la unidad de tiempo por una cantidad dada de enzima, por ej. la catalasa hidroliza 5,6 * 106 molculas de H2 O2 por molcula de enzima por minuto, por lo que su nmero de recambio es 5,6 * 106 . 2 No se alteran durante las reacciones en que participan. 3 Aceleran el proceso para la obtencin del equilibrio de una reaccin reversible. 4 Muestran especificidad. La accin de la enzima es extremadamente selectiva sobre un substrato especfico. Las enzimas tienen pesos moleculares que oscilan entre 12.000 y un milln. Algunas enzimas son protenas conjugadas; ya que poseen un grupo no proteico o prosttico, por Ej. un azucar -glucoprotenas, un lipido -lipoproteinas, un cido nuclico -nucleoproteinas. Una enzima completa se denomina holoenzima, y est formada por una parte proteica (apoenzima) y un cofactor no proteico (coenzima). HOLOENZIMA = APOENZIMA + COENZIMA Entre los cofactores que requieren las enzimas para su funcionamiento estn las coenzimas: NADPH+H (nicotinamida adenina dinucletido fosfato reducido), NAD (nicotinamida adenina dinucleotido), FAD(flavina adenina dinucletido), piridoxal, biotina, tiamina, cido tetra hidroflico , cobalamina, etc. As mismo, muchas enzimas requieren activadores metlicos, y he de all la importancia de los minerales para el buen funcionamiento y crecimiento de las plantas.

Ir al principio

ACTIVADORES METLICOS
ACTIVADORES METLICOS Elemento Zn++ Mg++ Enzima Activada Deshidrogenasas, anhidrasa carbnica, ARN y ADN polimerasas. Fosfohidrolasas, RUBISCO, fosfotransferasas, fosfatasas.

Mn++ Mo Fe2+, Fe3+ Cu2+ Ca2+ K+ Co

Arginasas, peptidasas, quinasas. Nitratoreductasa, nitrogenasa. Citocromos, catalasas, ferredoxina, peroxidasas, nitritoreductasa. Citocromo oxidasa, tirosinasa, cido ascrbico oxidasa, plastocianina 1,3 b glucan sintetasa, calmodulina. Piruvato fosfoquinasa, ATPasa. Vitamina B12 hallada en microorganismos y animales, pero no en plantas. Importante en la fijacin simbitica de nitrgeno. Ureasa.

Ni

Ir al principio

NOMENCLATURA
Antiguamente las enzimas fueron nombradas atendiendo al substrato sobre el que actuaban, aadindole el sufijo -asa o haciendo referencia a la reaccin catalizada. As tenemos que la ureasa, cataliza la hidrlisis de la urea; la amilasa, la hidrlisis del almidn; la lipasa, la hidrlisis de lpidos; la ADNasa, la hidrlisis del ADN; la ATPasa, la hidrlisis del ATP, etc.

Ir al principio

CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

Debido al gran nmero de enzimas conocidas en la actualidad, se ha adoptado una clasificacin y nomenclatura ms sistemtica, en la que cada enzima tiene un nmero de clasificacin que la identifica. 1. Oxidorreductasas. Reacciones de transferencia de electrones. 2. Transferasas. Transferencia de grupos funcionales. Ej. UDP-glucosa-fructosa-

glucotransferasa. 3. Hidrolasas. Reacciones de hidrlisis. Ej. lipasa, proteasa, celulasa. 4. Liasas. Adicin a dobles enlaces. Ej. carboxilasa, fenilalanina amonioliasa. 5. Isomerasas. Reacciones de isomerizacin.Ej. fosfoglucosa isomerasa. 6. Ligasas. Se conocan como sintetasas. Participan en la formacin de enlaces con hidrlisis de ATP. Ir al principio

CATALISIS MOLECULAR
Un catalizador modifica la velocidad de una reaccin qumica sin ser utilizado o aparecer como uno de los productos de la reaccin. Una reaccin qumica en la que un substrato(S) se transforma en un producto (P): S P, ocurre por que cierta fraccin de molculas de S, posee mucho ms energa que el resto de ellas, lo que es suficiente para que alcancen un estado activado, en el que pueda formarse o romperse un enlace qumico y se forme el producto (P). La energa de activacin es la cantidad de energa expresada en caloras, necesaria para que todas las molculas de un mol, a una temperatura dada alcancen el estado reactivo. Mientras que, el estado de transicin es el estado rico en energa de las molculas que interaccionan en la cima de la barrera de activacin. La velocidad de una reaccin qumica es proporcional a la concentracin del complejo en el estado de transicin. Una reaccin qumica se puede acelerar de la siguiente forma: 1) Al aumentar la temperatura se incrementa la energa cintica, por lo que es mayor el nmero de molculas que alcanzan el estado de transicin. Generalmente el Q10 =2,, lo que indica que la velocidad de una reaccin qumica se duplica al aumentar la temperatura en 0 10 C. 2) Aadiendo un catalizador, que disminuye la energa de activacin y aumenta la velocidad de reaccin. La enzima (E), se combina con el substrato (S) formando el complejo de transicin, enzima-substrato (E-S), mediante una reaccin reversible, cuya energa de activacin es menor que la de la reaccin no catalizada. Cuando se forma el producto de la reaccin (P), se regenera de nuevo la enzima (E) de forma libre, la que puede combinarse de nuevo con otra molcula de substrato (S).

Una enzima reduce ms eficientemente la energa de activacin (Ea) de una reaccin que un catalizador inorgnico, lo que permite que una reaccin se realice a menor temperatura. El siguiente ejemplo ilustra mejor lo que hemos discutido:

Reaccin a) el perxido de hidrgeno se desescompone en: H2 O2 H2 O + O2

Energa de activacin (Kcal*mol-1)

18

b) el hierro cataltico (Fe) realiza la reaccin 13 H2 O2 H2 O + O2 12 H2 O2 H2 O + O2 5 H2O2 H2O + O2 d) la catalasa una enzima heptica la realiza c) el platino cataltico (Pt) realiza la reaccin

Una enzima no modifica la energa libre, ni la constante de equilibrio, sino que disminuye la energa de activacin de la reaccin.

Ir al principio

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUBSTRATO SOBRE LA CATALISIS ENZIMATICA

La actividad de una enzima se puede estudiar in vitro, bajo condiciones controladas aadindole una enzima a un substrato. S se trabaja con la condicin de que la concentracin del substrato sea saturante, variando entonces la concentracin de enzima, se observa que aumenta el producto de la reaccin, a pH y temperatura constantes.

Si se mantiene la concentracin de la enzima constante y variando la concentracin de substrato se obtiene una curva hiperblica como la de la figura. Al principio un aumento de la concentracin de substrato produce un aumento rpido de la velocidad de reaccin, pero si se sigue aumentando la concentracin de substrato, la velocidad de reaccin comienza a disminuir y a muy altas concentraciones de substrato se observa que no cambia la velocidad de reaccin, se dice que los centros activos de la enzima se encuentran saturados. La velocidad de reaccin que se obtiene a esa alta concentracin de substrato se define como la velocidad mxima (V) de la reaccin enzimtica bajo las condiciones especificadas. La concentracin de substrato (S), a la semivelocidad mxima de reaccin (V/2) se puede determinar de la figura y representa la constante de Michaelis o Km, la cual es una caracterstica para cada enzima. La inversa de Km, o 1/Km, mide aproximadamente la afinidad de la enzima por el substrato. Mientras ms pequeo sea el valor de Km, mayor ser la afinidad de la enzima por el substrato. Si varias enzimas compiten en el metabolismo por el mismo substrato, ste ser transformado preferentemente por la enzima con mayor afinidad. La ecuacin de Michaelis describe la relacin cuantitativa entre la velocidad de reaccin y la concentracin de substrato [S], si se conoce Vmax o Km:

v= En donde: v= es la velocidad de reaccin observada a una concentracin de substrato determinada [S] Km= constante de Michaelis en moles/ltro

Vmax= velocidad mxima a concentracin saturante de substrato. Si v= Vmax/2; entonces

Km+[S] = 2[S] Km =[S] De tal forma que podemos concluir que Km es igual a la concentracin de substrato a la semivelocidad mxima de reaccin.

Ir al principio

REPRESENTACIN GRFICA DE LINEWEAVER Y BURK

Si se toma el inverso en ambos miembros de la ecuacin de Michaelis tenemos:

que es la ecuacin de una lnea recta, cuya pendiente es de las ordenadas en hacer y a la abcisa en el punto

, que intercepta al eje Lo que es evidente al

, ya que se convierte en

Si se hace una grfica con los dobles inversos, colocando los valores de

en el eje de

las ordenadas y en el eje de las abcisas, se obtiene una lnea recta a partir de la cual se puede calcular fcilmente Km.

Ir al principio

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Sabiendo que las enzimas son proteinas, cualquier cambio brusco de pH puede alterar el carcter inico de los grupos amino y carboxilo en la superficie proteica, afectando as las propiedades catalticas de una enzima. A pH alto o bajo se puede producir la desnaturalizacin de la enzima y en consecuencia su inactivacin. La fosfatasa cida es ms activa a pH 5,0, mientras que la fosfatasa alcalina lo es a pH 9,0. Muchas enzimas tienen mxima actividad cerca de la neutralidad en un rango de pH de 6 a 8. El pH per se no afecta la actividad enzimtica, sino la concentracin de protones. Los protones adems de alterar la estructura de la enzima y el substrato, pueden participar tambin en la reaccin como substrato o producto. En esos casos, la concentracin de protones afecta directamente la velocidad de la reaccin. ENZIMA Pepsina Tripsina Catalasa Arginasa Fumarasa Ribonucleasa pH OPTIMO 1,5 7,7 7,6 9,7 7,8 7,8

Ir al principio

EFECTO DE LA TEMPERATURA

Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reaccin hasta cierta temperatura ptima, ya que despus de aproximadamente 450 C se comienza a producir la desnaturalizacin trmica. Las enzimas de muchos mamferos tienen una temperatura ptima de 370 C, por encima de esa temperatura comienzan a inactivarse y se destruyen Sin embargo existen especies de bacterias y algas que habitan en fuentes de aguas termales y en el otro extremo ciertas bacterias rticas tienen temperaturas ptimas cercanas a 00 C. Ir al principio

EFECTO DE ACTIVADORES

Ciertas enzimas se encuentran como aproenzimas o zimogenos que son inactivos. El tripsingeno es convertido en tripsina por la misma accin de la tripsina, que remueve un hexapptido.
Tripsina

Tripsingeno

Tripsina + Val (Asp)4 lisina

Otra forma de activacin consiste en mantener los grupos SH reducidos. Estos grupos pueden formar parte de centros activos de ciertas enzimas. Si se oxidan estos grupos a -S-S- la enzima se inactiva. As tenemos que la enzima papaina, se inactiva despus de exponerla al oxgeno; pero cuando se le aade un reductor apropiado la enzima se reactiva. Los grupos -S-S- se convierten en -SH, activndose la enzima. Otra forma de activacin requiere la presencia de otra sustancia que se enlaza al sitio alostrico, el compuesto que se enlaza se denomina un efector alostrico. El centro alostrico es bien especfico para el efector o modulador alostrico. Ir al principio

ESPECIFICIDAD ABSOLUTA
Oxgeno

L-aminocido
L-aminocido oxidasa

a -cetocido + NH3 + H 2 O 2 .

Oxgeno

D-aminocido
D-aminocido oxidasa

a -cetocido + NH3 + H 2 O 2

En este ejemplo se muestra la estereo-especificidad. Una enzima puede tener una especificidad ptica para isomeros D o L. Hay enzimas que muestran especificidad absoluta como la aspartasa, que cataliza la adicin reversible de amonaco al doble enlace del cido fumrico, pero no al de otros cidos insaturados. HOOC CH = CH COO + NH4
+

HOOC CH2 - CHNH2 - COO + H

Ir al principio

ESPECIFICIDAD RELATIVA
Ciertas enzimas muestran especificidad relativa, ya que actan sobre muchos compuestos que poseen un rasgo estructural comn. Por ejemplo, la fosfatasa del rin cataliza la hidrlisis de esteres fosfato del cido fosfrico a diferentes

velocidades, la amilasa hidroliza el almidn independiente de su origen. Las proteasas y lipasas hidrolizan proteinas y lpidos.

Del estudio de la especificidad del substrato que exhiben las enzimas, surge la idea de una complementaridad, o relacin semejante a la de una llave y una cerradura, entre la molcula del substrato y una zona determinada de la superficie de la molcula de la enzima, la cual recibe el nombre de centro activo o centro cataltico.

Ir al principio

INHIBICIN ENZIMATICA

Mediante el uso de inhibidores enzimticos se ha obtenido informacin muy valiosa sobre la conformacin del centro activo de algunas enzimas. a. Inhibicin irreversible: Este tipo de inhibidores forman un enlace covalente con las enzimas cerca del centro activo. Un ejemplo son los gases nerviosos, como el fluorofosfato de diisopropilo (DFP) que forma un complejo con la enzima acetilcolinesterasa. Los animales envenenados con este gas quedan paralizados, debido a la imposibilidad de transmitir adecuadamente los impulsos nerviosos.

Ester di-isopropil fosfrico de la enzima (inactivo) b) Inhibicin competitiva: Es cuando el inhibidor compite con el substrato por la unin con el centro activo de la enzima. Este tipo de inhibicin puede reducirse si se aumenta la concentracin de substrato.
-

OOC - CH2 - CH2 - COO 2H + Succinato Succinato

OOC - CH

CH - COO- + Fumarato

Deshidrogenasa

COO I

CH2
I

Malonato (inhibidor competitivo)

COO En la inhibicin competitiva la enzima se combina con el inhibidor para formar un complejo enzima-inhibidor:

E+I

EI

en competencia con la reaccin normal E +S

ES

La sulfanilamida (bactericida) interfiere con la sntesis del cido flico compitiendo con el cido p-aminobenzoico, de una forma competitiva.

HOOC-- NH2 cido p- amino benzoico = fenil a. Inhibicin no competitiva.

NH2 SO2 - - NH2 sulfanilamida

Esta inhibicin se caracteriza por que no se puede revertir el efecto del inhibidor, aumentando la concentracin del substrato. Por ejemplo la inhibicin de la deshidrogenasa del gliceraldehido-3-fosfato por la yodoacetamida:

Enzima-SH + I-CH2 CONH2

Enzima-SCH2 CONH2 + IH

La deshidrogenasa del gliceraldehido-3 fosfato puede ser inhibida tambin por el cido iodo-actico: Enzima-SH + ICH2 COOH c) Inhibicin por metales. Ciertos metales como el plomo, mercurio y arsnico inhiben enzimas que tienen en su centro activo grupos -SH libres Este es un Material didctico elaborado por: Enzima-SCH2 COOH + IH

Rubn Hernndez Gil, PhD.

Profesor de Fisiologa Vegetal, Departamento de Botnica, Facultad de Ciencias Forestales y Ambientales. Universidad de Los Andes - Mrida - Venezuela e-mail: rubenhg@ula.ve Copyright 2001 - Version 2.0 - Reservados todos los derechos. Revisado: .