Tema 7

Cintica Enzimtica

TEMA 7 CINTICA ENZIMTICA

1. DEFINICIONES CMO ACTAN LOS ENZIMAS? 2. CINTICA ENZIMTICA MODELO DE MICHAELIS-MENTEN REPRESENTACIONES 3. INHIBICIONES EN REACCIONES ENZIMTICAS INHIBICIN COMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

4. MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

DEFINICIONES

LAS ENZIMAS son protenas (RNA) que catalizan reacciones qumicas en las clulas. Cada enzima es altamente especfica para la reaccin que cataliza. Esta especificidad est determinada por el centro activo de la enzima (en donde se hallan los grupos qumicos responsables de la catlisis). Muchas enzimas necesitan co-factores (co-reactivos, cosustratos) para cumplir su funcin cataltica.

Son Protenas de alto peso molecular (macromolculas, 104 a 106 g/mol, 102 a 104 aminocidos) Su actividad depende de la integridad de su conformacin proteica. Metales pueden formar parte de su centro activo, o de otra parte de la enzima (co-factor). Los reactivos de la reacciones catalizadas por enzimas se denominan sustratos. Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.

Cmo actan los enzimas?

En una reaccin catalizada por un enzima:
La sustancia sobre la que acta el enzima (sustrato). El sustrato se une a una regin concreta del enzima (centro activo). Un sitio de unin formado por los aminocidos que estn en contacto directo con el sustrato. Un sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente implicados en el mecanismo de la reaccin. Formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reaccin

Cmo actan los enzimas?

Hiptesis de la Cerradura y la llave (E. Fischer, 1894)

Hiptesis del Ajuste Inducido (Daniel Koshland, 1958)

E Induce al S a configuracin aproximada al Estado de Transicin 1. 2. 3. 4. 5. UNE S REDUCE Ea IMPULSA Catalisis LIBERA P SE REGENERA
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CINTICA ENZIMTICA
Estudio de la velocidad de reacciones catalizadas enzimticamente

La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima depende de 1. la concentracin de molculas de sustrato [S] 2. la temperatura 3. la presencia de inhibidores 4. pH del medio, que afecta a la conformacin (estructura espacial) de la molcula enzimtica

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Aparentemente:

CINTICA ENZIMTICA

MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Hiptesis bsicas: enzima y sustrato forman un complejo intermedio ES

Etapa rpida

Etapa lenta

MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Modelo matemtico:

Definiciones:

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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN

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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN

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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN

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Representacin de Lineweaver-Burk
Representa 1/v frente a 1/s y permite determinar a partir de medidas experimentales parmetros bsicos de la cintica enzimtica como la constante de Michaelis y la velocidad mxima de reaccin

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Representacin de Eadie-Hofstee
v v=V K max m [S]

Vmax
pendiente=

-Km Vmax Km v [S]

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Representacin de Hanes-Woolf
K [S] 1 m + = [S] v V V max max

[S] v Km Vmax -Km

Pendiente =

1 Vmax

[S]
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Representacin integrada de Michaelis-Menten

[S]o Vmax 1 ([S]o [S]) 2,3 = log [S] Km Km t t Vmax Km

2,3log[S]o t [S]
Pendiente = -1/Km

Vmax ([S]o-[S]) t
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INHIBICIN EN REACCIONES ENZIMTICAS

Inhibicin enzimtica: molculas diferentes del sustrato pueden unirse al enzima reduciendo total o parcialmente su actividad cataltica. Estas molculas reciben el nombre de inhibidores

Inhibidor competitivo

Inhibidor no competitivo

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Inhibicin competitiva

El inhibidor reduce la velocidad de reaccin, pero la velocidad mxima (concentraciones de sustrato grandes) sigue siendo la misma
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Inhibicin competitiva

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Inhibicin no competitiva

Inhibicin no competitiva

El inhibidor reduce la velocidad mxima pero Km (la afinidad del enzima por el sustrato) sigue siendo el mismo

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MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio

Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo. Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son los moduladores negativos.
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Modulacin alostrica de la actividad enzimtica

Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una regin del enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos.

Si los moduladores negativos actan en lugares distintos del centro activo del enzima (inhibicin no competitiva) se llaman inhibidores alostricos.
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