Validao de mtodos analticos em toxicologia

Validar
VALIDAR um mtodo analtico estar com o objetivo voltado para a confiabilidade analtica do mtodo escolhido ou desenvolvido para se obter o resultado. A validao de um mtodo um dos elementos bsicos de sistemas de qualidade de laboratrios: - BPL (Boas Prticas de Laboratrio)-GLP - ISO17025

Por que validar?

A validao visa diminuir ou controlar os fatores que levam a impreciso ou inexatido de um dado gerado.

Erros sistemticos:
So erros que a princpio pode-se alivi-los nas medidas, ou seja, elimin-los ou aplicar fatores de correo, desde que constantes. Ex: erros instrumentais, erros devido presena de impurezas, erros de operao, erros pessoais, erros de mtodo.

Erros indeterminados: So erros devido a variaes ao acaso, de causas no conhecidas exatamente, em geral irregulares e pequenas e de difcil controle do operador como: umidade, temperatura, iluminao, etc.

Parmetros mtodos
Preciso
Exatido Linearidade Recuperao

avaliados

em

validao

de

Limite de deteco (LOD) e limite de quantificao (LOQ) Especificidade Robustez

Estabilidade do analito

Preciso
A preciso o parmetro que avalia a proximidade entre vrias
medidas efetuadas em uma mesma amostra. A medida de preciso deve levar em conta: condies de repetibilidade e/ou reprodutibilidade Condies de repetibilidade: so condies em que resultados independentes so obtidos usando: -o mesmo mtodo; -para a mesma amostra; -o mesmo operador; -o mesmo laboratrio; -usando o mesmo equipamento; -em um curto intervalo de tempo

Condies de reprodutiblidade: resultados so obtidos usando: -o mesmo mtodo; -para a mesma amostra; -em diferentes laboratrios; -por diferentes operadores; -usando equipamentos diferentes.

so

condies

onde

Exatido
A exatido a diferena entre o valor real presente na
amostra e o valor obtido na anlise. avaliada atravs da inexatido, ou seja, o afastamento entre os valores

esperado e obtido.

Exatido x preciso

Linearidade
A linearidade a capacidade de um mtodo analtico gerar resultados proporcionais concentrao da espcie em anlise, dentro de uma faixa analtica especificada. A linearidade

determinada pela anlise de uma srie de calibradores

(amostras adicionadas com diversas concentraes conhecidas do analito), abrangendo a faixa de concentrao de interesse no

trabalho. Com essas anlises realiza-se a curva de calibrao.

Recuperao
A recuperao avalia a eficincia do mtodo de tratamento da
amostra. Toda amostra que recebe tratamento de anlise indireta (extrao) deve ter calculado experimentalmente a perda do

analito decorrente desse tratamento. A recuperao expressa a

variao de resposta obtida entre a quantidade de analito adicionada antes da extrao e aquela decorrente da adio da mesma quantidade do analito aps o processo de extrao.

LIMITE DE DETECO E DE QUANTIFICAO

Limite de deteco (LOD) a menor concentrao ou quantidade de uma substncia (analito) que pode ser identificada por um mtodo analtico com um nvel de confiana especificado ou ainda, que pode ser estatisticamente diferenciada do rudo.

Limite de quantificao (LOQ) a menor concentrao do analito que pode ser quantificada com uma preciso

especificada.

Sensibilidade
A sensibilidade de um mtodo indica sua capacidade de discriminar, com uma fidelidade estabelecida,

concentraes

prximas

de

um

analito.

Sensibilidade LOD

SELETIVIDADE E ESPECIFICIDADE
A seletividade corresponde capacidade de um mtodo em determinar o analito na presena de outras substncias provveis de interferirem na determinao. O termo especificidade se refere a um mtodo especfico para um nico analito, enquanto seletividade diz respeito a um mtodo que permite a anlise de vrias substncias que podem ou no ser distinguveis.

Robustez
A robustez a capacidade do resultado de um mtodo permanecer inalterado por pequenas mudanas de parmetros operacionais e ambientais, como temperatura do ambiente, pH, concentrao da fase mvel (HPLC), materiais de diferentes procedncias etc.

Estabilidade
A estabilidade da substncia em teste poder ser feita em relao a matriz de trabalho nas seguintes condies: Durante armazenamento -temperatura ambiente -temperatura de geladeira (4C) -temperatura de congelamento (-20C) Ciclos de congelamento e descongelamento (3ciclos) Aps a extrao