Apoptosis La apoptosis es una forma de muerte celular, que est regulada genticamente La muerte celular programada es parte integral

del desarrollo de los tejidos tanto de plantas como de animales pluricelulares (metazoa). En animales, la forma de muerte celular programada ms corriente es la "apoptosis". Cuando una clula muere por apoptosis, empaqueta su contenido citoplasmtico, lo que evita que se produzca la respuesta inflamatoria caracterstica de la muerte accidental o necrosis. En lugar de hincharse o reventar y por lo tanto, derramar su contenido intracelular daino enzimtico, hacia el espacio extracelular-, las clulas en proceso de apoptosis y sus ncleos se encogen, y con frecuencia se fragmentan conformando vesculas pequeas que contienen el material citoplasmtico. De esta manera, pueden ser eficientemente englobadas va fagocitosis y, consecuentemente, sus componentes son reutilizados por macrfagos o por clulas del tejido adyacente. 'Control del suicidio' celular Supervivencia En los ciclos metablicos, las clulas reciben y emiten molculas. A estas seales, se las denomina Seales de supervivencia, y son las responsables de mantener a la unidad biolgica en un estado ptimo. En las comunicaciones celulares, estas seales estn encaminadas a informar a la poblacin celular cuando el medio no es propicio. Proceso Cuando el medio no apto para la clula, se ejecuta un programa de suicidio celular denominado apoptosis. Este programa produce la muerte de la clula de manera controlada. La unidad biolgica no es capaz de sostener la homeostasis. Las clulas ms viejas cuentan con mitocondrias ms daadas, por lo que la capacidad de aportar ATP se ve mermada, si a eso le unimos las condiciones del medio, el resultado es evidente: Las ms viejas son las que menos se alimentan en un medio precario. A su vez, la ralentizacin de los ciclos metablicos descompensa otras funciones celulares, y lo que antes tena una cancelacin de cargas favorable para la vida, ahora ha de recurrir a otras formas de cancelar la carga, produciendo la expresin de genes que desemboca en la apoptosis. Ejecucin del programa gentico La apoptosis se caracteriza por: activacin de caspasas, reduccin del volumen celular, fragmentacin nuclear (cariorrexis), exposicin del lpido fosfatidilserina en la cara externa de la membrana plasmtica, y formacin de cuerpos apoptticos. La ejecucin en s depende bien de factores externos a la clula (generalmente variaciones de concentracin de factores de crecimiento, estmulos para la permanencia en el tejido o bien estmulos apoptticos directos desde linfocitos) activando el ligando de FAS en la membrana celular, o bien de factores internos en los que la clula expresa metablicamente su programa de muerte celular como consecuencia de un dao celular. Se debe matizar "dao", puesto que en este contexto, dao implica desde oxidacin por radicales libres que la clula evala como irreparable hasta el acortamiento de telmeros debido a sucesivos ciclos de divisin celular, lo cual, en ltima instancia, producira dao gentico por prdida de informacin en caso de nuevas divisiones celulares, pasando esta definicin de "dao" por todos los que generan apoptosis, ninguno de los cuales sera suficiente para suspender el programa (en su caso hablaramos de clula tumoral, es decir, aquella que debiendo ejecutar su programa de apoptosis no lo hace y contina dividindose).

La apoptosis es un fenmeno biolgico fundamental, permanente, dinmico e interactivo. Existen mecanismos pro- y anti-apoptticos, regulados genticamente, que actan de forma activa (pues consumen energa) y equilibrada. Como funcin necesaria para evitar la sobreproduccin celular se sospechaba de su existencia, pero es un proceso ordenado y "silencioso" que no produce reaccin tisular y por ello difcil de captar. En 1972, Kerr y col., estudiando orgnulos en clulas neoplsicas, detectaron que muchas clulas desaparecan en los cultivos. Esto llev al estudio de imgenes cinemticas que mostraron mediante microscopa electrnica las alteraciones que sufre la clula en un proceso que es de corta duracin, durando en tales cultivos menos de una hora. La apoptosis puede estar frenada, en equilibrio o estimulada. Por ejemplo, est frenada durante el desarrollo de espermatogonias, en las criptas de las glndulas intestinales (que es un epitelio de crecimiento rpido) y durante la lactancia en su perodo preparatorio, en que el tejido mamario aumenta su masa celular. Est en equilibrio respecto de la mitosis en los tejidos adultos sanos. Es muy significativo su rol homeosttico en la mdula sea, donde debe destruir de manera constante 11 la mitad de una inmensa cantidad de clulas que slo en leucocitos significa 5 x 10 cada 24 h. Est estimulada cuando existen clulas envejecidas, mutadas, neoplsicas o no neoplsicas, alteradas por txicos y las que estn en proceso de metamorfosis o atresia. Se ha estudiado esta condicin en neutrfilos envejecidos, en megacariocitos con citoplasma agotado por produccin excesiva de plaquetas, en la atresia folicular del ovario, en folculos pilosos en evolucin y en la mama durante la involucin post-lactancia. Mecanismo Dado que la apoptosis acta como oponente a la mitosis, es muy importante su relacin con el ciclo celular. En el ciclo celular hay cuatro fases: mitosis (M), fase de control celular G1, sntesis de ADN (S) y fase de control G2. La apoptosis puede iniciarse en el tercio final de G1 para impedir que una clula daada ingrese a la fase de sntesis de manera que las mutaciones no se reproduzcan durante la replicacin del ADN y en la fase G2 para impedir que las clulas que no hayan llegado a la madurez entren en mitosis. En el mecanismo molecular que controla la apoptosis actan varios agentes, de los cuales uno de los ms importantes y mejor estudiados es el complejo de cisteinil-aspartato proteasas (caspasas). Se han descrito 11 caspasas en clulas humanas que provocan una degradacin proteica bien definida hasta llegar a la formacin de cuerpos apoptticos. Algunas caspasas son "iniciadoras" y otras "efectoras" del proceso cataltico, actuando sobre endonucleasas que son las responsables directas de la fragmentacin del ADN. La cadena de degradacin proteica tiene sucesivos clivajes dependientes de la ubicacin del cido asprtico que se repite en la estructura de la enzima. Se han descrito varios cientos de sustratos de caspasas. La activacin de las caspasas, que existen en calidad de pro-caspasas inactivas, se produce por diversas vas en que participan varios complejos moleculares. Va extrnseca La va extrnseca o de los "receptores de muerte" establece conexiones con el espacio extracelular, recibiendo seales proapoptticas desde el exterior y de las clulas vecinas. Dos familias de receptores se han identificado con estas caractersticas: la protena Fas y el factor de necrosis tumoral (TNF). La protena transmembrana Fas en su porcin intracelular enlaza con un factor intermedio denominado FADD (factor associated death domain), nombre que slo seala que est comprometido con la zona de la molcula Fas que participa en la muerte celular, activando las caspasas-8 y -10. En cambio, si la parte interna de la molcula se asocia a otro factor llamado DaXX, se activan proten-kinasas que conducen al efecto contrario, es decir, estimulan el ciclo celular y la mitosis. Esta va Fas permanece inactiva hasta que se produce en su parte externa el enlace con un cofactor llamado ligando Fas, protena que acta como detonador que enciende una

va en que slo las caspasas estn inactivas y el resto de la cadena est preparado para recibir el enlace exterior. Esta caracterstica permite actuar con gran rapidez sin necesidad de sintetizar otros factores. Algo similar sucede con el otro receptor de membrana TNF. Su porcin intracelular conecta con protenas como Tradd (TNF receptor associated death domain) y Raidd (receptor associated interleukine death domain) que activan caspasas "iniciadoras" de la apoptosis. Pero si se asocian a otro complejo llamado Traf (TNF receptor associated factor) activan proten-kinasas y estimulan la proliferacin celular, es decir, el efecto contrario. Va intrnseca o mitocondrial Otra va de induccin de apoptosis es la va llamada mitocondrial. Las protenas de la familia de Bcl-2 regulan la apoptosis ejerciendo su accin sobre la mitocondria. La activacin de protenas pro-apoptticas de la familia de Bcl-2 produce un poro en la membrana externa de las mitocondrias que permite la liberacin de numerosas protenas del espacio intermembrana; entre ellas, el citocromo c. El citocromo c, una vez en el citosol, activa un complejo proteico llamado "apoptosoma", que activa directamente a la caspasa-9. Una vez que la caspasa-9 est activada, sta activa a las caspasas efectoras como la caspasa-3, lo que desencadena las ltimas fases de la apoptosis. Las protenas de la familia de Bcl-2 se agrupan en tres familias: la familia de las protenas antiapoptticas (Bcl-2, Bcl-Xl, Mcl-1 y otras); la familia de protenas proapoptticas de tipo "multidominio" (Bax y Bak) y las protenas proapoptticas de tipo "BH3-only" (Bid, Bim, Bad y otras). Las protenas tipo multidominio pueden producir poros por si solas en liposomas, lo que indica que probablemente son suficientes para formar el poro mitocondrial que permite la liberacin del citocromo c. Las protenas tipo BH3-only activan a estas protenas, y las antiapoptticas inhiben la formacin del poro. Estas protenas son los reguladores ms importantes del proceso de apoptosis. Adems de la salida de citocromo c desde la mitocondria, otra protena llamada SMAC/DIABLO, que es inhibidor de los inhibidores de caspasas (IAPS) sale de la misma. As se tiene una va en la que la caspasa efectora est libre de actuar (dado que sus inhibidores fueron neutralizados por SMAC/DIABLO). La va mitocondrial puede conectarse tambin con la va de receptores de muerte, ya que una vez activada la caspasa-8 por dichos receptores, esta caspasa activa a la protena Bid, lo que provoca la apertura del poro mitocondrial y la activacin de la caspasa-9. Funciones de la apoptosis [Eliminacin de tejidos daados o infectados La apoptosis puede ocurrir, por ejemplo, cuando una clula se halla daada y no tiene posibilidades de ser reparada, o cuando ha sido infectada por un virus. La "decisin" de iniciar la apoptosis puede provenir de la clula misma, del tejido circundante o de una reaccin proveniente del sistema inmune. Cuando la capacidad de una clula para realizar la apoptosis se encuentra daada (por ejemplo, debido a una mutacin), o si el inicio de la apoptosis ha sido bloqueado (por un virus), la clula daada puede continuar dividindose sin mayor restriccin, resultando en un tumor que puede ser de carcter canceroso. Por ejemplo, como parte del "secuestro" del sistema gentico de la clula llevado a cabo por los virus del papiloma humano (VPH), un gen denominado E6 se expresa originando un producto que degrada la protena p53, vital para la ruta apopttica.

Tambin condiciones de estrs como la falta de alimentos, as como el dao del ADN provocado por txicos o radiacin, pueden inducir a la clula a comenzar un proceso apopttico. Pero no toda la muerte celular ocurre por apoptosis; tambin existe la necrosis, una forma descontrolada de muerte celular. Una ejemplo sera la necrosis mediada por la enzima nuclear, poli-ADP-ribosa polimerasa-1 (PARP-1), crucial en el mantenimiento de la integridad genmica. Un activacin masiva de dicha enzima puede vaciar la clula de nucletidos ricos en energa, provocando una cadena de transduccin de seales del ncleo a la mitocondria que iniciara la necrosis. Desarrollo Durante el desarrollo embrionario la apoptosis regula el crecimiento celular y tisular, desde la desaparicin de las membranas interdigitales para el desarrollo normal de los dedos hasta la apoptosis en el ojo para la correcta formacin del cristalino y los prpados pasando por multitud de procesos en estudio. En los animales que pasan por distintos estadios la apoptosis que regula el desarrollo controla adems el paso de un estado de crecimiento al siguiente (larva, ninfa, juvenil, adulto, etc.). En el caso de las ranas la apoptosis controla, durante la metamorfosis, la desaparicin de la aleta caudal de los renacuajos. Homeostasis En un organismo adulto, la cantidad de clulas que componen un rgano o tejido debe permanecer constante, dentro de ciertos lmites. Las clulas de la sangre y de piel, por ejemplo, son constantemente renovadas por sus respectivas clulas progenitoras. Por lo tanto, esta proliferacin de nuevas clulas tiene que ser compensada por la muerte de otras clulas. A este proceso se le conoce como homeostasis, aunque algunos autores e investigadores han sugerido homeocinesis como un trmino ms preciso y elocuente. La homeostasis se logra cuando la relacin entre la mitosis y la muerte celular se encuentra en equilibrio. Si este equilibrio se rompe, pueden ocurrir dos cosas: Las clulas se dividen ms rpido de lo que mueren, desarrollando un tumor. Las clulas se dividen ms lentamente de lo que mueren, producindose un grave trastorno de prdida celular.

Ambos estados pueden ser fatales o potencialmente dainos. Regulacin del sistema inmunitario Ciertas clulas del sistema inmunitario, los linfocitos B y linfocitos T, son sofisticados agentes de la respuesta defensiva del organismo frente a infecciones as como clulas propias que hayan adquirido o desarrollado algn tipo de malignidad. Para llevar a cabo su trabajo, las clulas B y T deben tener la habilidad de discriminar lo propio de lo extrao y lo sano de lo enfermo, gracias a la especialidad de sus receptores. De hecho, los linfocitos T citotxicos pueden ser activados por fragmentos de protenas expresadas inapropiadamente (derivadas, por ejemplo, de una mutacin maligna) o por antgenos extraos producidos como consecuencia de una infeccin intracelular. Despus de activarse tienen la capacidad de migrar, proliferar y reconocer las clulas afectadas, induciendo una respuesta de muerte celular programada. Los receptores de las clulas B y T inmaduras no se generan por procesos de una elevada precisin, sino por procesos aleatorios de elevada capacidad para generar variabilidad. Esto significa que muchas de estas clulas inmaduras pueden no ser efectivas (porque su receptor no sea capaz de unir ningn antgeno conocido) o ser peligrosas para el propio organismo porque sus

receptores sean capaces de reconocer con elevada afinidad antgenos propios. Si estas clulas fuesen liberadas sin otros procesamientos, muchas podran volverse autorreactivas y atacar clulas sanas. El mecanismo por el que el sistema inmune regula este proceso es la eliminacin tanto de los no efectivos como los potencialmente autorreactivos mediante apoptosis. Como se ha descrito en los anteriores apartados, todos los tejidos dependen de una continua recepcin de seales de supervivencia. En el caso de las clulas T, mientras se desarrollan y maduran en el timo, las seales de supervivencia dependen de su capacidad para reconocer antgenos extraos. Aquellas que no superan esta prueba, alrededor de un 97 % de las clulas T producidas, son eliminadas por apoptosis. Las supervivientes son testadas a su vez frente a antgenos propios, y aquellas que reconocen estos antgenos con elevada afinidad son eliminadas de la misma manera. Por lo tanto, el desarrollo de un sistema inmune maduro y efectivo depende de una serie de reguladores positivos y negativos de las vas de apoptosis. Patologas vinculadas con la apoptosis La apoptosis es una funcin biolgica de gran relevancia en la patogenia de varias enfermedades estudiadas hasta el momento. Podemos destacar el cncer, malformaciones, trastornos metablicos, neuropatas, lesiones miocrdicas y trastornos del sistema inmunitario. 1. Enfermedades asociadas a inhibicin de apoptosis 1. Cncer: linfoma no Hodgkin folicular (Bcl-2 +), carcinoma (p53 +), tumores hormono-dependientes 2. Enfermedades autoinmunitarias: lupus eritematoso sistmico, glomerulonefritis autoinmunitaria 3. Infecciones virales: Herpesvirus, Poxvirus, Adenovirus 2. Enfermedades asociadas a aumento de apoptosis 1. Sida 2. Enfermedades neurodegenerativas: enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrfica, retinitis pigmentosa, degeneracin cerebelosa 3. Sndromes mielodisplsicos (MDS): anemia aplstica 4. Dao isqumico: infarto de miocardio, apopleja, dao por reperfusin, dao heptico por alcoholismo Actualidad de la apoptosis La apoptosis ha sido tema de creciente atencin en la Biologa celular y en el estudio del desarrollo de los organismos, as como en la investigacin de enfermedades tales como el cncer. As lo demuestra el hecho que el premio Nobel ao 2002 para Fisiologa y Medicina fuese otorgado a Sydney Brenner (Gran Bretaa), H. Robert Horvitz (EE. UU.) y John E. Sulston (GB) "por sus descubrimientos concernientes a la regulacin gentica del desarrollo de rganos y la muerte celular programada"