FUNDAO EDUCACIONAL JAYME DE ALTAVILA-FEJAL CENTRO DE ESTUDOS SUPERIORES DE MACEICESMAC FACULDADE DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE FCBS

PROTOCOLO DE PRTICA
Curso: Farmcia / Biomedicina Disciplina: Bioqumica Clinica Seriao/Perodo: 9. 4. Ano: 2012 Prof: Jair Fa Aula Prtica: Creatinina

1- OBJETIVO A determinao da creatinina em amostras de sangue e urina so testes de avaliao da funo renal. A determinao da concentrao de creatinina no lquido amnitico um dos parmetros laboratoriais para a avaliao da maturidade fetal. 2. FUNDAMENTO: A creatinina e outros componentes do soro reagem com a soluo de picrato em meio alcalino, formando um complexo de cor vermelha que medico fotometricamente. A adio de um acidificante abaixa o pH para 5,0, promovendo a decomposio do picrato de creatinina, permanecendo inalterada a cor derivada dos cromognios, que tambm medida fotometricamente. A diferena entre as duas leituras fornece o valor da creatinina verdadeira.

3- METODOLOGIA:
3.1 AMOSTRA Preparo do paciente Para creatinina srica recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Para a realizao da depurao da creatinina recomenda-se, se possvel, a interrupo do uso de medicamentos, particularmente as cefalosporinas. O paciente deve estar com bom estado de hidratao e dieta isenta de carne. Tipos de amostra Soro ou plasma (heparina, EDTA, fluoreto, oxalato, citrato), urina (colhida em intervalo de 24 horas), lquido amnitico. Urina e lquido amnitico devem ser centrifugados. Armazenamento e estabilidade da amostra O analito estvel por 7 dias entre 2 8 C. A amostra de urina de 24 horas deve ser conservada em geladeira durante o perodo de coleta, at o momento da dosagem. 3.2 PRODUTO UTILIZADO Kit de Creatinina, cido pcrico: Armazenar entre 15 25 C. Contm cido pcrico 44,4 mmol/L. Tampo: Armazenar entre 15 25 C. Contm hidrxido de sdio 208 mmol/L, tetraborato de sdio 12,7 mmol/L e surfactante. Padro 4,0 mg/dL: Armazenar entre 15 25 C. Aps o manuseio, sugere-se armazenar bem vedado para evitar evaporao. Acidificante: Armazenar entre 15 25 C. Contm cido actico 11,4 mol/L. 3.3 EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1. Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 510 nm ou filtro verde (500 a 540 nm). 2. Banho-maria mantido temperatura constante (37 C). 3. Pipetas para medir amostras e reagentes. 4. Cronmetro. 3.4 PROCEDIMENTO Para a dosagem na urina, diluir a amostra 1:25 (0,2 mL de urina + 4,8 mL de gua destilada ou deionizada). Multiplicar o resultado obtido por 25. 1. Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir: Tampo (n 2) Amostra gua destilada ou deionizada Padro (n 3) cido pcrico (n 1) Branco 2,0 mL ----0,25 mL ----0,5 mL Teste 2,0 mL 0,25 ml --------0,5 mL Padro 2,0 mL --------0,25 mL 0,5 mL

2. Misturar e colocar em banho-maria a 37 C durante 10 minutos. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. 3. Determinar as absorbncias do teste e padro em 510 nm ou filtro verde (500 a 540 nm), acertando o zero com o branco. A absorbncia do teste ser a A1. Acidificante (n 4) 0,1 mL 0,1 mL -----

4. Misturar e deixar na temperatura ambiente durante 5 minutos. 5. Determinar a absorbncia do teste em 510 nm ou filtro verde (500 a 540 nm), acertando o zero com o branco. A absorbncia do teste ser a A2. 3.5 CLCULOS Ver linearidade. A1 A2 Creatinina (mg/dL) = x4 Absorbncia do padro DEPURAO DA CREATININA ENDGENA

Instruir o paciente para que faa a coleta correta da urina de 24 horas. Dosar a creatinina do soro e da urina utilizando as metodologias propostas. O soro pode ser obtido em qualquer momento do perodo da colheita da urina. Aplicar os resultados obtidos na equao abaixo: U Depurao (mL/minuto) = x VM S U: creatinina na urina S: creatinina no soro (mg/dL) VM: volume minuto (Volume urinrio de 24 horas, em mL, dividido por 1440) Observao: A depurao dever ser corrigida para a superfcie corporal do paciente, que obtida atravs do nomograma correlacionando peso-altura. Multiplicar o valor da depurao por 1,73 e dividir pela superfcie corporal do paciente. 3.6 RESULTADOS

Unidade de medida
mg/dL

Valores de referncia
Soro ou plasma: 0,4 a 1,3 mg/dL Urina: Homens: 21 a 26 mg/Kg peso/24 horas Mulheres: 16 a 22 mg/Kg peso/24 horas mg/Kg peso = mg/24 horas dividido pelo peso corporal Depurao da creatinina: Homens: 97 a 137 mL/minuto/1,73 m2 Mulheres: 88 a 128 mL/minuto/1,73 m2 Valores crticos Soro ou plasma: > 5,0 mg/dL Depurao da creatinina < 28 mL/minuto/1,73 m2 LIMITAES DO PROCEDIMENTO

Linearidade
A reao linear at 12 mg/dL. Para valores maiores, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L, (0,85%) e repetir a determinao. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe entre 2 e 6 mg/dL..

Interferncias
1- Aumento da creatinina pode ocorrer por interferncia de substncias como o piruvato, cido rico, frutose, guanidina, hidantona, cido ascrbico, vrias cefalosporinas, particularmente cefoxitina. A presena de lipemia, hemlise ou ictercia pode interferir na dosagem da creatinina. Trimetoprim, cimetidina, quinina, quinidina, procainamida reduzem a depurao da creatinina. Durante a gravidez e aps exerccios fsicos pode-se verificar aumento da depurao da creatinina. 4. SIGNIFICADO CLNICO A constncia na formao e excreo da creatinina faz dela um marcador muito til da funo renal, principalmente da filtrao glomerular, em funo da sua relativa independncia de fatores como a dieta, grau de hidratao e metabolismo protico. A determinao da creatinina plasmtica um teste de funo renal mais seguro do que a uria. Nas doenas renais, a creatinina se eleva mais vagarosamente que a uria e se reduz mais vagarosamente com a hemodilise. Fatores extra-renais, como insuficincia cardaca congestiva, choque e obstruo mecnica do trato urinrio provocam elevao da creatinina plasmtica. A determinao da concentrao de creatinina no lquido amnitico considerada um dos parmetros para a avaliao da maturidade fetal, estando correlacionada no apenas com a maturidade dos rins, mas tambm com a maturidade pulmonar. 5- GERENCIAMENTO DOS RESDUOS QUMICOS: 5.1-RESDUOS GERADOS/QUANTIDADE/ DISPOSIO (desativao, tratamento, destino final): Os Reagentes contm cido pcrico e Acido Actico 5.2- RECIPIENTE PARA DESCARTE: D ( x ) 6.0 MEDIDAS DE PREVENO Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana da FCBS. OBRIGATORIO: USO DE LUVAS, OCULOS DE PROTEO, MASCARA E JALECO MANGAS LONGAS. VEDADO O USO DE ADORNOS NA REALIZAO DA PRATICA. 7.0 BIBLIOGRAFIA Creatinina, Instrues de Uso, Labtest Diagnstica. Burtis CA. Tietz, fundamentos de qumica clnica. 6 ed. Rio de Janeiro: ELSEVIER, 2008. Henry JB. Diagnsticos Clnicos e Tratamento por Mtodos Laboratoriais. 20 ed. So Paulo: 2008. 1734 p. Motta VT. Bioqumica clnica para o laboratrio. 5 ed. Rio de Janeiro: MEDBOOK, 2009. Almeira MFC. Boas prticas de laboratrio. So Caetano do Sul: EDITORA DIFUSAO, 2008. Champe PC, Harvey RA, Ferrier DR. Bioquimica Ilustrada. 4 ed. Porto Alegre: ARTMED, 2009. Ciriades PGJ. Manual de patologia clinica. SAO PAULO: ATHENEU, 2009. Strasinger SK, Lorenzo MSD. Urinlise e fluidos corporais. 5 ed. So Paulo: LIVRARIA MEDICA PAULISTA, 2009.