UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE NICARAGUA, UNAN-Len.

Facultad de Ciencias Mdicas

Carrera de Bioanlisis Clnico IV Curso

Componente: Bacteriologa II Tema: Reporte de laboratorio nmero 6 (Diagnostico de meningitis bacteriana) Coordinadora: Lic. Margarita Paniagua Msc.

Autor: Luis Adn Mairena Alvarado. Numero: 15

A la libertad por la Universidad! Len, Mircoles 4 de julio del 2012.

Introduccin

La meningitis es un proceso inflamatorio agudo del sistema nervioso central causado por microorganismos que afectan las leptomeninges. Un 80% ocurre en la infancia, especialmente en nios menores de 10 aos. En la ltima dcada, con la introduccin de nuevas vacunas frente a los agentes bacterianos causales ms frecuentes: Heaemophilus influenzae b, Neisseria meningitidis y Streptococcus pneumoniae. Con el desarrollo de antibiticos mas potenciales y con buena penetracin hematoenceflica, ha disminuido la incidencia y ha mejorado el pronostico de la infeccin, pero las secuelas y la mortalidad no han sufrido grandes cambios (1).

Otros de los agentes etiolgicos pero reportados con menos frecuencia son: Streptococcus agalactiae (frecuente en periodo neonatal en relacin con la colonizacin materna en el canal del parto), Escherichia coli y Listeria monocytogenes, en los nios entre 1 y 3 meses de vida pueden aislarse los patgenos neonatales y los propios de mayores de 3 meses (H. influenzae b, N. meningitidis y S. pneumoniae) (1).

Dentro de la competencia del Bioanalista clnico le corresponde el buen manejo y procesamiento de la muestra, para este caso lquido cefalorraqudeo, al cual se le realizan tres anlisis: Recuento citolgico de las clulas blancas, examen bioqumico (glucosa y protenas), y por ultimo el examen microbiolgico o bacteriolgico mencionados (1,2).
(1,2)

. Aunque existen

otros mtodos diagnostico como radiografas y TAC, los mas utilizados son los antes

El objetiv de este informe es presentar los resultados obtenidos en la prctica.

Material y Mtodos

Una muestra (LCR) desconocida en dos tubos para diferentes anlisis cada uno (citolgico y microbiolgico), fue proporcionada por el instructor. Las pruebas posteriores se realizaron segn el manual de procedimientos de bacteriologa medica del MINSA y gua de laboratorio facilitada (2). El primer procedimiento fue realizar un estudio citolgico: frotis diferencial (tincin de wright) y recuento de glbulos blancos (en cmara de neubauer) con el objetivo de observar la distribucin y concentracin de leucocitos. Luego se procedi a efectuar el estudio microbiolgico, con la muestra previamente centrifugada y descartado el sobrenadante: se realizo tincin de Gram con el objetivo de conocer la morfologa de las clulas bacterianas, tincin al fresco con tinta china con el objetivo de conocer la presencia de estructuras levaduriformes. Posteriormente se realizo la siembra de la muestra centrifugada en un plato de agar sangre y agar MacConkey, utilizando la tcnica de sembrado por estra con el objetivo de conocer la pureza del microorganismo. Los platos fueron incubados (anaerobiosis agar sangre y aerobiosis agar Mackonkey) a 37C por 24 horas, la morfologa de las colonias fue observada y luego una tincin de Gram fue llevada a cabo., se procedi a registrar los datos obtenidos e identificar al microorganismos sospechoso. Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo al protocolo de trabajo y manual de procedimientos de bacteriologa medica del MINSA (2).

Resultados La tabla 1 lista todas las pruebas realizadas, su propsito y sus resultados correspondientes al estudio citolgico. Tabla 1 Prueba Tincin de wright Propsito Teir estructuras acidas y bsicas de los leucocitos, con el objetivo de hacer recuento celular, Reactivos Resultados Observaciones

Laminas No se observan Ninguna portaobjeto, leucocitos. gota de LCR, solucin colorante de wright.

Recuento de Determinar la leucocitos en cmara cantidad de de Neubauer leucocitos en mm3 multiplicando por un factor que resulta de la profundidad de la cmara y nmero de cuadrantes (2.5 para este recuento).

Acido actico 175 leucocitos 70 leucocitos en glacial, azul de por mm3. los cuatro metileno y agua cuadrantes. destilada.

La tabla 2 lista todas las pruebas realizadas, su propsito y sus resultados correspondientes al estudio microbiolgico. Tabla 2 Prueba Propsito Reactivos Observaciones Resultados No se observan estructuras levaduriformes.

Tincin de tinta china Teir Lamina Ninguna estructuras portaobjeto y levaduriformes. cubreobjeto, gota de LCR, gota de solucin colorante de tinta.

Tincin de Gram

Determinar la Cristal violeta, Cocobacilos reaccin de Lugol Alcohol, rosados. Gram de las Safranina. bacterias.

Cocobacilos negativos.

Gram

Las colonias inoculadas en agar sangre presentaron la siguiente morfologa: colonias pequeas, con pigmentos grises y velos grises, convexas bien diferenciadas, hemolisis completa. Despus se determino a travs de una tincin de Gram que estas eran

cocobacilos Gram negativos. Para las colonias en agar MacConkey se observaron colonias con las siguientes caractersticas: colonias lactosa negativa, pequeas, convexas, secas. Colonias lactosa positiva, pequeas, convexas, secas. La tabla 3 lista la tincin de Gram realizada a las colonias de estos medios. Tabla 3 Medio Agar sangre Prueba Propsito Reactivos Observaciones Tincin de Determinar la Cristal violeta, Cocobacilos Gram reaccin de Lugol Alcohol, rosados. Gram de las Safranina. bacterias. Tincin Gram de Determinar reaccin Gram de bacterias. la Cristal violeta, Cocobacilos de Lugol Alcohol, rosados. las Safranina. Resultados Cocobacilos Gram negativos.

Agar MacConkey *

Cocobacilos Gram negativos.

*debo hacer inferencia en este resultado debido a que la bacteria que me creci en este
medio, era la misma que creci en agar sangre, segn consulta con el tutor presente en la evaluacin de los medios.

Discusin de resultados

Tabla 1 (estudio citolgico) A travs de la realizacin de la tincin de wright se logro determinar la presencia de leucocitos que para este resultado no se observaron, esto pudo deberse al momento de realizar el frotis se pudo haber colocado muy poca muestra o haber realizado un mal montaje de la misma, debido a que en el recuento celular en la cmara de Neubauer se contaron 70 clulas en los cuatro cuadrantes que multiplicado por el factor que es 2.5 (10/4 profundidad de la cmara y numero de cuadrantes contados) para este caso obtenemos un total de 175 leucocitos por mm3, lo que infiere en el resultado del frotis. Tabla 2 (estudio microbiolgico) A travs de la realizacin de una tincin con tinta china, se logro determinar que no haban estructuras levaduriformes, al no observarse estas. Posteriormente se realizo una tincin de Gram determinando la presencia de cocobacilos Gram negativos muy caractersticos de uno de los agentes etiolgicos de meningitis bacteriana. Tabla 3 (medios de cultivo) A travs de la inoculacin en medios de cultivo logramos aislar e identificar a la presunta bacteria, para este caso inoculamos en agar sangre obteniendo colonias pequeas, con pigmentos grises y velos grises, convexas bien diferenciadas, hemolisis completa. Mientras que en agar MacConkey crecieron dos tipos de colonias: lactosa negativa y lactosa positiva, pequeas. Cabe destacar que para ambas colonias presuntamente era la misma bacteria. Posteriormente se le realizo una tincin de Gram, inoculando de 2 a 3 colonias de cada uno de los medios en una lamina portaobjeto con una gota de solucin salina. Determinando la presencia de cocobacilos Gram negativos.

Es necesario mencionar que cada uno de estos procedimientos (exceptuando el examen citolgico) se efectuaron a la muestra centrifugada a 1500 rpm por 5 minutos, descartando el sobrenadante y utilizando el sedimento. Tambin es necesario mencionar que no se realizaron pruebas bioqumicas como: catalasa, oxidasa, satelitismo a colonias Staphylococcus aureus, determinacin de requerimiento de factores X y V, fermentacin de carbohidratos, produccin H2S, sntesis de porfirinas, serotipificacin, etc reporte de laboratorio debe ser presuntivo (1,2).
(2)

Para

identificar correctamente al agente etiolgico, si no dispone de pruebas bioqumicas el

Conclusin

Despus de la realizacin de diferentes pruebas diferenciales se concluye que el espcimen presuntivamente encontrado en la muestra de liquido cefalorraqudeo e investigado en esta prctica era Heaemophilus influenzae b.

Bibliografa.

1. B. Fernando, L. Raquel, C. Fernando del Castillo Meningitis bacteriana Hospital infantil de la Paz Madrid. 2. Manual de procedimientos de bacteriologia medica Republica de Nicaragua, Ministerio de salud, Centro Nacional de diagnostico y Referncia (CNR), Departamento de Bacteriologia.