Quim. Nova, Vol. 29, No.

5, 1114-1120, 2006 DETERMINAO DE NITRITO EM GUAS UTILIZANDO EXTRATO DE FLORES

Educao

Luiz Antnio Ramos, Carla Cristina Schmitt Cavalheiro e der Tadeu Gomes Cavalheiro* Instituto de Qumica de So Carlos, Universidade de So Paulo, CP 780, 13560-970 So Carlos - SP Recebido em 7/4/05; aceito em 4/11/05; publicado na web em 31/3/06

DETERMINATION OF NITRITE IN WATER USING A FLOWER EXTRACT. Aspects of visible spectrophotometry can be presented to students using simple experiments in which the color of the crude extract of Macroptilium lathyroides (L.) Urb. is bleached in the presence of nitrite ions in acidic medium. The dependence of the absorption intensity with time, the reaction completeness and the Beer law can be demonstrated. Quantitative results for mineral water samples contaminated with nitrite ions were obtained from a method based on the Griess reaction and a procedure based on the bleaching reaction between the crude extract and NO2- ions. Both the Griess and the bleaching reactions were found to be time dependent. Recoveries of about 100 104% were obtained with these procedures. The use of natural dyes attracted students interest enhancing the teaching process. Experiments performed by the teaching staff suggested that the proposed methodology can be performed in a 4 h class, with relative errors ranging from 0.19 to 1.86% in relation to the Griess method. Keywords: acid-base chemistry; instrumental methods; water/water chemistry.

INTRODUO O uso de extratos brutos de flores no ensino de qumica foi relatado em diversas oportunidades1-8, uma vez que tal abordagem pode ajudar o estudante a estabelecer uma conexo entre a qumica e as substncias encontradas no seu cotidiano. As antocianinas so flavonides presentes em um grande nmero de tecidos vegetais incluindo flores e frutas, conferindo-lhes as cores vermelha e azul9,10. Quando extradas do meio natural, usualmente apresentam molculas de acar ligadas aos grupos hidroxila nas posies 3 e/ou 4. Quando livres destas molculas de acar so chamadas antocianidinas, cuja estrutura genrica apresentada na Figura 1 com atribuio usual dos tomos de carbono10. Dependendo dos substituintes, nas posies R e R, define-se uma antocianidina diferente.

Figura 1. Estrutura de uma antocianidina genrica, mostrando as posies dos tomos de carbono. Dependendo dos substituintes R e R so definidas, antocianidinas diferente

A primeira aplicao da mudana da cor dos extratos brutos de flores no ensino de qumica foi relatada por Geissman11 e foi relacionada com as mudanas de cor em funo do pH. Estas mudanas de cor ao mudar o pH foram usadas para ilustrar os princpios bsicos de equilbrio qumico12,13; suas aplicaes como indicadores em titulaes cido-base14; nos fundamentos dos mtodos ticos de anlise15 e em cromatografia em camada delgada16, usando extratos brutos de flores e da casca de feijo preto. A determinao

*e-mail: cavalheiro@iqsc.usp.br

de sulfito em amostras de vinho branco17, baseada na reao de descoramento da soluo contendo o extrato bruto de flores, tambm foi proposta. O baixo custo e a facilidade de preparao destes extratos permitem seu uso em qualquer escola. Em adio, qualquer espcie vegetal contendo antocianinas pode ser usada. Neste trabalho, prope-se o uso do extrato bruto extrado das flores de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. na demonstrao de princpios de espectrofotometria na regio do visvel e sua aplicao na determinao de nitrito artificialmente adicionado em amostras de gua minerais. Os principais objetivos didticos so a demonstrao dos princpios bsicos do desenvolvimento de um novo mtodo tico de anlise, o uso de materiais alternativos em anlise qumica e a comparao do novo mtodo com procedimentos clssicos. A sensibilidade e a dependncia das reaes qumicas em relao ao tempo tambm podem ser exploradas. O conjunto de experimentos aqui descrito poderia ser usado em projeto didtico inserido em um curso de anlise instrumental e/ou partes dele poderiam ser usadas em uma nica aula, para demonstrao de contedos mais especficos. Os corantes naturais foram extrados das flores de Macroptilium lathyroides (L.) Urb., (Phaseolus lathyroids (L.), Phaseolus semierectus (L.) D.C., Phaseolus crotalaroides Mort.), que uma leguminosa de clima tropical originria da Amrica do Sul. Tratase de uma planta de ocorrncia anual encontrada no sul dos Estados Unidos, (Wilde bushbean, Phasey bean), nas Amricas Central e do Sul (Frijol de monte/Venezuela, Frijol de los arrozales/ Colombia, Feijo de pombinha ou Feijo do campo/Brasil), Austrlia (Murray phasey bean) e no Hava (Wild pea bean). Informaes adicionais sobre esta espcie podem ser encontradas na literatura especializada e na internet18. Uma fotografia da flor do Macroptilium lathyroides (L.) Urb. apresentada na Figura 2. Outras espcies contendo antocianinas podem ser usadas como fonte dos extratos naturais, por ex. a Rhododendron simsii, azlea, uma planta de origem asitica, cuja flor conhecida em todo mundo. Entretanto, a espcie sugerida inicialmente apresenta maior sensibilidade na anlise, devido maior quantidade de corantes em suas ptalas.

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bina, que menos eficiente na absoro e transferncia de oxignio para as clulas. De acordo com o grupo KY Water Watch24, o limite mximo de nitrito em guas ingeridas por bebs de 1,0 mg L-1. A reao de Griess O mtodo oficial para determinao do nitrito envolve, geralmente, os procedimentos espectrofotomtricos baseados na reao de Griess25-27, na qual o nitrito reage com a sulfanilamida em meio cido. O diazo composto formado reage com o cloridrato de N-(lnaftil)etilenodiamina (NED), gerando um composto de colorao vermelha intensa, de acordo a Equao 2. A reao controlada pelo tempo, e o produto deve ser determinado entre 10 min e 2 h aps a mistura dos reagentes. A Equao 2 representa um mecanismo de reao usada no mtodo de Griess, que foi proposto por Sawicki et al. aps investigarem 52 sistemas diferentes25-27.

Figura 2. Flor de Macroptilium lathyroides (L.) Urb, popularmente conhecido como feijo do campo ou feijo de pombinha, encontrada no campus da UFSCar em So Carlos/SP

FUNDAMENTAO Consideraes sobre a importncia da determinao do nitrito (2) A determinao de nitrito um assunto importante, uma vez que ele um aditivo alimentcio muito usado na conservao de carnes e cura de embutidos. O nitrito tambm um potencial agente poluidor de guas naturais, nas quais pode estar presente devido decomposio de matria orgnica nitrogenada. O nitrito a base conjugada do cido nitroso, um cido fraco com pKa = 3,2919. A concentrao de anions nitrito em guas naturais raramente superior a 0,1 mg L-1. Entretanto, adicionado gua usada em processos industriais, como inibidor da corroso podendo, assim, estar presente em esgotos19. Por outro lado, sendo o nitrito um produto da reduo do nitrato, estar freqentemente presente em sistemas nos quais o on nitrato atue como um oxidante. Neste sentido, o aumento da concentrao do nitrato carregado pela lixiviao do solo de propriedades agrcolas para cursos dguas, vem causando preocupao do ponto de vista ecolgico. Neste caso, as principais fontes artificiais de nitrato so dejetos animais e nitrato de amnio no absorvido dos fertilizantes. Embora o nitrito seja um poluente de guas, muito til quando usado como agente de cura, fixador de cor e conservante do flavor em diferentes produtos derivados de carne. O nitrito tambm importante na proteo destes produtos contra microorganismos que podem causar o envenenamento, tal como Clostridium botulinum20,21, que causa o botulismo. Neste caso, o nitrito seguro se usado nos nveis recomendados, sendo importante o controle da sua concentrao. O excesso de nitrito em guas representa um potencial risco para a sade, pois pode causar a meta-hemoglobinemia (sndrome do beb-azul) em recm-nascidos e mesmo em adultos com particular deficincia enzimtica. A quantidade de nitrito deve tambm ser controlada devido possvel formao de nitrosaminas carcinognicas, pela sua reao com aminas secundrias presentes no estmago de mamferos22. O nitrato pode tambm ser convertido a nitrito pela ao de algumas enzimas da saliva e bactrias especficas, de acordo com a reao23: NO3- + 2H+ + 2e- NO2- + H2O (1)

PARTE EXPERIMENTAL Instrumentao Todas as medidas podem ser realizadas em um espectrofotmetro convencional capaz de realizar leituras na regio do visvel. No caso deste trabalho, as medidas foram realizadas com auxlio de um espectrofotmetro Genesis 20 (Spectronic, EUA), usando cubetas de plstico (polimetacrilato) com caminho tico de 1,0 cm. Preparao da soluo padro de nitrito 100 mg L-1 (100 ppm) A soluo padro de ons nitrito 100 mg L-1 (100 ppm) foi preparada dissolvendo-se 0,1500 g de NaNO2 (0,1000 g do on nitrito) em um balo volumtrico de 1,00 L, completando-se o volume com gua destilada. O sal foi previamente seco em estufa 105 C durante 1 h e resfriado em dessecador. Nesta etapa, recomenda-se rigor ao preparar esta soluo, pois a mesma servir de padro e estoque para todas as diluies feitas durante todo o experimento. As solues do nitrito devem ser preparadas recentemente (no mais que 6 h) e o uso de um reagente PA recm-adquirido e de boa procedncia fortemente recomendado. As amostras de gua contaminadas As amostras contaminadas podem ser preparadas adicionando-se nitrito de sdio em amostras de gua mineral comercial. O clculo e os resultados descritos aqui so para 5 ppm do on nitrito e permitem que os resultados permaneam dentro dos limites analticos da curva para o mtodo proposto e de Griess. Isto pode ser obtido dissolvendo-se 5,00 mL de uma soluo 100 ppm de nitrito (0,1500 g de NaNO2 em 1,00 L) em 95,00 mL de gua mineral. Se

A sndrome do beb-azul ocorre porque o nitrito oxida os ons ferrosos da hemoglobina a ons frricos gerando a meta-hemoglo-

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houver disponibilidade de tempo, trs amostras de gua de diferentes fontes podem ser preparadas permitindo executar clculos estatsticos. A equipe instrutora pode executar esta etapa. Neste trabalho, a amostra de nmero 3 foi uma gua mineral com gs, desgaseificada em banho de ultra-som por 20 min. Preparao do extrato bruto de flores Dependendo da disponibilidade de tempo, os estudantes podem preparar os extratos brutos de flores antes do experimento ou, alternativamente, a equipe instrutora pode prepar-los e fornecer aos estudantes no incio da aula. O extrato pode ser preparado com as ptalas recm-colhidas ou congeladas com cuidado. Para obteno do extrato bruto foram utilizadas aproximadamente 25 g de ptalas de Macroptilium lathyroides (L.), ou outra espcie que contenha antocianinas, tais como o de Rodhodendron simsii - azlea, imersas em 100 mL de etanol. O tempo de extrao estabelecido foi de 48 h, mantendo-se o material em um frasco de vidro envolvido em papel alumnio e temperatura ambiente12,17. Aps filtrao, o lquido resultante foi diludo para 250,0 mL com etanol anidro. Obteno do espectro de absoro e determinao do comprimento de onda no mximo de absoro para os extratos brutos de flores Para obter os espectros de absoro sugere-se usar uma soluo preparada transferindo-se 3,0 mL do extrato bruto para um balo volumtrico de 25,0 mL e completando-se o volume com uma soluo de HCl 0,1 mol L-1. Recomenda-se medir o espectro 15 min aps a preparao da soluo, para determinar o comprimento de onda do mximo absorbncia (max), uma vez que a absorbncia aumenta com o tempo, tendendo a um valor constante aps 15 min. Sugere-se obter o espectro ponto-a-ponto com intervalos de 10 nm entre 400-490 nm, de 4 nm entre 490-550 nm, depois novamente intervalos de 10 nm entre 550-700 nm. A partir do espectro (grfico da absorbncia em funo do comprimento de onda), deve-se determinar o comprimento de onda do mximo de absoro. Alternativamente, pode-se medir a absorbncia no max para espectros de solues contendo quantidades diferentes de extrato bruto e verificar a obedincia Lei da Lambert-Beer12. Determinao do nitrito usando o extrato bruto de flores Uma curva analtica pode ser obtida colocando-se 0,00 (branco), 200, 400, 600, 800 e 1000 L da soluo padro de nitrito 100 ppm e 1000 L do extrato bruto em 5 bales volumtricos diferentes de 25,0 mL e completando-se o volume com uma soluo de HCl 0,1 mol L-1. A absorbncia no max (determinado como descrito acima) deve ser medida 10 min aps preparar a soluo. A reao de descoramento dependente do tempo (como a reao de Griess). Assim, o tempo e as concentraes devem ser controlados com cuidado. Para obter uma curva analtica do nitrito entre 1,0-4,0 ppm, recomendase que a absorbncia para a soluo do branco em pH 1 aps 10 min seja da ordem de 0,3 unidades. Os resultados obtidos devem ser lanados na Planilha 1. Anlise da amostra usando o extrato bruto de flores A soluo de trabalho pode ser preparada diluindo-se 10,0 mL da amostra de gua contaminada e 1000 L do extrato bruto com HCl 0,10 mol L-1 em um balo volumtrico de 25,0 mL. A concen-

trao resultante do on do nitrito na soluo de trabalho fica em torno de 2,0 ppm. A absorbncia no max medida 10 min aps preparar esta soluo. Os resultados obtidos tambm devem ser lanados na Planilha 1. Planilha 1. Resultados obtidos nas determinaes de nitrito em amostras de gua mineral contaminadas, utilizando o mtodo proposto com a reao de descoramento do extrato bruto de flores Solues* Absorbncia em _________ nm Replicatas 1 NO2 0,00 NO2- 0,80 NO2- 1,60 NO2- 2,40 NO2- 3,20 NO2- 4,00 Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3
a

3a

Mdia SD

ppm ppm ppm ppm ppm ppm

*Solues obtidas respectivamente pela diluio de 0,00; 200; 400; 600; 800; 1000 L da soluo padro 100 ppm de nitrito Determinaes analticas com a reao de Griess Inicialmente uma soluo de 3,5 ppm em ons nitrito deve ser preparada pela diluio de 35,00 mL da soluo estoque padro contendo 100 ppm do on nitrito em 1,00 L. Outras duas solues devem ser preparadas para a determinao, de acordo com o mtodo de Griess. Soluo A: deve ser recm-preparada, dissolvendose 0,5 g da sulfanilamida em uma mistura de 5,00 mL de HCl concentrado e 30,0 mL da gua. A soluo resultante deve ser diluda com gua destilada, para 50,0 mL, em balo volumtrico. Soluo B: deve ser recm-preparada, dissolvendo-se 0,05 g do cloridrato de N-(1-naftil)etilenodiamina (NED), em gua e diluda para 50,0 mL em balo volumtrico. Esta soluo tem que ser armazenada em um recipiente escuro. A curva analtica pode ser obtida diluindo-se 1,00; 2,00; 3,00; 4,00; e 5,00 mL da soluo padro 3,5 ppm do on nitrito para 100,0 mL em cinco bales volumtricos diferentes, resultando nas seguintes concentraes 0,80; 1,59; 2,39; 3,19; 3,99 ppm (mg L-1). Ento, 25,0 mL de cada padro devem ser transferidos para bqueres (gua para o branco) com 0,50 mL da soluo A (sulfanilamida). Depois da mistura, a soluo deixada por 2-8 min a fim de completar a reao de diazotao (Equao 1). Finalmente, 0,50 mL da soluo B (NED) so adicionadas mistura resultante e homogeneizadas. A formao da cor dependente do tempo e a absorbncia em 543 nm foi medida aps 15 min para o branco e os padres. Os resultados obtidos devem ser lanados na Planilha 2. Anlise das amostras usando o mtodo de Griess A anlise das amostras deve ser feita transferindo-se 600 L da gua mineral contaminada para bales volumtricos de 25,0 mL e completando-se o volume com gua destilada. Estas solues so transferidas para bqueres e misturadas s solues A e B exatamente como descrito acima, para os padres. A formao da cor dependente do tempo e a absorbncia deve ser medida em 543 nm, aps 15 min. Os resultados obtidos tambm devem ser lanados na Planilha 2.

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Planilha 2. Resultados obtidos nas determinaes de nitrito em amostras de gua mineral contaminadas, utilizando o mtodo de Griess Solues* Absorbncia em _________ nm Replicatas 1 NO2 0,000 NO2- 0,035 NO2- 0,700 NO2- 0,105 NO2- 0,140 NO2- 0,175 Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3
a

O cloridrato de N-(1-naftil)etilenodiamina (NED) irritante aos olhos, ao sistema respiratrio e pele. Em caso de contato com olhos, deve-se enxaguar imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico32. RESULTADOS ESPERADOS E DISCUSSO

Mdia SD

ppm ppm ppm ppm ppm ppm

*Solues obtidas respectivamente pela diluio de 0,00; 1,00; 2,00; 3,00; 4,00; 5,00 mL da soluo padro 3,5 ppm de nitrito. Resumos das atividades a serem desenvolvidas pelos alunos Deve ser solicitado aos estudantes que executem as seguintes atividades: a. traar o espectro de absoro para a soluo do extrato bruto de flores e determinar o comprimento de onda no mximo de absoro; b. traar a curva analtica com o extrato bruto de flores e calcular o teor de nitrito nas amostras, usando os dados da Planilha 1. As medidas podem ser realizadas em triplicata; c. traar curva analtica com o mtodo de Griess e calcular o teor de nitrito nas amostras, usando os dados da Planilha 2. As medidas podem ser realizadas em triplicata; d. verificar se os resultados esto de acordo com regulamentos ambientais e com nveis definidos pela legislao local, caso haja tais recomendaes; e. se executar a experincia com replicatas, determinar o valor mdio e o desvio padro; f. se for realizado o projeto completo, comparar os resultados do mtodo de Griess e do extrato bruto de flores usando estatstica de comparao de mdias28; g. comparar os resultados com os colegas de classe, que tenham desenvolvido o mesmo projeto. Cuidados com os reagentes utilizados A ingesto freqente de pequenas doses de nitrito pode levar hipotenso (diminuio na presso sangunea), taquicardia (acelerao do pulso), dor de cabea e distrbios visuais. A ingesto oral de grandes quantidades de nitrito pode causar nusea, vmito e, em casos extremos, coma. Os compostos carcinognicos, como nitrosaminas, so sintetizados pela reao de nitritos com alguns produtos qumicos presentes em alimentos, no estmago. O FDA, (Food and Drug Administration - rgo do governo norte-americano, que regula alimentos e produtos farmacuticos), indica que a adio de vitamina C diminui a formao das nitrosaminas29. Apesar destes problemas, o nitrito pode ser usado como antdoto na ingesto de cianeto. Tambm atua como vasodilatador, diminuindo a presso sangunea e alivia espasmos musculares. A sulfanilamida, alm de ser um bactericida30, pode ser prejudicial se ingerida ou inalada, podendo agir como um irritante e provocar anemia31.

Os resultados descritos a seguir foram obtidos pelos autores deste trabalho. Inicialmente, pensou-se no uso de embutidos de carne como fonte de nitrito. Entretanto, o preparo de amostra requer um nvel de treinamento e habilidade, que levaria a uma demora muito grande no desenvolvimento dos trabalhos. Desta forma, uma prtica semelhante, visando determinao de nitrito em guas, foi proposta a 20 alunos do curso de Engenharia de Produo Qumica da UFSCar. Os aspectos didticos foram bastante satisfatrios quanto motivao e ao interesse dos alunos pelos resultados obtidos, principalmente em relao ao uso de indicadores naturais, o que levou a uma facilitao da discusso do contedo envolvido: espectrofotometria, cintica de reao, determinao usando curva analtica, estatstica de resultados, reao de Griess, reao de descoramento e qumica de antocianinas, comparao de resultados entre mtodos analticos, entre outros. O desenvolvimento dos trabalhos experimentais e sua discusso foram feitos em duas aulas de 4 h de durao. Optou-se por usar as unidades em ppm (mg L-1), por serem muito usuais nas anlises de gua, inclusive nos rtulos das amostras empregadas. Espectros de absoro na regio do visvel Um espectro de absoro tpico do extrato de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. (feijo de pombinha) apresentado na Figura 3, com max em 526 nm. A insero nesta figura mostra em detalhe o comportamento da absorbncia para diferentes quantidades: 1,0 5,0 mL do extrato bruto em 25,0 mL de HCl 0,1 mol L-1 (pH 1,0). Um aumento linear da absorbncia observado, de acordo com a Lei de Lambert-Beer. Resultados similares foram observados para o extrato bruto da Rodhodendron simsii (azlea), com pequenas mudanas na posio do max (resultados no apresentados. Ver ref. 12).

Figura 3. Espectro de absoro do extrato bruto das flores de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. obtido aps 20 min da diluio com HCl 0,10 mol de L-1. Em detalhe a demonstrao do aumento na absorbncia com a quantidade do extrato, que demonstra a obedincia Lei de Lambert-Beer em 526 nm

Dependncia da absorbncia com o tempo, no max A cor do extrato muda rapidamente de roxo para vermelho,

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Figura 4. Equilbrios cido-base envolvendo as antocianinas em diferentes pH

com a adio de HCl. Por outro lado, a intensidade da absorbncia aumenta lentamente com o tempo. Brouillard et al.33,34 propuseram que um salto de pH de 5 para 1 causa uma reao rpida de protonao das antocianinas presentes no extrato. Tais equilbrios ainda esto sob investigao e um conjunto de reaes propostas para explicar tais mudanas da cor foi descrito por Epp35 e so apresentados na Figura 4. A mudana na absorbncia em 526 nm quando o extrato bruto diludo com o HCl 0,1 mol L-1 mostrada em Figura 5, que ilustra um comportamento assinttico, que tende a alcanar o equilbrio aps 15 min de reao. Na presena de ons nitrito o extrato colorido descorado, entretanto a reao ainda no foi totalmente elucidada.

Apesar de Iacobucci e Sweeny36 terem descrito reaes das antocianinas com diversos oxidantes, redutores, nuclefilos e eletrfilos, nenhuma referncia foi encontrada sobre reaes com nitrito e outros ons normalmente presentes em guas naturais, tais como o Cl-, SO42-, NO3-, o HCO3- e outros que poderiam interferir no procedimento proposto. Fichtner et al.37 descreveram que a reao de nuclefilos na posio C-4 ocorre mais rapidamente que na posio C-2 e investigaram a cintica das reaes de ons flavlio com -nuclefilos diferentes do nitrito. Com base em tais resultados, os autores concluram que as substituies ocorrem principalmente na posio C-4. No presente estudo observou-se que o descoramento das antocianinas pelo nitrito mais eficiente em pH 1,0. A exemplo do que ocorre com o hipoclorito38, a reao poderia ser representada por: antocianidina + NO2- + H+ produto incolor desconhecido (3)

Figura 5. Mudanas na absoro do extrato bruto em uma soluo contendo 1,0 mL do extrato bruto das flores de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. e 10,0 mL de HCl 0,25 mol L-1 em um volume de 25,0 mL, (pH final ~1.0) em funo do tempo. = 526 nm

No caso do sulfito, o nion reage com a antocianina provocando seu descoramento17. A adio do SO32- na posio C-4 do on flavlio bloqueia a delocalizao eletrnica na molcula de antocianina, provocando diminuio na intensidade de cor da soluo.

Esta reao causar uma diminuio contnua na absorbncia, enquanto compete com o equilbrio cido-base, como representado pelas curvas de absorbncia em funo do tempo, para diferentes concentraes de nitrito, apresentadas na Figura 6. Pode-se observar nesta figura que, para baixas concentraes de nitrito, somente aps aproximadamente 5 min a reao de descoramento superar o aumento de absorbncia, devido formao da forma vermelha da antocianina. Este fato influencia marcadamente os parmetros das curvas analticas para o sistema extrato bruto nitrito, cuja reao tambm dependente do tempo. As melhores correlaes lineares para curvas analticas foram obtidas quando as absorbncias foram lidas 5 ou 10 min aps a mistura dos reagentes, como ilustrado na Figura 6. Quando o extrato de Rodhodendron simsii (azlea) foi usado, um comportamento similar foi observado. Para tempos de reao menores que 5 e maiores que 10 min, as curvas analticas apresentam piores coeficientes de correlao linear, apesar de que as medidas tomadas aps longos tempos de reao melhorem a sensibilidade, provocando maior descoramento da soluo de corante natural. Com base nestas observaes, sugere-se o uso de 10 min uma vez que melhor sensibilidade pode ser obtida, com coeficiente de

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Figura 6. Dependncia da absorbncia com o tempo na reao de descoramento para diferentes concentraes de nitrito. Extrato bruto das flores de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. = 1,0 mL, pH 1,0. = 526 nm

correlao indicando boa linearidade, pois a reao de descoramento se torna mais significativa que o equilbrio cido-base a partir de ento. As curvas analticas obtidas aps 1, 5, 10 e 15 min de reao, sob as mesmas circunstncias so apresentadas na Figura 7, e representam a mdia de trs determinaes para cada um dos pa-

dres. importante observar que, devido magnitude das concentraes de nitrito usadas neste trabalho, se sugere que a absorbncia da soluo do extrato bruto (branco) deva ser ao redor 0,3 unidades aps 10 min e que a regio linear de resposta para o on do nitrito foi observada para concentraes acima de 1,0 ppm. Uma curva analtica obtida sob as mesmas condies, mas usando o extrato bruto da Rodhodendron simsii (azlea), 10 min aps misturar os reagentes obedeceu relao linear: Abs = 0,868 0,00605 [NO2-] (R = -0,9992, n=5), sugerindo que o extrato bruto de qualquer outra espcie contendo antocianinas pode ser usado neste tipo de determinao. Entretanto, a sensibilidade pode variar devido aos diferentes teores de corantes em cada espcie. Os resultados para as amostras de gua mineral contaminadas com 5,00 ppm de ons nitrito, determinados aps 10 min de reao so apresentados na Tabela 1. Esta tabela compara tambm os resultados para o mtodo proposto com os aqueles obtidos usando a reao de Griess, a qual tambm dependente do tempo. Os resultados de ambos os mtodos esto de acordo, com erros relativos menores que 2% em relao aos dois mtodos e concordam entre si com 95% de confiana, de acordo com o teste t-Student para comparao de mdias (Tabela 1)28. As medidas realizadas aps 5 min de reao, permitiram aumentar a freqncia analtica, porm com ligeira perda de sensibilidade. DESTAQUES DIDTICOS a) O uso dos produtos qumicos extrados dos materiais do cotidiano, como as flores, reala a viso da importncia da qumica na vida. Adicionalmente, a anlise de nitrito por um mtodo alternativo representa uma conexo desejvel da qumica com a contaminao das guas e outros assuntos ambientais. b) Antes de executar as anlises do nitrito, foi solicitado aos estudantes que obtivessem o espectro de absoro dos extratos coloridos da flor, e determinassem o comprimento de onda no mximo de absorbncia. Isto representa uma conexo desejvel entre as cores e os espectros de absoro visualizados. A determinao ponto-a-ponto do espectro dar melhor compreenso do funcionamento do espectrofotmetro, em relao ao uso de instrumentos computadorizados, geralmente disponveis nas etapas mais avanadas da carreira. Alm disso, nem sempre se dispe de espectrofotmetros sofisticados nos cursos de graduao. c) A dependncia do tempo da protonao, representada na Figura 5, pode ser explorada em classe, conduzindo a uma discusso interessante da dependncia dos mtodos de anlise em relao cintica qumica, associada com o esquema da reao de Brouillard et al.33,34. d) As diferentes curvas analticas, mostradas na Figura 7, impli-

Figura 7. Curvas analticas para nitrito determinadas em diferentes tempos aps mistura dos reagentes. Extrato bruto de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. = 1,0 mL, pH 1,0, = 526 nm. Os dados da regresso linear so: 1 min: A = 0,273 0,0057 [NO2-] (R = -0,8097, n = 5); 5 min: A = 0,281 0, 0165 [NO2-] (R = -0,9992, n = 5); 10 min: A = 0,281 0,0283 [NO2-] (R = -0,9999, n = 5); 15 min: A = 0,280 0,0369 [NO2-] (R = -0,9945, n = 5)

Tabela 1. Resultados da determinao do on nitrito obtidos com a reao de descoramento do extrato bruto de flores e pela reao de Griess para as mesmas amostrasa de gua mineral contaminada NO2- / mg L-1 Amostras 1d 2d 3e
a

Mtodo proposto 5,25 0,25c 5,45 0,34 5,33 0,17

Griess 5,35 0,07 5,39 0,03 5,34 0,05

Recuperaof / % 100 104 102

|%E| 1,86 1,11 0,19

tcalcg 0,667 0,304 0,098

Estes resultados foram obtidos para as amostras que continham 5,25 ppm de nitrito; b |%E| = [(Griess - proposto) / Griess] x 100; c mdia de trs determinaes desvio padro; d gua mineral sem gs; e gua mineral desgaseificada em banho de ultra-som durante 20 min; f recuperao: [Proposto / 5,25] x 100; g valores calculados para o teste t-Student, para 95% de confiana, t = 4,303 (n = 3)28.

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Quim. Nova

cam que um menor tempo de anlise necessrio, quando as determinaes so executadas aps 5 min. Por outro lado, a sensibilidade do mtodo melhor quando a anlise feita aps 10 min de reao, pois a competio entre as reaes qumicas envolvidas menor. Uma discusso interessante pode ser realizada sobre o compromisso entre um tempo mais curto de anlise e uma maior sensibilidade. e) O trabalho pode ser estendido e ampliado na sua abrangncia abordando-se outros aspectos, tais como a cintica de reao de protonao, tratando-se os dados obtidos na Figura 4. O mecanismo envolvido nas mudanas estruturais tambm pode ser abordado. Tratando-se de uma qumica muito rica envolvida, muito se pode explorar do trabalho, a cargo e considerando os objetivos didticos de sua aplicao. AGRADECIMENTOS Ao Prof. Dr. M.G. Neumann (IQSC-USP) pelos comentrios e sugestes, FAPESP pelo suporte financeiro (projetos 98/138730, 00/14486-2 e 04/00407-4) e ao Programa PROCONTES/USP. REFERNCIAS
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