DILUCIONES

Realizado por: Araceli Contreras Rodrguez Laboratorio de Microbiologa General/ Depto. Microbiologa, ENCB/IPN

OBJETIVO: Aprender a realizar diluciones y manejar volmenes. DILUCION: Accin de diluir DILUIR: Aadir lquido (diluyente) a un soluto o solucin DILUYENTE O DILUENTE: Lquido que diluye FACTOR DE DILUCION: Total de veces que el soluto, solucin o suspensin bacteriana fue diluida. DILUCION ACUMULADA: Dilucin que se obtiene del producto de las diluciones individuales. Las diluciones se expresan siempre:

1: ________
Volumen total

Las bacterias las podemos diluir en cualquier medio.

1 + 9=10
Volumen soluto 1

Dilucin 1:10
Volumen diluyente 9

Otros volmenes que mantienen una dilucin 1:10 0.5:5 (0.5 ml + 4.5 ml) 0.1:1 (0.1ml + 0.9 ml) . . . etc. De esta manera los volmenes pueden ser variables adecundonos a la dilucin.

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Si yo tengo: 2.1ml (soluto)+7.2ml (diluente) =9.3 vol. Total 2.1 : 9.3 (2.1 en un volumen total de 9.3) entonces tenemos una dilucin 1: 4.2 2.1 2.1 0.75ml (soluto) + 2.83ml (diluente) = 3.58ml (volumen total) 0.75 : 3.58 (0.75 en un volumen total de 3.58) entonces tenemos una dilucin 1:4.7 0.75 0.75 3.6ml (soluto) + 5.1ml (diluente) = 8.7ml (volumen total) 3.6 : 8.7 (3.6 en un volumen total de 8.7) entonces tenemos una dilucin 1: 2.42 3.6 3.6 Es posible que el soluto sea ms grande que el diluyente, por ejemplo: 5ml (soluto) + 4ml (diluente) = 9ml (volumen total) 5 : 9 (5 en un volumen total de 9) entonces tenemos una dilucin 1: 1.8 5 5 Ahora, si tuvieras que preparar 10ml de una dilucin 1:15.3, significa que tengo 1ml + 14.3ml=15.3 1 ---- 15.3 X------10ml X=0.65 Ahora, si tuvieras que preparar 8ml de una dilucin 1:25, significa que tengo 1ml + 24ml =25 1 ---- 24 X------8ml X=0.32 0.32 : 8 = 1:25 0.32 0.32 entonces 0.65+9.35=10ml, por lo tanto 0.65 : 10 0.65 0.65 = 1:15.3

entonces 0.32+7.68=8ml, por lo tanto

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FACTOR DE DILUCIN Una dilucin se puede expresar de las siguientes maneras:

10-1 = 1/10 = 1:10 El inverso de la dilucin se expresa: 1 = 10-1 1 1:10 = 1 1/10

= 10

1 1 1 10

Multiplicamos extremos por extremos y medios con medios

10/1 =

10

Por lo tanto el Factor de dilucin= 10

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PROBLEMA 1. Si Usted tiene una suspensin bacteriana con 6x109 UFC/ml y la diluye de la siguiente manera: TUBO Suspensin Diluyente Vol. transferencia Dil. Individual Dil. Acumulada Dil. final 1 6 ml 9 ml --1:2.5 1:2.5 12ml 3ml 1:5 1:12.5 12ml 3ml 1:5 1:62.5 1:62.5 Volumen de transferencia 2 3

6ml

3 ml

3 ml

9ml
Suspensin bacteriana

12ml

12ml

Volumen diluyente

6ml 15 9ml

3ml 15 12ml

3ml 15 12ml
Volumen total

Dilucin individual

6:15 6 6 = 1 : 2.5 1 : 2.5

3:15 3 3 = 1: 5
multiplicar

3:15 3 3 = 1: 5
multiplicar

Dilucin acumulada

1 : 12.5

1 :62.5

Dil. final

Factor de dilucin 62.5

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Para calcular las UFC en cada tubo, se divide la concentracin inicial bacteriana entre la dilucin acumulada de cada tubo
6x109=2.4 x 109 UFC/ml 2.5 6x109=4.8x108 UFC/ml 12.5 6x109= 9.6 x107 UFC/ml 62.5 tubo 1 tubo 2 tubo 3

O tambin puedes dividir la concentracin bacteriana de cada tubo entre la dilucin individual:
6x109=2.4 x 109 UFC/ml 2.5 2.4x109=4.8 x 108 UFC/ml 5 4.8x108= 9.6x109 UFC/ml 5 tubo1 tubo 2 tubo 3

Tubo1

tubo 2

tubo 3

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PROBLEMA 2. Partiendo de una suspensin bacteriana de 9x106 UFC/ml indique que diluciones en serie hara para obtener un suspensin con 1x102 UFC/ml. No puede exceder diluciones ms grandes de 1:5.

9x106
Para conocer la dilucin final:

1x102

DILUCIN FINAL=CONCENTRACIN INICAL= 9X106 = 1:90,000 ..CONCENTRACION FINAL 1X102

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

1ml

Suspensin bacteriana 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml

0.15 ml

Dil. Indiv.

1:5
1:5

1:5
1:125

1:5
1:125

1:5
1:625

1:5

1:5

1:5

1:1.152

Dil. acumulada

1:3,125 1:15,625 1:78,125

? 1:90,000

Ahora solo resta conocer la ltima dilucin que debemos hacer para llegar a la deseada 1:90,000, as que: Dil. Final =90,000 = 1:1.152 Indiv. 78,125

Si necesitaras preparar 5 ml de la dilucin final entonces: 1 : 1.152 X : 5 X=4.34, dil. 4.34 : 5

Factor de dilucin: 90,000 6/7

PROBLEMA 3. A partir de una muestra de harina de trigo realiz diluciones de la siguiente manera: 2(1:4), 2(1:3), 2 (1:5). Ud. sembr una alicuota de 0.1ml de cada dilucin en cajas de agar nutritivo por duplicado y despus de la incubacin a 37C durante 24 h cont la siguientes colonias: en las dos diluciones 1:4 fueron incontables, en la primera dilucin 1:3 se observaron 234 colonias y 240 en el duplicado. En la segunda dilucin de 1:3 se contaron 22 y 20 colonias. Realice una tabla en donde coloque las diluciones individuales y las acumuladas de cada tubo. Con base en los resultados de la cuenta viable calcule la concentracin de bacterias en la muestra original. Realice sus clculos:
No. de tubo Dil. Individual Dil. Acumulada Cuenta viable Duplicado 1 2 3 4 5 6

1:4 1:4
Incontables Incontables

1:4 1:16
Incontables Incontables

1:3 1:48 234 240

1:3 1:144 22 20

1:5 1:720 0 0

1:5 1:3600 0 0

UFC/ml= no. de colonias x inverso de la dilucin x 1/alicuota No. de colonias=234+240=474/2=promedio = 237

UFC/gramo= 237 x 48 x 1/0.1 UFC/gramo= 237 x 48 x 10 UFC/gramo= 113,760

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