Diseo de un Biorreactor con Aireacin

Un biorreactor con aireacin es por definicin un reactor continuo donde la entrada F1 es una lnea de alimentacin de aire estril (O2); la salida F2 es una lnea de lavado de aire estril y el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento es el oxgeno disuelto (OD). Existen dos tipos o diseos bsicos de biorreactores con aireacin; ambos, de uso muy difundido: el primero es tanque agitado con lnea de aireacin y el segundo es el de levantamiento por aire o "air lift". De este ltimo existe tambin, una variante que se utiliza para cultivos aerbicos muy resistentes a esfuerzos cortantes e hidrodinmicos y es la cama de burbujas o bubble bed. o sufra un estrs trmico. Estructura de un biorreactor de Levantamiento por Aire Airlift Cuando el volumen es muy grande (mayor que 1000 l) o se requiere de un mayor volumen de aireacin, el sistema CSTR, ya no es eficiente y se requiere del levantamiento por aire. Debido a que, a mayor volumen de cultivo, tambin es mayor la cantidad de calor generado; se hace necesario, aumentar el rea de transferencia de calor y la eficiencia de refrigeracin; por lo que, el intercambiador de calor de camisa debe ser reemplazado por uno de serpentn en contra flujo o con circulacin adyacente a la pared interior del tanque. Ver esquema representado en la figura. Al igual que en el diseo de tanque agitado, el aire que ingresa al biorreactor debe ser estril; esto se consigue, hacindolo pasar por un filtro microporo de dimetro de poro inferior a los 0,45 micrones (0,2 m 0,1 m) que impida el paso de microorganismos contaminantes. En los biorreactores de levantamiento por aire o "air lift" la cama de aire tambin funciona como medio de agitacin; de modo que, se genere una circulacin fluida de lquido con aire (burbujas) que asciende el compartimiento interno y luego desciende por el compartimiento externo, favoreciendo el mezclado perfecto. Transferencia de 02 y Balance de Oxgeno La velocidad de transferencia de 02 (r02) desde el seno de la fase gaseosa (burbujas) hasta la fase lquida (medio lquido) est determinada por la siguiente ecuacin: rO2 = Kla (C*- C) donde KLa es el coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno; C la concentracin de 02 disuelto en el seno del lquido y C* la concentracin de O2 disuelto en equilibrio con la presin parcial de oxgeno de la fase gaseosa. El KLa y

por lo tanto el grado de transferencia de oxgeno desde el seno del lquido hasta las clulas o microorganismos en cultivo, dependen del diseo del biorreactor y de las condiciones de operacin del sistema de cultivo: caudal de aire, volumen del lquido, rgimen de agitacin, rea de transferencia y viscosidad del cultivo. En general, disminuyen el KLa: la viscosidad y el volumen del lquido y aumentan el KLa: el rea de transferencia, la agitacin y la presencia de dispositivos que aumenten una, la otra, o ambas. La ecuacin de balance de oxgeno en el estado estacionario es: d(VCO2) / dt = F (C C*) VrO2 + VNiO2 donde Ni es la velocidad de transferencia de un componente del gas (oxgeno) al lquido (medio). Dado que el oxgeno es el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento, cuando el cultivo se encuentra en crecimiento, el flujo de entrada oxgeno (FiO2) ser mayor al flujo de salida de oxgeno (FfO2) debido al consumo de oxgeno disuelto en el lquido por parte de las clulas o microorganismos en crecimiento y/o divisin celular. En este caso, la ecuacin de balance de oxgeno para clulas o microorganismos en crecimiento es: d(VCO2) = FiO2C FfO2C* VrO2 + VNiO2 es decir, debe utilizarse la ecuacin general. Sistema de Aireacin El sistema de aireacin externamente comprende las lneas de entrada Fi y salida de aire Ff e internamente debe optimizar la transferencia de gases nutrientes (aire) hacia el medio lquido. Un sistema de aireacin consta de cuatro partes mecnicas: fuente de aire; tubera y filtros de entrada; boquilla y difusor de aire; tubera y filtros de salida. Y tres partes de control: control de flujo aire; control de presin de aire; control de difusin de oxgeno disuelto. Fuente de Aire: dado que el sistema de aireacin, en su conjunto, depende de la correcta eleccin del dispositivo que suministrar la fuente de aire, se siguieren dos opciones:

1. Compresor de Aire: su principal caracterstica es que opera con:

alta presin y bajo caudal de aire; por eso, cuando operan, es de manera continua o, cuando se requiere capacidad, debe haber un tanque de almacenamiento a alta presin como parte del sistema. Una segunda e importante caracterstica es que produce un alto nivel de ruido 80dB y una tercera es que, si el compresor es de tipo pistn debe lubricarse con aceite, por lo que, sta caracterstica se incluye en el diseo como: autolubricado (oiless) o no lubricado

(oil lubricated). Existen dos tipos de diseo constructivo para compresores de aire: a) El compresor de diafragma: esta diseado para un trabajo de operacin contnua; su presin operacin es moderada 60 psia y como su nombre lo indica, utiliza un diafragma o fuelle para impulsar y comprimir el aire. El compresor de diafragma resulta adecuado para oxigenar volmenes medianos de cultivos o microorganismos aerbicos. b) El compresor de pistn: es ms utilizado comercialmente, no obstante, para cultivos celulares sensibles (clulas de membrana plasmtica), no es recomendable, por cuanto, su presin de operacin es muy alta (80 psia o ms) para estos cultivos y puede causar dao celular severo o la lisis de las clulas; y porque, el pistn debe lubricarse con aceite y esto ocasiona que se filtre en pequeas cantidades a la corriente de aire.
1. Soplador Regenerativo: se caracteriza por funcionar como si

fuera una bomba centrfuga de succin y desplazamiento de aire por lo que, opera con presin negativa (vaco) en la succin y presin positiva (compresin) en el desplazamiento. Aunque su rango de accin es pequeo: 20H2O a 40H2O en cuanto a las presiones de operacin, su capacidad de desplazamiento de aire es muy alta 30 cfm - 50 cfm o 1000 L/min - 1500 L/min por lo que, puede movilizar grandes volmenes de aire. Tubera - Lnea de Aire: esta debe ser de acero inoxidable. Filtros de las Lneas de Aire: para sistemas pequeos de dimetros de tubera estndar, se utilizan filtros en lnea con la tubera; estos son de membrana microporo que filtran el 99,99% de los contaminantes. Para sistemas mayores (industriales) debe disearse un mtodo de esterilizar in situ la lnea de aire; generalmente se hace calentando fuertemente la lnea de aire y luego enfriarla. Las membranas microporo que filtran el aire tienen un punto de burbuja que es la presin de agua mxima que pueden soportan antes de romperse (recuerde que el sistema tiene un medio lquido) y un flujo mximo el cual es el mximo caudal que puede soportar la membrana antes de su ruptura. Sistema de Difusin de Oxgeno Disuelto: debe optimizar al mximo la transferencia de oxgeno disuelto al medio lquido. El sistema consta de dos partes mecnicas: boquilla y difusor de aire; una parte de medicin: sensor de oxgeno disuelto y una de control: controlador de oxgeno disuelto.

Difusor de Aire: los cultivos aerbicos requieren que la corriente de aire estril que se difunda en la forma de miles de pequeas burbujas, desde el difusor de aire, hacia el volumen del lquido; esta accin se realiza mediante un plato o domo cilndrico de acero inoxidable finamente perforado. Alternativamente y si el sistema es pequeo o mediano en escala, se puede utilizar un difusor de material cermico poroso el cual, tiene la ventaja de que, provee una cama ms fina de burbujas (de menor dimetro) y mayor rea de transferencia (volumen de burbujas). Control y Regulacin del Flujo de Aire: recuerde que las membranas que filtran el aire tienen un punto de burbuja y un flujo mximo por encima del cual, se rompen; por eso, se debe regular el flujo de aire y controlar la presin en la lnea de aire. La forma ms econmica de hacerlo es manualmente, con un manmetro para presin. Existe tambin la versin digital, ms costosa, pero que, controla de forma automtica el flujo de aire y la presin, segn se escoja. Control y Medicin del Oxgeno Disuelto (OD): adems de regular el flujo y la presin del aire en la lnea o tubera, se debe controlar el valor y la concentracin del oxgeno disuelto (OD) dentro del medio lquido; variable que puede medirse en dos formas (parmetros): a) Oxgeno Disuelto (OD): es la concentracin de oxgeno disuelto requerido para la reduccin qumica de un equivalente en iones sulfito (de sodio) a la cantidad de materia orgnica presente en el medio lquido que se debe oxidar. b) Demanda Bioqumica Oxgeno (DBO): es la taza de oxidacin biolgica o demanda bioqumica de oxgeno disuelto requerida por el microorganismo o clula en cultivo para oxidar la materia orgnica presente en el medio lquido. La tasa especfica de consumo de oxgeno de un cultivo est determinada por la velocidad de transferencia de oxgeno (r02) y el KLa que la correlaciona; recuerde que: rO2 = Kla (C*- C). Se debe conocer la r02 para poder determinar el KLa; el valor de r02 se consigue en la literatura; la concentracin de oxgeno disuelto en el lquido (C) es equivalente al valor de OD, e instrumentalmente, se llama: razn de toma de oxigeno (OUR) por sus siglas en ingls; el equivalente a C* (concentracin de oxgeno disuelto en el lquido en equilibrio con el gas) es la demanda bioqumica de oxgeno (DBO) que, instrumentalmente se llama: razn especfica de toma de oxigeno: SOUR (specific oxygen uptake rate). Ambas razones pueden medirse regularse con un controlador OUR/SOUR de uso comercial.

Una probeta o electrodo OD es un sensor que mide la concentracin de oxgeno disuelto en el medio lquido. Similarmente, una probeta o electrodo BOD mide la concentracin de oxgeno disuelto en el medio lquido en equilibrio con el gas. ) En ambos casos, el material de su construccin debe ser acero inoxidable y su especificacin es por la longitud de inmersin (H) y dimetro (D) de la probeta. Nota: todas la imgenes de los instrumentos y equipos fueron tomadas del Catlogo en Internet de Cole Parmer: www.coleparmer.com