TECNICAS DEL DIAGNOSTICO DE LOS ENTEROPARASITOS

1. Examen directo
Materiales Suero fisiolgico Aplicador (baja lengua) Pinza de metal Coladera de metal o de plstico

Procedimiento En la coladera encima se le pone las heces y luego se le agrega suero fisiolgico y se homogeniza con pinzas de metal.

Objetivo Observar las caractersticas anormales de las heces como: color, moco, sangre, alimentos sin digerir, presencia de gusanos redondos o aplanados enteros o partes de ellos.

2. Examen directo microscpico

Materiales Laminillas cubreobjetos Laminillas portaobjetos Aplicador de vidrio o de madera Marcador de vidrio Suero fisiolgico Solucin Lugol Colorante verde brillante

Colorante rojo neutro Heces

Procedimiento Colocar, en un extremo de la lamina una gota de suero fisiolgico. Agregar 1 a 2 miligramos de heces, emulsionarla y cubrirla con la laminilla cubreobjetos. Colocar en el otro extremo de la lamina portaobjetos, una gota de Lugol y proceder a la aplicacin de las heces. Luego con el suero fisiolgico, homogenizar y agregar los colorantes vitales verde brillante al 0.2% y rojo neutro al 0.01%.

Objetivo Observar los parasitos de tamao microscopicosy su estadio evolutivo.

3. Mtodos de Concentracion 3.1 .- Metodos de Concentracion por Sedimientacion

Materiales Tubos de vidrio o plstico Laminas portaobjetos Cloruro de Sodio o Sal de Cocina Laminilla de celofan Pipetas de vidrio o plstico Agua destilada, hervida o de lluvia Gasa recortada en trozos de 9 x 9 cm. Heces.

Procedimento Tomar una porcin de heces y homogenizarla con suero fisiolgico en un recipiente limpio. Colocar la gasa hundindola en la abertura del tubo y sujetndola con una liga alrededor de ella. Filtrar el homogenizado atravez de la gasa, llenando el tubo hasta la cuarta parte de su contenido. Agregar el suero fisiolgico hasta 1cm por debajo del borde del tubo. Ocluir la abertura del tubo con el papel celofan. Agitar enrgicamente el contenido por 15 segundos. Dejar en reposo por 45 min. Aspirar con la pipeta la parte media del sedimento y colocar unas 4 gotas en la lamina portaobjetos. Aspirar nuevamente con la pipeta el fondo del sedimento y agregar 1 o 2 gotas de solucin Lugol. Cubrir ambas preparaciones con laminillas de celofan y luego observar en el microscopio.

Objetivo Observar las formas mviles del parasito antes de echar el Lugol y luego observar las heces (estructuras) despus de echar el Lugol.

3.2.- Metodo de sedimentacin Rapida

Materiales Copa o vaso de vidrio Coladera de malla metalica o de plstico Placas petril Aplicador de madera Agua corriente o filtrada

Gasa Pipeta pasteur

Procedimiento Homogenizar 4 a 6 gr de heces con agua filtrada Colocar la coladera en la abertura del vaso y atravez de ella filtrar la muestra Retirar la coladera y llenarla con agua filtrada hasta 1cm del borde del vaso Dejar sedimentar la muestra durante 20 a 30 min . Decantar las 2/3 partes del contenido del vaso y agregar nuevamente agua Repetir los pasos anteriores por 4 veces cada 5 minutos, hasta que el sobre nadante quede limpio Transferir el sedimento a una placa petril Observar al microscopio a menor aumento

Objetivo Observar la presencia de huevos y de parasitos en las heces

3.3.- Metodo de sedimentacin: tcnica de FAUST

Materiales Gradillas para tubos de ensayo Tubos de prueba de 15 x 150 cm y de 13 x 100 cm Lugol Laminas portaobjetos Embudo de vidrio Laminillas cubreobjetos Gasa

Bajalenguas de madera Sulfato de zinc al 33.3 %, densidad 1.180

Procedimentos Colocar 1 o 2 gr de heces en el tubo de prueba y agregar e agua filtrada hasta los 8 mililitros y hacer una buena homogenizacin Colocar el tubo de 13 x 100 cm debajo del embudo de vidrio con dos capas de gasas y filtrar la muestra homogenizada hasta alcanzar 1 cm del bode del tubo . Retirar el embudo y centrifugar a 2.00 hasta 2.500 r.p.m durante 2 a 3 minutos Decantar el sobre nadante, adicionar el agua al sedimento y repetir la centrifugacin 1 o 2 veces mas hasta que quede limpio el sobre nadante Eliminar el sobre nadante y agregar la solucin del sulfato de zinc Homogenizar y completar con la misma solucin hasta 1 cm del borde del tubo Centrifugar por 2 minutos de 2.00 a 2.500 r.p.m Colocar el tubo en la gradilla con la ayuda de un gotero agregar sulfato de zinc hasta formar un meisco en la boca del tubo. Colocar una laminilla cubreobjetos sobre el meisco y dejar en reposo por 30 minutos. Depositar 1 gota de Lugol en la lamina portaobjetos Retirar la laminilla cubreobjetos y tomar con el asa de platino la superficie del meisco y colocarla en la lamina portaobjetos y observar al microscopio.

Objetivo Observar los quistes y los huevos, larvas del parasito los cuales se valorizan por las cruces, una cruz = escaso o nulo, 2 cruces = 5 a 11 x campo y 3 cruces = mayor de 11 x campo

3.4.- Metodos de flotacin: SHEATHER SUGAR

Materiales Tubo de ensayo Laminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Aplicador Solucin saturada de azcar Asa de platino Gradillas para tubo de ensayos Suero fisiolgico Embudo de vidrio Gasa Lugol Heces

Procedimiento Homogenizar 1 a 2 gramos de heces con suero fisiolgico Colocar el embudo de vidrio en la abertura del tubo de ensayo con una gasa doblada Filtrar el material homogenizado. Centrifugar el tubo con el material homogenizado a 1.500 r.p.m durante 2 a 5 minutos. Eliminar el sobre nadante y agregar la solucin de azcar hasta 1 centimetro del borde del tubo

Agitarlo hasta disolver el sedimento, centrifugar y completar con la solucin de azcar hasta el borde y formar el menisco, esperar 5 minutos. Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del menisco Colocar la lamina portaobjetos y agregar Lugol en caso sea necesario cubrir con la laminilla y observar en el microscopio; en caso de ver cocideas, tomarlas con el asa de platino y prepararla con el teido ZIEHL NEELSEN.

Objetivo Observar los estadios evolutivos de los parasitos como: isospora, crypptosridium, cyclospora y sarcocystis.

4. Mtodo de PARODI ALCARAZ

Materiales Formol Tubo de ensayo Laminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Solucion sobresaturada de azcar (azcar rubia) Lugol Aplicador de madera

Procedimiento Colocar 1 a 2 gr de heces en el tubo de ensayo Agregar 3 a 5 mililitros de la solucin sobresaturada de azcar y homogenizar

Completar el contenido del tubo con la solucin de azcar hasta formar un menisco en la abertura del tubo, dejar en reposo 30 minutos. Colocar en contacto con el menisco la abertura del tubo una laminilla cubreobjetos que va a permitir la adherencia por viscosidad de los quistes y huevos. En la lamina portaobjetos colocar una gota de solucin de Lugol . Retirar la laminilla con sumo cuidado y colocar sobre la lamina portaobjetos Examinar al microscopio.

Objetivo Observar los estados evolutivos de parasitos como: nematodos y tenias.

5. Mtodo de BAERMANN
Materiales Copas conicas Rejilla o coladera metalica Pipeta pasteur Laminas escavadas Gasa Suero fisiolgico Laminas portaobjetos Heces

Procedimiento Verter la solucin salina caliente en la copa, cantidad suficiente que apenas toque la coladera o rejilla

Colocar la rejilla metalica con la base doblada dentro de la copa y gasa 2 a 3 capas Colocar 4 a 6 gr de muestras de heces en fresco sobre la gasa Dejar todo el sistema a temperatura ambiente durante 30 a 50 minutos, sacar la rejilla y con la ayuda de la pipeta pasteur obtener 1 mililitro de sedimento Colocar el sedimento en la luna de reloj Observar al microscopio

Objetivos Se observa trofozoitos y larvas en movimiento de nematodos Observar las formas adultas de E. Vermicularis macho

6. Mtodo cualitativo de KATO

Materiales Aplicador Laminas portaobjetos Papel celofan Malla metalica Solucin de glicerina con verde de malaquita

Procedimiento Tamizar 0.5 gr de la muestra de heces atravez de la malla metalica. El tamizado se extiende sobre la lamina portaobjetos Cubrir la laminilla impregnada con glicerina Envolver con papel filtro y por 30 min sacar el exceso de glicerina

Observar al microscopio

Objetivos Observar los huevos de helmintos Observar los protoozoarios como : izospora belli.

7. Mtodos de coloracin: ZIEHL NEELSENN

Materiales Lamina portaobjetos Laminillas cubreobjetos Soporte de varillas de vidrio Estiletes o pinzas curvas Fucsina fenicada Azul de metileno acuoso Metanol Hidrxido de sodio al 4 % Alcohol acido

Procedimiento Colocar lamina portaobjetos sobre el soporte de la varilla de vidrio Con el estilete hacer un frotis en la lamina portaobjetos y dejar secar Fijar la lamina con alcohol acido por 2min y dejar secar Agregar hidroxido de sodio por 1min, eliminar el exceso Cubrir con la fucsina fenicada Lavar solamente la lamina portaobjetos con agua corriente

Decolorar con alcohol acido cubriendo el portaobjetos por unos segundos hasta quitar el colorante Lavar suavemente el portaobjetos con agua y enjuagarlo a chorro de agua Colocar como colorante de contraste verde malaquita, azul de metileno durante 5 min Lavar suavemente con agua corriente Realizar el montaje con blsamo de canada y laminilla cubreobjetos Observar al microscopio

Objetivos Observar los ooquistes de crystosporidium, izospora y cyclospora. Evidenciar tropismos positivos, geotropismo, terinotropismo e Inotropismo de los trofoitos, de los protozoos y larvas de helmintos especialmente de valatidium coli y larvas de strongiloides, stercolaris.

8. Mtodo de RITCHE
Materiales Gradilla de tubo de ensayo Tubo de ensayo Pipeta pasteur Lamina portaobjetos Laminillas cubreobjetos Izopo Formol al 10 % Eter etlico Lugol

Solucin fisiolgica Bajalenguas descartables

Procedimiento Colocar en un tubo de ensayo 2 gr de muestra de heces Agregar 8 mililitros de solucin fisiolgica Homogenizar y centrifugar a 2.000 r.p.m por 2 a 3 min Descartar el sobrante y repetir el paso anterior hasta que se observe el sobre nadante limpio Decantar el sobre nadante Agregar al sedimento 6 mililitros de formol Homogenizar y reposar por 5 min, luego de las cuales se agrega 3mililitros de eter. Taponar el tubo y agitar cuidadosamente para evitar la salida del material Retirar la tapa y centrifugar el tubo a 2 3.000 r.p.m por 3 minutos Eliminar las capas formadas de sobrenadante con la ayuda del izopo Depositar el sobre nadante con la gota de Lugol en la lamina portaobjetos con la ayuda de la pipeta pasteur, tomar una porcin del sedimento y mezclar con la gota de Lugol Cubrir una laminilla cubreobjetos Observar al microscopio

Objetivos Observar los quistes y huevos de parasitos. Observar la presencia de cristales de charcot Leyden

9. Mtodo cuantitativo de KATO KATZ

Materiales Aplicador Papel celofan Molde de plstico Malla metalica Laminas portaobjetos

Procedimiento Con un aplicador se transfiere la muestra fecal 5 a 10 miligramos sobre el papel absorvente. Colocarlo la malla sobre la muestra que esta sobre el papel absorvente, comprimir la muestra con el aplicador y llenar el molde perforado. Transferir el molde sobre la lamina portaobjetos, dejar la muestra del cilindro. Colocar la laminilla de glicerina y con la ayuda del tapon de jebe extender el material sobre toda la laminilla. Dejar a temperatura ambiente por 30 min Observar los huevos sobre toda la laminilla

Objetivos Observar y contar el numero de huevos parasitarios encontrados en la lamina y multiplicarlos por 24 en las heces (Nhpgh).