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Instrumentacin y control de un sistema espectroscpico para espectroscopa Raman y de fluorescencia

2 Ago 2012

INSTRUMENTACIN Y CONTROL DE UN SISTEMA ESPECTROSCPICO PARA ESPECTROSCOPA RAMAN Y DE FLUORESCENCIA


M. del Mar Correa*, F. R. Prez*
*

Grupo de ptica y Espectroscopa (GOE), Universidad Pontificia Bolivariana, A.A. 56006. Medelln Colombia. mariam.delmarc@gmail.com

Resumen: Se presenta la instrumentacin, control y automatizacin de un sistema espectroscpico monocanal bajo una interfaz grfica en Java. Este sistema est orientado a estudios de espectroscopa Raman y de fluorescencia de estado estable en diversos tipos de materiales, Consta de la electrnica y ptica requerida para la deteccin y conteo de fotones, ms un conjunto de circuitos electrnicos diseados para el acondicionamiento y la interpretacin de las seales provenientes de un tubo fotomultiplicador (PMT), en su operacin en modo pulsante y de saturacin. Bajo las tcnicas de la disciplina de integridad de seal, se presenta el diseo y la implementacin de un mdulo de fotodeteccin que consta de tubos fotomultiplicadores, circuitos divisores y un circuito preamplificador; seguido de un prototipo de circuito discriminador, un ADC (Analog-to-Digital Converter, en ingls) y un TDC (Time-to-Digital Converter) diseado en lgica programable. La comunicacin entre la interfaz, los dispositivos mencionados y una tarjeta de adquisicin espectroscpica, permite la representacin de los datos en archivos y grficos. Se discute el desempeo del mdulo de fotodeteccin, del ADC y del TDC. Copyright 2012 UPB

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Abstract: The instrumentation, control and automatization of a single-channel spectroscopic system under a Javabased graphical interface. This system is targeted to Raman and fluorescence spectroscopy studies in various types of materials. It has the optic and electronic equipment required for photon detection and counting, plus a set of electronic circuits designed for photomultiplier tube (PMT) signals shaping and interpretation, in its pulsed or saturation operation mode. Under signal integrity techniques, the design and implementation of a photon detection module is shown, which consists of PMTs, divider circuits and a preamplifier circuit; followed by a prototype discriminator circuit, ADC (Analog-to-Digital Converter) and a programmable-logic based TDC (Time-to-Digital Converter) . Communication between the interface, the mentioned devices and an acquisition card, makes data representation in files and graphs possible. The performance of the photodetection module, ADC and TDC is discussed. Keywords: Espectroscopa Raman, fluorescencia, tubo fotomultiplicador, conteo de fotones, integridad de seal, FPGA, ADC, TDC.

1.

INTRODUCCIN

medicina[2], ciencias medioambientales[3], ciencia de los materiales [4], arte y ciencias forenses [5], y qumica [6]. En el pas, existen numerosos trabajos de instrumentacin ptica relacionada como monocromadores, pero muy pocos sobre espectroscopa Raman. La deteccin de niveles muy bajos de luz ha sido lograda en dos trabajos anteriores [7] [8], pero con electrnica de bajo costo. Las dificultades tcnicas que presume la deteccin del efecto Raman, unido a un alto precio de los equipos comerciales, que hacen que las tcnicas de deteccin y conteo de fotones no se hayan desarrollado de forma decuada hasta ahora,
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Existen experimentos en los cuales no es posible medir una potencia o intensidad ptica promedio, es decir, se necesite detectar niveles tan bajos de luz que no son visibles para equipos convencionales de deteccin de radiacin, por lo que se necesitan sensores capaces de absorber un nico fotn y generar una seal elctrica acorde con este evento, como los tubos fotomultiplicadores. El conteo de fotones es una tcnica que lleva algo ms de 100 aos, con numerosas aplicaciones en biologa[1],

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perdiendo la oportunidad de darles aplicaciones prometedoras en nuestro medio. El trabajo realizado por C. del Valle [9] motiva al diseo de una electrnica de un costo razonable frente a los equipos comerciales, pero de mayor desempeo a stos, con tecnologas de ltima generacin, que vuelvan fiable su uso en futuros proyectos de investigacin en el Grupo de ptica y Espectroscopa. 2. TUBOS FOTOMULTIPLICADORES: EQUIPOS Y CIRCUITOS PERIFRICOS

ventana, un fotoctodo, un electrodo acelerador y concentrador, una cadena de dnodos y un nodo. La luz que pasa por la ventana logra arrancar electrones del fotoctodo mediante el efecto fotoelctrico. En la presencia de un campo elctrico fuerte generado por la conexin a una fuente de alto voltaje, los electrones se dirigen a un electrodo acelerador el cual acta como una especie de lente para enfocarlos hacia el primer dnodo, a partir del cual se produce la multiplicacin de electrones denominada emisin secundaria. El esquema usado para la polarizacin de los tubos fotomultiplicadores del laboratorio, Hamamatsu R1617 y R2295, se encuentra en la Figura 1. Dicho esquema conecta el nodo a

Electrnicamente, un tubo fotomultiplicador es un amplificador electrnico de caractersticas singulares: una ganancia de 106 a 107 que genera a partir de fotones pulsos de corriente rpidos y dbiles, con un ancho medio de pulso del orden de los nanosegundos y una corriente pico del orden de microamperios, lo que le confiere un ancho de banda natural de hasta 1 GHz. El acondicionamiento de estos pulsos requiere de una electrnica sofisticada para conservar la integridad de la seal. 2.1. Circuitos divisores Un circuito divisor polariza a un tubo fotomultiplicador, de una forma anloga a un transistor, sea para su operacin en modo pulsante o de saturacin. Un tubo fotomultiplicador consta de una
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Fig. 1. Esquema de circuito divisor. Para los tubos fotomultiplicadores Hamamatsu R1617 y R2295, sus relaciones de voltaje entre sus dnodos y respuestas temporales son diferentes, por lo que se disea e implementa un circuito divisor para cada uno.
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desacople y de un par de reguladores LDO (Low-Dropout Voltage, en ingls) LT1761 y LT1964 de Linear Technology, para conservar la estabilidad del circuito ante rpidas demandas de corriente. El preamplificador se ajusta para un ancho de banda de 325 MHz.

Fig. 2. Circuito impreso del divisor de voltaje. En el circuito impreso para cada divisor de voltaje (ver Figura 2), es necesario evitar que se alineen los campos elctricos de las resistencias y condensadores debido a una alimentacin a alto voltaje. Por consiguiente, se usa una forma de crculo para distribuirlos, y un pequeo plano de referencia a tierra para evitar que las corrientes de retorno afecten el funcionamiento del PMT. 2.2. Circuito preamplificador Un amplificador operacional crea un efecto virtual de tierra, permite descartar los efectos de carga por interconexin del circuito divisor con otros ms, y controla los armnicos que producen los pulsos del tubo fotomultiplicador. En el presente trabajo, se us un amplificador de transimpedancia ADA4817 de Analog Devices. El esquema del preamplificador usado se ilustra en la Figura 3, el cual se acompaa de unos capacitores de
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Fig. 3. Esquemtico del circuito preamplificador. En el circuito impreso de la Figura 4, se tienen en cuenta tres guas de integridad de seal: usar un plano de tierra en la capa posterior (que no pasa por el amplificador operacional), cuidar al mximo el lazo de realimentacin para evitar distorsiones, y usar mltiples vas a tierra para aliviar los efectos de la densidad de
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corriente. As mismo, se usan conectores coaxiales de compresin y SIP en miniatura para disminuir los efectos parsitos que genera al pasar por ellos una seal de alta velocidad. El material de todos los circuitos construidos es FR4, ya que mostr un buen desempeo para el presente trabajo.

2.3. Circuito para medidas en saturacin del PMT y Prototipo de circuito discriminador El ADC escogido para las medidas de saturacin, es la referencia ADC121C021 de National Instruments, el cual posee una resolucin de 12 bits y opera bajo el protocolo I2C. Mediante un microcontrolador PIC16F876A, se obtienen regularmente los resultados de la conversin y se envan a la interfaz grfica. El circuito basado en dicho ADC se incluy dentro del impreso del circuito discriminador. El discriminador es un circuito validador de pulsos rpidos por amplitud, a un precio ms razonable que el uso de un ADC de alta velocidad. Para la validacin de los pulsos, se basa en la comparacin de dos umbrales de voltaje: uno inferior, para descartar la corriente oscura del tubo fotomultiplicador; y uno superior, para descartar los rayos csmicos que logran atravesar la atmsfera terrestre. El esquema sugerido para esta etapa empieza con un bloque de ganancia adicional que usa el amplificador operacional OPA847 de Texas Instruments. Luego, un comparador dual de alta velocidad ADCMP657 de Analog Devices digitaliza los pulsos vlidos en amplitud. El comparador da cuatro salidas bajo el estndar LV-PECL que es necesario reducir a dos bajo el estndar LVDS, dado que la tarjeta de desarrollo Spartan-6 SP605 slo posee dos entradas de reloj de alta velocidad que operan bajo el
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Fig. 4. Circuito impreso del divisor de voltaje.

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ltimo estndar mencionado. Para lograr esto, se us una compuerta AND SY55851A y un traductor de estndar lgico CML a LVDS SY55855V, ambos de Micrel. En el ajuste de umbrales, se us una red de resistencias programables basadas en la referencia AD5259 de Analog Devices, la cual posee 256 pasos de resistencia programables mediante el protocolo I2C. Para la alimentacin de este circuito, se usaron los reguladores LDO LM2990SX-52 de National Instruments, MIC29300-5.0WU y MIC29150-3.3WU de Micrel. En el desarrollo del circuito impreso (ver Figura 6), se tienen en cuenta guas de integridad de seal adicionales, adems de las usadas en el preamplificador, como tratar las pistas de cobre a modo de lneas de transmisin que no son elctricamente cortas, el uso de mltiples capacitores de desacople distribuidos a lo largo del circuito, el uso de planos de alimentacin, y el acople de impedancias entre los diferentes componentes electrnicos de alta velocidad.

Fig. 6. Aspecto del circuito discriminador, construido en FR4 de cuatro capas. En el discriminador, se han presentado inconvenientes con la red de resistencias programables y la referencia del estndar lgico diferencial PECL, los cuales se espera resolver pronto. 3. INTERFAZ GRFICA DE CONTROL

Fig. 5. Diagrama de bloques para el discriminador.

La interfaz original del monocromador, presentaba varios inconvenientes: latencias en la comunicacin serial, necesita
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permisos administrativos y grandes demoras en el barrido espectral. Una interfaz grfica basada en Java, desarrollada en Netbeans IDE, da solucin a los inconvenientes anteriores y permite el control de ms dispositivos, como el ADC y el TDC. En la interfaz, se usan los controladores de RXTX [10] para el manejo de los puertos seriales RS232 y USB. La aplicacin usa mltiples hilos y manejo de comunicaciones por interrupciones, para disminuir el consumo de recursos del sistema durante la adquisicin de los datos.

Fig. 7. Aspecto de la interfaz grfica elaborada en Netbeans. 4. SISTEMA EMBEBIDO EN LA TARJETA DE DESARROLLO XILINX SPARTAN-6 SP605

Se us un TDC de segunda generacin, basado en bloques de contadores sincrnicos. Consta de un PLL y lgica adicional para la estimacin de la duracin del par diferencial de entradas CLK_Discriminador_P y CLK_Discriminador P. La entrada del PLL interno es el reloj del sistema de 200 MHz, a partir del cual se generan dos seales de reloj de 400 MHz (una en fase y otra desfasada 180), las cuales guan a los contadores sincrnicos para medir la duracin del pulso entrante en intervalos de 1.25 ns. La tarjeta de adquisicin C&L Instruments slo permite un pulso por cada 100 ns, as que es importante comprobar que haya un nico pulso durante este tiempo. La seal que posea la duracin adecuada, es decir, no sea demasiado corta para ser considerada un rayo csmico ni demasiado larga para ser considerada una seal de fluorescencia (en caso de tomar espectros Raman); ser llevada de Pulso_OK hacia la tarjeta DPC-1. En la tarjeta de desarrollo, hay cuatro LEDs que se usan como indicadores de estado de operacin del TDC, que aparecen en el vector Error. Las posibilidades son las siguientes: El pulso tiene una duracin adecuada Los pulsos son demasiado largos

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Los pulsos son muy cortos Aparecen mltiples pulsos en 100 ns

5.

RESULTADOS Y DISCUSIN

5.1. Espectros en DC Para la obtencin de un espectro Raman en DC, se eligi usar una muestra de poliestireno de baja densidad, que normalmente se encuentra en el icopor. El poliestireno un espectro de varios picos angostos y sobresalientes. Bajo un haz de luz lser de 532 nm, se muestra el espectro de la Figura 10. Una muestra de matriz de polivinilo PVD500, usada en la fabricacin de lseres basados en colorantes orgnicos, se usa para la obtencin de un espectro de fluorescencia, en la Figura 11. Esta muestra hace parte de una tesis de maestra de la Universidad de Pars XI [11]. El espectro patrn del poliestireno se encuentra en [12].

Las bases del conteo, es decir, los lmites de tiempo inferior (slv_reg2) y superior (slv_reg2) junto a un habilitador (slv_reg0), se conectan al bus fsico AXI de la tarjeta de desarrollo, a travs del cual el TDC se convierte en un esclavo del microprocesador Microblaze. El manejo remoto del TDC por parte de la interfaz se realiza mediante puerto USB-Serial.

Fig. 8. Diagrama del TDC. Fig 10. Espectro Raman en DC del poliestireno.
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Fig. 10. Espectro de fluorescencia para la muestra PVD500, sin filtro notch.

Los resultados de fluorescencia muestran ser ms favorables en medidas de saturacin que las mismas del efecto Raman. El efecto del filtro notch es contundente: reduce notablemente las longitudes de onda verdes. Un espectro Raman en DC puede ser muy ruidoso y dbil. No se aprecian correctamente las intensidades relativas de las bandas Raman, e incluso, hay bandas que no aparecen. Tanto la electrnica como el montaje ptico deben mejorarse para lograr una mayor precisin en la obtencin de espectros Raman en DC. No obstante, es un gran avance el contar con un ADC para tomar un espectro adecuado de fluorescencia cuyo barrido espectral tarda alrededor de 3 minutos en el sistema espectroscpico construido. 5.2. Desempeo del mdulo de fotodeteccin en un experimento de efecto Raman La respuesta ante un nico electrn (SER) no puede apreciarse correctamente debido a limitaciones tecnolgicas. El osciloscopio Tektronix 2014B del laboratorio slo tiene un ancho de banda de 100 MHz, as que distorsiona notablemente los pulsos. Aun as, este osciloscopio posee una buena capacidad de muestreo digital, por lo que estos pulsos pueden verse como espigas que pasan muy rpido. Para tomar un registro adecuado de dichas espigas, se habilita el modo persistencia de la pantalla. Este modo almacena hasta por un tiempo definido lo que se perciba. Bajo esta condicin, se usa de nuevo el poliestireno para observar el comportamiento del mdulo de fotodeteccin cuando no recibe

Fig. 11. Espectro de fluorescencia para la muestra PVD500, con filtro notch.
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luz, y en los picos espectrales ms notables. A continuacin, se muestran las capturas con el tubo fotomultiplicador Hamamatsu R2295.

Fig. 12. Nivel del ruido electrnico apreciado cuando el PMT no recibe luz.

Fig. 13. Respuesta temporal del mdulo de fotodeteccin ante la longitud de onda de 561 nm.

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Fig. 14. Respuesta temporal del mdulo de fotodeteccin ante la longitud de onda de 581 nm.

Fig. 15. Respuesta temporal del mdulo de fotodeteccin ante la longitud de onda de 629 nm.

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aproximada de repeticin de pulsos. Por lo tanto, existe una relacin directa entre las intensidades relativas de cada pico espectral de la Figura 9 y la frecuencia de repeticin de pulsos. Los resultados anteriores demuestran que el circuito divisor y preamplificador son circuitos aptos para el conteo de fotones de alta velocidad. 5.3. Desempeo del TDC Las figuras anteriores sugieren una respuesta favorable por parte del circuito divisor y preamplificador. Se aprecia una clara respuesta frente a un nico electrn, que infiere una relacin seal a ruido adecuada. Aunque el tubo fotomultiplicador Hamamatsu R2295 pierde eficiencia cuntica hacia el rojo, se puede observar que presenta un desempeo adecuado en esta rea (629 nm y 635 nm). Las frecuencias tentativas que aparecen en la esquina inferior derecha de cada captura del osciloscopio, indican una tasa aproximada de repeticin de pulsos. Por lo tanto, existe una relacin directa entre las intensidades relativas de cada pico espectral de la Figura 9 y la frecuencia de repeticin de pulsos. Los resultados anteriores demuestran que el circuito divisor y preamplificador son circuitos aptos para el conteo de fotones de alta velocidad. 5.3. Desempeo del TDC El desempeo del TDC puede demostrarse con una seal cuadrada de 27 MHz existente en la tarjeta de desarrollo. Una
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Fig. 16. Respuesta temporal del mdulo de fotodeteccin ante la longitud de onda de 635 nm. Las figuras anteriores sugieren una respuesta favorable por parte del circuito divisor y preamplificador. Se aprecia una clara respuesta frente a un nico electrn, que infiere una relacin seal a ruido adecuada. Aunque el tubo fotomultiplicador Hamamatsu R2295 pierde eficiencia cuntica hacia el rojo, se puede observar que presenta un desempeo adecuado en esta rea (629 nm y 635 nm). Las frecuencias tentativas que aparecen en la esquina inferior derecha de cada captura del osciloscopio, indican una tasa
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seal de 27 MHz tiene un perodo de aproximadamente 37.05 ns, por lo tanto slo arroja tres estados posibles: mltiples pulsos en 100 ns, pulsos demasiado anchos o pulsos demasiado cortos. Si los pulsos

siempre que la escogencia de las bases de conteo sean bien escogidas, se muestra en la Figura 17. La diferencia de tiempo entre los cursores de la figura 17 infiere una frecuencia de 9.434 MHz, lo cual es similar a las cuentas que obtiene la tarjeta de adquisicin cada milisegundo.

Fig. 18. Cuentas por milisegundo que toma la tarjeta de adquisicin DPC-1 de C&L Instruments. Un pulso de efecto Raman puede ser muy corto, de prcticamente el tiempo que dura la respuesta ante un nico electrn; mientras que un pulso de fluorescencia toma decenas de nanosegundos. Existen muestras que presentan ambos fenmenos de manera simultnea. El TDC elaborado es un discriminador temporal adecuado para el rechazo de la fluorescencia en tomas espectrales

Fig. 17. Forma de onda a la salida de la tarjeta de desarrollo.

tienen una duracin adecuada, el TDC slo deja pasar uno y alerta de forma visual sobre la existencia de mltiples pulsos, mediante LEDs. La forma de onda que se obtiene a la salida para este caso,
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del efecto Raman, desde que se usen tubos fotomultiplicadores que posean un tiempo de subida de por lo menos 1.2 ns.

6.

CONCLUSIONES

diversos espectros. La discriminacin de pulsos por duracin permite el rechazo de la fluorescencia frente al efecto Raman, previamente escogidas las bases de tiempo para cada barrido espectral. En general, la configuracin modular del sistema motiva su reuso y posteriores mejoras, que permitan un uso ms fcil para los usuarios. Este trabajo abre el camino hacia la espectroscopa resuelta en el tiempo, en la Universidad Pontificia Bolivariana. Bajo esta tcnica, existen numerosas y potenciales aplicaciones que los grupos de investigacin y empresas pueden aprovechar para sus futuros proyectos.

Se logr obtener el correcto funcionamiento de los circuitos divisor y preamplificador por lo que se pueden apreciar los pulsos de voltaje. El uso del ADC es idneo para la adquisicin de espectros de fluorescencia mas no para efecto Raman, por lo que es necesario refinar la electrnica y el montaje ptico que corresponde a este ltimo. Falta el desarrollo completo del circuito discriminador para la obtencin de espectros bajo la tcnica del conteo de fotones. Hasta el momento, se ha logrado la construccin de circuitos electrnicos con un desempeo comparable a gran parte de la oferta comercial en equipos para la deteccin del efecto Raman, pero con un costo inferior. Por lo tanto, se entregan circuitos electrnicos aptos para su funcionamiento en sistemas espectroscpicos orientados al anlisis vibracional de materiales. La interfaz del monocromador en Java permite la independizacin de la interfaz original en Labview, llevando a la automatizacin de algunos procedimientos como el barrido espectral, la adquisicin de los pulsos y niveles de DC. Lo anterior facilita la manipulacin posterior de los datos por el investigador que toma

AGRADECIMIENTOS Al profesor Freddy Rafael Prez, por haber permitido el desarrollo de mi trabajo de grado, para afianzar mis conocimientos de integridad de seal e iniciarme en las actividades de investigacin. Al Dr. Jean Pierre Galaup, por sus valiosos aportes a la solucin de problemas en el mdulo de fotodeteccin. A los profesores Oscar Salazar, Diego Cuartas, Juan Franco y Fabio Guzmn, por su asesora en el diseo de la electrnica y sistema embebido desarrollado en la FPGA.
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A los proyectos Caracterizacin vibracional de xidos y oxihidrxidos de hierro: una aproximacin cuantitativa, cdigo CIDI 552A-11/09-27 y Diseo y construccin de sensores pticos basados en specklegramas en fibra ptica y propiedades hologrficas de cristales fotorrefractivos de la familia de las silenitas, cdigo CIDI 635A-02/10-27, por su apoyo financiero. REFERENCIAS [1] J. B. Lucks y A. P. Arkin. The hunt for the biological transistor. IEEE Spectrum, Vol. 48, n 3, pp. 34-39, 2011. [2] S.S. Ghambir et al. Noninvasive molecular imaging of small living subjects using Raman spectroscopy. Proceedings of The National Academy of Sciences. Vol. 105, n 15, pp. 58445849, 2008. [3] E. Montilla, C. Galndez y E. Solarte. Proyecto de un sistema LIDAR troposfrico en Cali, Colombia. ptica Pura y Aplicada, Vol. 39, n1, pp. 29-34, 2006. [4] M. S. Dresselhaus. Raman spectroscopy of carbon nanotubes. Physics Reports, Vol. 409, n 2, pp. 47-99, 2005. [5] L. De Viguerie et al. Revealing the sfumato Technique of Leonardo da Vinci by X-Ray Fluorescence Spectroscopy. Angewandte Chemie International Edition, Vol. 49, n 35, pp. 6125-6128, 2010.

[6] W. Demtrder, Laser Spectroscopy: Basic Concepts and Instrumentation, Tercera Edicin. Berln: Springer, 2003. pp. 851-865. [7] D. J. Nisperuza. Diseo y construccin de un sistema espectroscpico de monitoreo atmosfrico aplicado a la determinacin de la capa lmite atmosfrica en la ciudad de Medelln. [Trabajo de maestra]. Medelln, Colombia: Universidad Nacional de Colombia, 2010, 86p. [8], [9] C. del Valle, Diseo y Construccin de un Sistema de Conteo de Fotones. [Trabajo de pregrado]. Medelln, Colombia: Universidad Pontificia Bolivariana, 2007, 129 p. [10] RXTX. [En lnea] Disponible en: http://rxtx.qbang.org/wiki/index.php/Main_Page. Consultado en Febrero 24 de 2012. [11] E. Valdois. Elaboration dechantillons pour applications photophysiques et/ou photochimiques. [Trabajo de maestra] Pars, Francia: Universit Pars XI, 2005. [12] McCreery Research Group | Raman materials. University of Alberta. [En lnea] Disponible en: http://www.chem.ualberta.ca/~mccreery/ramanmaterials.html. Consultado en Junio 19 de 2012.

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AUTORES Maryam del Mar CORREA GMEZ. Nacida en Marinilla, Colombia; Realiz sus estudios de secundaria en el Colegio San Juan Bosco. Es egresada prxima a graduarse de Ingeniera Electrnica. Actualmente es presidente del captulo estudiantil de la OSA para la Universidad Pontificia Bolivariana.

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