IBP1050_12 1059 UTILIZAO DE SUPERFCIE DE RESPOSTA PARA A OTIMIZAO DA PRODUO DE UM BIOSSURFACTANTE COM APLICAO NA REMOO DE DERIVADO DE PETRLEO 1 2 3 Leonie

A. Sarubbo ; Raquel D. Rufino ; Juliana M. Luna ; Charles B.B. Farias4; Valdemir A. dos Santos5
Copyright 2012, Instituto Brasileiro de Petrleo, Gs e Biocombustveis - IBP Este Trabalho Tcnico foi preparado para apresentao na Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012, realizado no perodo de 17 a 20 de setembro de 2012, no Rio de Janeiro. Este Trabalho Tcnico foi selecionado para apresentao pelo Comit Tcnico do evento, seguindo as informaes contidas no trabalho completo submetido pelo(s) autor(es). Os organizadores no iro traduzir ou corrigir os textos recebidos. O material conforme, apresentado, no necessariamente reflete as opinies do Instituto Brasileiro de Petrleo, Gs e Biocombustveis, Scios e Representantes. de conhecimento e aprovao do(s) autor(es) que este Trabalho Tcnico seja publicado nos Anais da Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012.

Resumo
Os surfactantes, compostos anfipticos capazes de reduzir a tenso superficial dos meios aquosos, encontram aplicao em diversos setores industriais, especialmente nas indstrias de petrleo, alimentos e cosmticos, como dispersantes, emulsificantes e tensoativos. Com a necessidade de preservao ambiental, a produo de surfactantes por microorganismos, em substituio aos surfactantes sintticos, tornou-se bastante atrativa, uma vez que os biossurfactantes so biodegradveis e menos txicos, embora os custos de produo ainda sejam elevados em virtude dos substratos utilizados e dos processos de purificao envolvidos. Considerando a necessidade de reduo dos custos associados ao processo de produo de surfactantes microbianos, um isolado de bactria do gnero Pseudomonas, isolado de regio porturia foi cultivada em meio de baixo custo contendo os resduos agroindustriais melao e milhocina como substratos obedecendo um delineamento composto central rotacional (DCCR) com o objetivo de avaliar a influncia das variveis independentes concentrao de melao e concentrao de milhocina sobre a varivel resposta tenso superficial. O biossurfactante foi capaz de reduzir a tenso superficial da gua de 71 mN/m para valores em torno de 27,5 mN/m. O poder de disperso e remoo de manchas oleosas pelo agente tensoativo foi demonstrado. A possibilidade de aplicao de biossurfactantes na remediao de ambientes poludos por hidrocarbonetos motiva o avano das pesquisas no sentido de desenvolver essa tecnologia alternativa para utilizao efetiva nos sistemas de tratamento de solos e guas contaminados.

Abstract
The surfactants, amphipathic compounds capable of reducing the surface tension of aqueous media, find application in many industries, especially in the petroleum, cosmetic and food, such as dispersants, emulsifiers and surfactants. With the necessity of environmental preservation, surfactants of micro-organisms origin, in substitution of synthetic surfactants, have become very attractive, since they are biodegradable and less toxic although their production costs are still high because of the substrates used and of the purification processes involved. Considering the need to reduce costs associated with the production of microbial surfactants, a strain of bacteria of the genus Pseudomonas, isolated from the port area was cultured in medium containing low-cost agro-industrial wastes, molasses and corn steep liquor, as substrates according a central composite rotatable design (CCRD) in order to evaluate the influence of independent variables molasses and corn steep liquor concentrations on the response variable surface tension. The biosurfactant was able to reduce the water surface tension from 71 mN / m to values around 27.5 mN / m. The dispersion ability and the capacity of oil removal of the surfactant was demonstrated. The possibility of application of biosurfactants in the remediation of oil polluted environments motivates the advancement of research to develop this technology for effective use in treatment of contaminated soils and waters.

______________________________ Doutora, Engenheira Qumica UNIVESIDADE CATLICA DE PERNAMBUCO 2 Doutora, Biloga UNIVERSIDADE CATLICA DE PERNAMBUCO 3 Graduado, Engenheiro Ambiental UNIVERSIDADE CATLICA DE PERNAMBUCO 4 Doutor, Engenheiro Qumico - UNIVERSIDADE CATLICA DE PERNAMBUCO
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1. Introduo
Vrios compostos com propriedades tensoativas so sintetizados por organismos vivos, desde plantas (saponinas) at micro-organismos (glicolipdios) e tambm no organismo humano (sais biliares), sendo considerados surfactantes naturais (Maneerat, 2005; Banat, 2010). Os compostos de origem microbiana que exibem propriedades surfactantes, isto , diminuem a tenso superficial e possuem alta capacidade emulsificante, so denominados biossurfactantes e consistem em subprodutos metablicos de bactrias, leveduras e fungos filamentosos (Singh et al., 2007). Nos ltimos anos, os estudos voltados para a produo de biossurfactantes tm se intensificado em funo das caractersticas desses compostos como biodegradabilidade, baixa toxicidade, especificidade e estabilidade sob condies ambientais extremas de temperatura, pH e salinidade (Calvo et al., 2009). Nesse contexto, as indstrias de petrleo e petroqumica destacam-se como os maiores campos de aplicao dos biossurfactantes. A limpeza de solos e guas contaminados por derramamentos de petrleo, a remoo da borra oleosa de tanques de estocagem, a remoo de metais pesados de solos contaminados, assim como um aumento geral nos processos de recuperao de leo de reservatrios so possveis aplicaes para os biossurfactantes (Gonzini et al., 2010). Os biossurfactantes ainda podem ser utilizados como agente inibitrio da corroso de equipamentos, oleodutos e tanques de caminhes transportadores (Abdel-Mawgoud et al., 2010). Os biossurfactantes promovem a diminuio na viscosidade e a formao de emulses leo/gua, facilitando o bombeamento dos resduos e a recuperao do leo bruto, aps a quebra da emulso. Nesse trabalho, a otimizao da produo de um agente surfactante da bactria Pseudomonas sp. foi realizada a partir de um planejamento experimental.

2. Material e Mtodos
2.1. Micro-organismo A Pseudomonas sp. isolada em rea porturia foi utilizada como produtora do biossurfactante. Para a manuteno da bactria foi utilizado o meio gar Nutriente (AN). 2.2. Meio de crescimento do inculo Para crescimento do inculo foi utilizado o meio Caldo Nutritivo (CN). 2.3. Meio de produo O meio mineral descrito por Bushnell e Hass (1941), composto por 1 g/L de KH2PO4, 1g/L de K2HPO4, 0,2 g/L de MgSO4.7H2O, 0,2g/L de CaCl2.H2O e 0,05g/L de FeCl3.6H2O foi utilizado para a produo do biossurfactante. As fontes de carbono (melao de cana) e nitrognio (milhocina) foram adicionadas de acordo com o planejamento experimental. 2.4. Produo do biossurfactante A produo do biossurfactante foi realizada em 100 mL do meio de produo incubados com 3% do pr-inculo. Os frascos foram mantidos sob agitao orbital de 200 rpm durante 120 horas, temperatura de 28C. 2.5. Planejamento Experimental Um delineamento composto central rotacional (DCCR) com 4 pontos fatoriais, 4 pontos axiais e 4 pontos centrais foi utilizado com o objetivo de avaliar a influncia das variveis independentes concentrao de melao e concentrao de milhocina sobre a varivel resposta tenso superficial. Os valores das variveis independentes encontram-se especificados na Tabela 1, enquanto que a matriz do planejamento codificada est representada na Tabela 2. Tabela 1. Valores das variveis independentes nos nveis -1,41, -1 +1, +1,41 e no ponto central

Varivel Melao (%) Milhocina (%)

-1,41 2,6 0,16

Nveis codificados das variveis -1 0 +1 +1,41 3,0 4,0 5,0 5,4 0,20 0,30 0,40 0,44

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Tabela 2. Matriz do planejamento

Condies 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Melao -1 -1 +1 +1 0 0 -1,41 +1,411 0 0 0 0

Milhocina -1 +1 -1 +1 -1,41 +1,411 0 0 0 0 0 0

2.6. Determinao da tenso superficial A tenso superficial foi medida no lquido metablico livre de clulas em tensimetro KSV Sigma 700 (Finland) utilizando-se o anel de NUOY. A tenso superficial ser medida atravs da imerso do anel de platina no lquido metablico e registrando-se a fora requerida para pux-lo atravs da interface ar-lquido. 2.7. Experimentos de lavagem de composto hidrofbico adsorvidos em pedra A remoo de leo de motor adsorvido em pedra foi realizada embebendo-se o material no contaminante at completa cobertura do mesmo, anotando-se o volume gasto. Em seguida, o material foi cuidadosamente colocado, com auxlio de uma pina, em um becker de 100mL , o qual foi submetido lavagem com o lquido metablico livre de clulas aps o cultivo. O percentual de remoo obtido na lavagem foi calculado. A quantidade de leo remanescente foi determinada no slido lavado, por gravimetria, aps extrao com hexano, e expressa em percentual. 2.8. Experimentos de deslocamento de composto hidrofbico em gua do mar A capacidade de disperso ou agregao de manchas de derivados de petrleo foi simulada em laboratrio contaminando-se amostras de gua do mar com leo de motor. Os testes foram conduzidos pela adio do lquido metablico livre de clulas aps o cultivo. Os resultados foram observados visualmente.

3. Resultado e Discusso
3.1. Produo do biossurfactante de acordo com o DCCR O Delineamento Composto Central Rotacional possibilitou verificar a influncia das concentraes de melao e milhocina sobre os valores da varivel resposta tenso superficial do processo fermentativo (Tabela 3).

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Tabela 3. Tenso superficial do lquido metablico livre de clulas do cultivo de Pseudomonas sp. resultante do DCCR

Condies 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Melao (X1) -1 -1 +1 +1 0 0 -1,41 +1,411 0 0 0 0

Milhocina (X2) -1 +1 -1 +1 -1,41 +1,411 0 0 0 0 0 0

RESPOSTA Tenso superficial (mN/m) 28,44 28,14 29,62 29,31 29,21 28,86 30,37 28,43 27,32 27,32 27,36 27,30

A Figura 1 apresenta a superfcie de resposta para a tenso superficial em funo das concentraes de melao e de milhocina. Os resultados mostram que foi possvel otimizar a tenso superficial, ou seja, indicam que a seleo das concentraes foi estabelecida no local correto, o que evidenciado pela forma da superfcie de resposta. A superfcie de resposta mostra que as curvas de nveis so paralelas e, por isso, o termo de interao entre os fatores praticamente inexistente, o que pode ser confirmado no diagrama de Pareto (Figura 2). A referida Figura apresenta de forma clara que os termos quadrticos das concentraes de melao e milhocina so os de maior significncia estatstica na composio do modelo de previso do fenmeno.

Figura 1. Superfcie de resposta da varivel tenso superficial em funo da concentrao de melao e de milhocina 4

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Figura 2. Diagrama de Pareto de efeitos padronizados sobre a tenso superficial do biossurfactante isolado do lquido metablico de Pseudomonas sp. P3 cultivada em melao e milhocina A Equao 01 representa o modelo emprico ajustado para a tenso superficial (TS) do biossurfactante isolado. Os parmetros em negrito so os estatisticamente significativos ao nvel de 95% de confiana. TS = 50,08 7,66X1 + 0,95X12 47,48X2 + 77,00X22 0,03X1X2 (1)

Na Tabela 03 encontram-se os parmetros da anlise de varincia (ANOVA) para o ajuste do modelo emprico. Observa-se que o modelo estatisticamente significativo, pois praticamente todos os coeficientes de variao explicada so satisfatrios e a razo de Fcalculado por Ftabelado est acima de 1, para um nvel de confiana de 95%. Tabela 3. Parmetros da anlise de varincia para a tenso superficial no DCCR Soma dos Graus de Mdia dos Nvel de (Fcalculado/Ftabelado) quadrad liberdade quadrados confiana (P) os Melao TL 0,01936 1 0,019363 3,0186 0,011656 Melao TQ 5,80644 1 5,806440 905,2230 0,000003 Milhocina TL 0,15262 1 0,152621 23,7936 0,000581 Milhocina TQ 3,794560 1 3,794560 591,5713 0,000005 Tenso IntMelxMil Lin 0,00003 1 0,000025 0,00385 0,855216 superficial EAM 3,47592 3 1,158639 197,2085 0,000022 EP 0,00190 3 0,000633 Total 11,69507 11 *TL:Termo Linear; TQ:Termo Quadrtico; IntMelxMil Lin:Interao Melao e Milhocina Lineares; EAM:Erro do ajuste do modelo; EP:Erro puro. Varivel resposta Variveis significativas

Nesse Sentido, considerando o ponto timo da tenso superficial, o meio formulado no ponto central (4% de melao e 0,3% de milhocina) do DCCR foi selecionado como meio de produo de baixo custo para a produo do biossurfactante. 3.2. Aplicao do biossurfactante em processos de remoo de derivado de petrleo 5

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 A despeito da possibilidade de inmeras aplicaes dos biossurfactantes, a indstria petroqumica apresenta maior potencial para essas biomolculas, uma vez que requer especificaes mnimas de pureza, de modo que o lquido metablico possa ser usado, eliminando as etapas de purificao que representam cerca de 60% do custo total de produo (George e Jayachandran, 2009). Os biossurfactantes podem aumentar a remoo de poluentes hidrofbicos atravs dos processos de solubilizao e mobilizao (Bai et al., 1997). A capacidade de solubilizao depende da habilidade do surfactante em aumentar a solubilidade dos constituintes hidrofbicos na fase aquosa. Um grande aumento desta capacidade observado acima da CMC, a qual atribuda partio do hidrocarboneto no stio hidrofbico das micelas surfactantes. Neste processo, maiores concentraes em surfactantes so normalmente requeridas uma vez que a solubilidade dos constituintes dos hidrocarbonetos na soluo surfactante depender totalmente da concentrao do surfactante (Bai et al., 1997). Assim, aps a otimizao do meio de cultivo, o lquido metablico livre de clulas foi testado para utilizao na indstria de petrleo. Os experimentos de lavagem com o lquido metablico livre de clulas para remoo de leo de motor adsorvido em superfcie revelaram uma remoo de 70% do leo aps agitao manual por 5 minutos, demonstrando o potencial do biossurfactante como agente de limpeza. O biossurfactante bruto tambm foi utilizado na disperso e na agregao de uma mancha de leo. Os resultados obtidos sugerem grande potencial da biomolcula na conteno e no direcionamento de derramamentos de petrleo e derivados em ambientes marinhos.

4. Concluses
O biossurfactante produzido apresenta capacidade de remoo de um cotaminante oleoso, demonstrando, em conseqncia, elevado potencial para aplicaes industriais e ambientais a um baixo custo, onde poder ser utilizado na recuperao de leos, na limpeza de reservatrios e como coadjuvante na biorremediao de solos contaminados com poluentes hidrofbicos.

5. Agradecimentos
Os autores agradecem o apoio financeiro da Termoeltrica de Pernambuco (TERMOPE), do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq), da Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES) e da Fundao de Amparo Cincia e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE).

6. Referncias
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