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FUSION DES PROTOPLASTES ET APPLICATION Questions : 1.

Aprs avoir citez les diffrents types dhybridation somatique, donner les principes et limites des mthodes utilises pour effectuer ces hybridations. 2. Dans le souci de transfrer le gne de rsistance M. accuminata cv (receveur) contre la cercosporiose, une hybridation a t ralise avec lespce sauvage Musa balbisiana cv (donneur). Au terme du processus de fusion, quelles mthodes (02) pouvez-vous utiliser pour vrifier la russite de lhybridation. 3. Tout au long du processus dhybridation, les cellules vgtales (protoplaste et protoplasme) sont cultives dans lobscurit, pourquoi ? Lors de la culture cellulaire le milieu peut tre supplment en glucose, maltose, myoinositol ? quel est le rle de ces substrats ? RESUME Au terme de ce cours qui portait sur la fusion des protoplastes nous retiendrons que : La fusion des protoplastes (Hybridation somatique) est loutil biotechnologique qui permet certainement le plus davances en termes de cration de nouveauts gntiques et de productions de gnotypes nouveaux dintrt agronomique. Elle dbute par lisolement des protoplastes qui se fait prfrentiellement par voie enzymatique, leur purification et leur culture qui se fait en gnral sur une membrane de nitrocellulose avec couche nourricire. La fusion proprement parle se droule suivant deux mthodes : la mthode chimique (traitement par le PEG) et la mthode lectrique (lectrofusion). La premire consiste un traitement chimique des protoplastes avec le PEG pour favoriser leur agglutination et ensuite avec le calcium pour induire la fusion. La mthode lectrique quant elle dbute par lapplication dun courant alternatif dans la chambre dlectrofusion. Ceci va favoriser lalignement des protoplastes en chapelet. La fusion est induite ensuite par lapplication dun courant continu. Le choix de la mthode la plus efficace reste aujourdhui faire. La fusion des protoplastes peut se faire de faon obtenir des hybrides soient symtriques (fusion totale), soient asymtriques (fusion partielle). Dans le premier cas, la fusion se droule selon lune des mthodes ci-dessus. Dans le second cas avant la fusion, les protoplastes (donneur et receveur) sont au pralable traits avec par exemple liodoactamide (receveur) et les rayons UV (donneur) ceci pour liminer la plupart du temps les chromosomes portant des gnes non dsirs. La symtrie de la fusion ici est troitement lie la composition du noyau. Une fois nos protoplastes fusionns, il savre important de pouvoir dterminer ceux qui sont viables et par consquent aptes rgnrer une plante. Ceci est possible par lutilisation des techniques qui consiste colorier avant la fusion les deux protoplastes avec des composs fluorescents diffrents (RITC (rouge) et la FITC (jaune) par exemple). Les hybrides donneront ainsi une coloration jaune orange sous le microscope UV (Raikar, 2007). Les protoplastes viables ainsi obtenus seront donc cultivs sur un ensemble de milieu favorisant spcifiquement soit la division cellulaire soit la diffrenciation des protoplastes afin dobtenir dans un premier temps, une cal cellulaire qui donnera un embryon, ensuite une plantule et enfin une plante adulte.