IBP1703_12 AVALIAO DA EFETIVIDADE VERSUS EFEITOS DE SURFACTANTES EM SIMULAES DE DERRAME DE LEO NO MAR, Joana F. Cruz1, Jorge A.

Triguis 2, Antnio Fernando S. Queiroz3

Copyright 2012, Instituto Brasileiro de Petrleo, Gs e Biocombustveis - IBP Este Trabalho Tcnico foi preparado para apresentao na Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012, realizado no perodo de 17 a 20 de setembro de 2012, no Rio de Janeiro. Este Trabalho Tcnico foi selecionado para apresentao pelo Comit Tcnico do evento, seguindo as informaes contidas no trabalho completo submetido pelo(s) autor(es). Os organizadores no iro traduzir ou corrigir os textos recebidos. O material conforme, apresentado, no necessariamente reflete as opinies do Instituto Brasileiro de Petrleo, Gs e Biocombustveis, Scios e Representantes. de conhecimento e aprovao do(s) autor(es) que este Trabalho Tcnico seja publicado nos Anais da Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012.

Resumo
A eficcia de surfactantes qumico e biolgico, sozinhos e em conjunto com o fertilizante NPK, no auxlio da biodegradao de petrleo cru foi avaliada em simulaes de derrame no mar, realizadas em duas campanhas. A eficcia destes produtos foi determinada pela avaliao da degradao do petrleo ao longo do experimento, atravs de anlises geoqumicas; por anlises toxicolgicas, atravs da exposio de coppodos aos tratamentos; e por anlises microbiolgicas, atravs do isolamento de fungos e bactrias. Na primeira campanha, as anlises geoqumicas mostraram que o tratamento de petrleo em conjunto com biossurfactante apontou maior degradao, indicado pela maior reduo percentual (19%) do valor da razo n-alcanos/(Pr+Ph). Na segunda campanha o tratamento contendo biossurfactante e NPK revelou uma diminuio de 30,8% da razo n-alcanos/(Pr+Ph), enquanto o tratamento contendo surfactante qumico e NPK revelou uma diminuio de 26,5% da razo n-alcanos/(Pr+Ph). Portanto, os resultados geoqumicos para tratamentos com biossurfactante apontaram maior biodegradao no final dos experimentos. Na primeira campanha os tratamentos no foram txicos aos coppodos provavelmente devido s baixas concentraes, entretanto na segunda campanha houve um grande efeito letal no tempo inicial, mas no possvel afirmar o que causou este efeito porque no houve anlise da amostra contendo apenas petrleo ao longo do experimento. As anlises microbiolgicas indicaram que ocorreu aumento do nmero de fungos em relao s bactrias nos tratamentos contendo apenas biossurfactante e biossurfactante em conjunto com NPK, sugerindo que a maior degradao do leo nestes tratamentos seja pela ao de fungos. Os resultados deste estudo em escala piloto e nas condies experimentais estabelecidas revelaram que mais indicado o tratamento utilizando biossurfactante conjuntamente com NPK.

Abstract
The efficacy of chemical and biological surfactants, alone and together with NPK fertilizer, in the contribution of biodegradation of crude oil was evaluated in simulated spill at sea, carried out in two campaigns. The effectiveness of these products was determined by evaluating the degradation of oil throughout the experiment, through geochemical analyzes; for toxicological analysis, by exposing copepods to treatment, and for microbiological analyzes, by isolation of fungi and bacteria. In the first campaign, the geochemical analysis showed that treatment of oil together with biosurfactant pointed further degradation, as indicated by a greater percentage reduction (19%) of the ratio values n-alkanes/(Pr+Ph). In the second campaign, the treatment containing biosurfactant and NPK showed a decrease of 30.8% of ratio nalkanes/(Pr+Ph), while the treatment containing chemical surfactant and NPK showed a decrease of 26.5% of the ratio n-alkanes/(Pr+Ph). Therefore, the geochemical results for treatments with biosurfactant showed higher biodegradation at the end of the experiments. In the first campaign the treatments were not toxic to copepods probably due to low concentrations, however in the second campaign there was a large lethal effect at initial time, but we can not say what caused this effect because there was no analysis of the sample containing only oil throughout the experiment. Microbiological analyzes indicated that there was an increase in the number of fungi in relation to the bacteria in the treatments containing only biosurfactant and biosurfactant together with NPK, suggesting that most of the oil degradation in these treatments is the action of fungi. The results of this pilot scale study and the experimental conditions established

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1

Mestre, Engenheira Ambiental - Ncleo de Estudos Ambientais/Instituto de Geocincias/Universidade Federal da Bahia 2 PHD, Gelogo Ncleo de Estudos Ambientais/Instituto de Geocincias/Universidade Federal da Bahia 3 Doutor, Gelogo Ncleo de Estudos Ambientais/Instituto de Geocincias/Universidade Federal da Bahia

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 revealed that it is more appropriate treatment using biosurfactant with NPK.

1. Introduo
A crescente explorao de petrleo em vrios pases, em especial no Brasil, lder mundial em explorao de petrleo em guas profundas, resulta no surgimento de novos desafios. Esses tem que ser vencidos rapidamente, uma vez que o petrleo tem um papel fundamental na economia brasileira e que mais de 70% do petrleo produzido no pas oriundo de poos localizados na plataforma continental (PEREIRA e AQUINO-NETO, 2000). Com aproximadamente 8.500 km de costa, os riscos de acidentes com petroleiros no Brasil so grandes e as medidas de conteno para leos derramados devem estar testadas e aprovadas para serem executadas, quando necessrio. O fato de que a maior parte da produo brasileira de petrleo provm do mar torna a regio costeira ainda mais vulnervel a acidentes. No somente a explorao, mas tambm a produo e o transporte do petrleo esto sujeitos a graves acidentes de derrame de leo no mar, quase sempre por falha humana. Ao longo dos anos muitos acidentes com derrame de petrleo no mar ocorreram no mundo, mas somente no perodo entre janeiro de 2010 e fevereiro de 2012 foram noticiados 11 acidentes deste tipo, o que sinaliza a urgncia na tomada de deciso para a escolha da tcnica de limpeza mais adequada, de acordo com o tipo do leo, condies climticas da regio, entre outros fatores. Uma vez que ocorra um acidente, o comportamento de leos derramados nos mais diversos ecossistemas, e principalmente no mar, vai depender de sua composio qumica, e tambm, da atuao de processos como evaporao, emulsificao, dissoluo, biodegradao, foto-oxidao e das interaes entre leo, sedimentos e gua. A combinao destes processos conhecida como intemperismo, o qual reduz a concentrao de diferentes grupos de compostos, modificando as caractersticas qumicas e fsicas do petrleo (FLOODGATE, 1984; FINGAS, 1998). Todos estes processos influenciam na escolha dos mtodos de conteno de um derramamento. Em caso de derrames de leo no mar, devem ser tomadas todas as medidas cabveis para que o leo no venha a atingir os sistemas costeiros. As medidas de contingncia denominadas mecnicas, as quais removem o leo da gua e dispem em outro local, podem ser as primeiras a serem colocadas em prtica num acidente, ao mesmo tempo em que se pode atear fogo nas manchas, desde que as condies do mar assim o permitam, isto , desde que a energia das ondas e correntes no seja um obstculo difcil de ser vencido. Esta prtica no permitida no Brasil. importante ressaltar que os mtodos mecnicos de limpeza de derrames de leo no mar, tipicamente, no recuperam mais do que 10 a 15% do produto derramado (OTA, 1991). A fim de favorecer a regenerao das reas impactadas, tem sido adotado em diversos pases o emprego de surfactantes qumicos e biolgicos como auxiliares no tratamento biolgico. A utilizao destes compostos promove o aumento da interao interfacial de sistemas gua/leo (figura 1) e promove a dessoro de compostos orgnicos acelerando a degradao microbiana de vrios hidrocarbonetos (MULLIGAN et al. 2001; KINGSLEY et al. 2004 apud MILLIOLI, 2009).

Figura 2.2: A) Aplicao do dispersante qumico na mancha de leo; B) O solvente carrega o surfactante para o leo; C) As molculas de surfactante migram para a interface leo/gua e reduzem a tenso superficial; D) As gotculas de leo so circundadas pelas substncias surfactantes, estabilizando a disperso, o que ajuda a promover uma rpida diluio pelo movimento da gua; E) As gotas dispersam por mistura turbulenta deixando apenas uma fina camada do leo na superfcie. Fonte: ITOPF, 2011.

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 Em algumas situaes, os surfactantes qumicos, tambm chamados de dispersantes qumicos, podem fornecer a nica forma de remover significativa quantidade de leo da superfcie, minimizando ou prevenindo prejuzos a importantes recursos sensitivos, em funo do seu curto tempo de resposta. Estes surfactantes so formados por um grupo de compostos qumicos destinados a serem espalhados sobre filmes de leos para acelerar o processo natural de disperso. Os dispersantes so constitudos por surfactantes, cuja molcula formada por uma cadeia apolar, com afinidade por leos e graxas (oleoflica), contendo uma extremidade de forte polaridade, com afinidade pela gua (hidroflica). Alm dos surfactantes, os dispersantes tambm so constitudos por solventes que permitem a sua difuso no leo. Benefcios significativos de ordem ambiental e econmica podem ser atingidos, particularmente quando outras tcnicas de respostas no mar so limitadas pelas condies climticas ou viabilidade de recursos (LI e GARRET, 1998). Seu uso tenta minimizar o prejuzo causado pelo leo flutuante, por exemplo, com relao s aves, antes que o leo alcance a linha de costa. Contudo, em comum com todas as opes de respostas a derrames, o uso de dispersantes tem suas limitaes e seu uso dever ser cautelosamente planejado e controlado. A utilizao de dispersantes tambm depender de regulamentaes pertinentes por parte de organismos governamentais para sua aplicao. No Brasil, a Resoluo CONAMA N 269/2000 regulamenta o uso de dispersantes qumicos em derrames de leo no mar e restringe sua aplicao a uma distncia menor que 2.000 m da costa. Os biossurfactantes ou surfactantes biolgicos so compostos produzidos principalmente pelo crescimento aerbio de microrganismos atravs da degradao de vrios substratos incluindo carboidratos, hidrocarbonetos, leos e gorduras ou uma mistura destes (PIRLLO, 2006; MESQUITA, 2004 apud MELO, 2011). Os biossurfactantes mais conhecidos so os glicolipdeos, que consistem de carboidratos combinados com cidos alifticos ou hidroxialifticos de cadeia longa. Os ramnolipdeos so os glicolipdeos mais estudados. So formados por uma ou duas molculas de ramnose ligadas a uma ou duas molculas de cido -hidroxidecanico. Os principais glicolipdeos produzidos pela bactria P. aeruginosa so os ramnolipdeos dos tipos 1 e 2, Lramnosil--hidroxidecanoil--hidroxidecanoato e Lramnosil-L-ramnosil--hidroxidecanoil--hidroxidecanoato (KRONEMBERGER, 2007). Os biossurfactantes possuem melhores propriedades que muitos surfactantes qumicos e apresentam a vantagem de poderem ser sintetizados a partir de substratos renovveis e possurem grande diversidade qumica, possibilitando aplicaes especficas para cada caso particular (NEVES et al., 2004 apud MELO, 2011). O principal uso comercial dos biossurfactantes est na remediao, por causa de sua capacidade em estabilizar emulses. Isto faz com que ocorra um aumento na solubilidade e na disponibilidade de contaminantes hidrofbicos, aumentando o potencial para biodegradao (MELO, 2011). Rosa (2001) menciona que a adio de nutrientes atravs do processo de bioestmulo se faz necessria para que os microrganismos acelerem o processo de biodegradao natural do leo. Pesquisas indicam que o bioestmulo tem potencial para servir como alternativa bastante efetiva na remediao de sedimentos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo devido ao seu baixo custo e evidente acelerao na degradao desses compostos, quando comparado a outras tcnicas de remediao. Segundo Rosa (2001) em testes laboratoriais o NPK mostrou-se eficiente como agente bioestimulador na limpeza de derrames de leo, com relao a alguns dos seus componentes (LIMA, 2010). O uso de surfactantes como agentes de limpeza em derrames de petrleo pode alterar o comportamento normal de hidrocarbonetos de petrleo, aumentando a sua solubilidade na gua, resultando numa maior biodisponibilidade de hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPAs) e interaes alteradas entre surfactante, leo e membranas biolgicas. O aumento desta biodisponibilidade dos HPAs pode resultar no aumento da bioacumulao ou em mudanas na disposio metablica e, consequentemente, aumento da toxicidade, diretamente ou atravs da cadeia alimentar (WOLFE et al., 2001). Fito e zooplncton esto amplamente distribudos no ambiente marinho e, devido sua mobilidade limitada, tem pouca habilidade para escapar de derramamentos de leo. Assim, este leo adsorvido ou acumulado por organismos de nvel trfico inferior e pode ser ingerido e bioacumulado nas espcies de maior nvel trfico (WOLFE et al., 2001). Os organismos bentnicos desempenham importante papel ecolgico dentro dos ecossistemas aquticos, participando das atividades de decomposio da matria orgnica e da ciclagem de nutrientes no substrato, alm de ocupar uma posio importante dentro da cadeia alimentar, sendo uma das principais fontes de alimento para peixes demersais (LANA et al., 1996; NYBAKKEN, 2001 apud GARCIA, 2009). Os coppodos marinhos harpacticides bentnicos vm se destacando em testes letais e subletais de toxicidade devido abundncia no ambiente, facilidade no cultivo em laboratrio e a reduo de custos do cultivo devido ao seu tamanho (LOTUFO; ABESSA, 2002). O gnero Tisbe um grupo de coppodos bentnicos ecologicamente importante da meiofauna e vem sendo frequentemente utilizado em testes de ecotoxicologia marinha por apresentarem alta sensibilidade a compostos txicos (GARCIA, 2009). A capacidade de degradar hidrocarbonetos do petrleo apresentada por diversos microrganismos, principalmente fungos e bactrias (RODRIGUES, 2002 apud MELO, 2011). Essa degradao acelerada e est diretamente relacionada com o aumento da populao de microrganismos, presente no ambiente contaminado, que utilizam os hidrocarbonetos como fonte de energia (LIMA, 2010). Rosa (2001) assevera que a biodegradao pode estar 3

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 limitada disponibilidade de nutrientes, composio e abundncia das comunidades microbianas, salinidade, temperatura, concentrao de oxignio dissolvido e distribuio e natureza do leo derramado. Este trabalho tem a finalidade de avaliar a degradao de petrleo bruto do tipo parafnico sob o auxlio de surfactantes e do bioestmulo, testando a potencialidade do fertilizante NPK como agente acelerador da biodegradao dos componentes de petrleo sob condies experimentais. Alm disso, objetiva realizar estudos relacionados ao efeito toxicolgico em organismos bentnicos e microbiolgicos aos surfactantes e ao NPK, a fim de serem analisadas as suas utilizaes em determinadas situaes de derrames de petrleo ocasionados em substratos aquosos.

2. Materiais e mtodos
2.1 Modelagem Experimental Neste estudo foram desenvolvidos dois experimentos a nvel laboratorial, realizados em duas campanhas, onde a segunda campanha foi desenvolvida a partir de modificaes metodolgicas e analticas necessrias e observadas na primeira campanha. Na primeira campanha, o experimento foi conduzido em 6 unidades de simulao com capacidade para 30L, todas preenchidas com 15L de gua do mar e com 15mL de petrleo bruto do tipo parafnico ( oAPI 28,39; hidrocarbonetos saturados: 79%; hidrocarbonetos aromticos: 15%; compostos NSO: 6%) proveniente da Bacia de Camamu-Almada, Bahia, e foram equipadas cada uma com uma bomba para aerao e turbulncia da gua (simulao de corrente marinha). A aplicao de 2 mL do surfactante qumico ULTRASPERSE II, fabricado pela Oxiteno, diludo numa proporo de 1:10 em gua destilada, foi realizada segundo a orientao do fabricante, levando em considerao o volume de leo derramado. O biossurfactante utilizado, do tipo ramnolipdeo produzido por Pseudomonas aeruginosa, produzido no Laboratrio de Processos de Separao com Membranas PEQ/COPPE/UFRJ em parceria com a PETROBRAS, foi aplicado sem diluio no volume de 15 mL. As unidades de simulao foram definidas como: 1. P1 (controle): 15L de gua do mar + 15 ml de leo 2. P2 (controle): 15L de gua do mar + 15 ml de leo (rplica) 3. PD1: 15L de gua do mar + 15 ml de leo + dispersante qumico 4. PD2: 15L de gua do mar + 15 ml de leo + dispersante qumico (rplica) 5. PB1: 15L de gua do mar + 15 ml de leo + biosurfactante 6. PB2: 15L de gua do mar + 15 ml de leo + biosurfactante (rplica) Na segunda campanha foram utilizadas 9 unidades de simulao com capacidade para 30L, preenchidas com 15L de gua do mar e 10mL de do mesmo petrleo bruto, da seguinte forma: 1. P1 (controle): 15L de gua do mar + 15 ml de leo 2. PD1: 15L de gua do mar + 10 ml de leo + dispersante qumico 3. PD2: 15L de gua do mar + 10 ml de leo + dispersante qumico (rplica) 4. PB1: 15L de gua do mar + 10 ml de leo + biosurfactante 5. PB2: 15L de gua do mar + 10 ml de leo + biosurfactante (rplica) 6. PDN1: 15L de gua do mar + 10 ml de leo + dispersante qumico + NPK 7. PDN2: 15L de gua do mar + 10 ml de leo + dispersante qumico + NPK (rplica) 8. PBN1: 15L de gua do mar + 10 ml de leo + biosurfactante + NPK 9. PBN2: 15L de gua do mar + 10 ml de leo + biosurfactante + NPK (rplica) Foram utilizadas duas bombas de aerao em cada unidade de simulao. A cada dois dias foram retirados 5L de gua de cada unidade de simulao e substitudos por gua do mar fresca e aproximadamente 1L de gua destilada. Foram aplicados 150 mL do biossurfactante. 2.2 Anlises Geoqumicas As anlises geoqumicas para avaliar a degradao do leo foram realizadas por Cromatografia Gasosa acoplada a um Detector de Ionizao de Chama (CG-FID). Na primeira campanha foram analisadas amostras de leo superficial das unidades de simulao nos dias 0 e 30, enquanto na segunda campanha ocorreu nos dias 0 e 21. A cromatografia gasosa foi empregada na determinao qualitativa e quantitativa de n-alcanos, isoprenides pristano (Pr) e fitano (Ph), e hidrocarbonetos totais. O monitoramento da biodegradao dos hidrocarbonetos saturados feito pela medida das razes de n-C17/Pr e n-C18/Ph, considerando que os hidrocarbonetos lineares n-C17 e n-C18 so mais facilmente biodegradados que os isoprenides correspondentes, pristano e fitano (Bragg, 1992 apud Mcmillen et al., 1993; Brown, 1987 apud Delarco, 1999 apud Rosa, 2001). 2.3 Anlises Toxicolgicas 4

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 Na primeira campanha foram coletadas amostras de gua das unidades de simulao nos dias 0, 7 e 30. Na segunda campanha objetivou-se analisar toxicologicamente apenas os tratamentos de petrleo em conjunto com biossurfactante (PB), petrleo em conjunto com surfactante qumico e NPK (PDN) e petrleo em conjunto com biossurfactante e NPK (PBN), com o intuito de se observar os efeitos de uma maior concentrao de biossurfactante e do NPK em conjunto com os surfactantes. As coletas aconteceram nos dias 0, 7 e 21. Os testes de toxicidade foram realizados de acordo com o estabelecido por Arajo-Castro et al., (2009) para ensaios de toxicidade com sedimento. Inicialmente as amostras de gua foram descongeladas em refrigerador pelo menos 12h antes do incio do teste. Todos os parmetros foram aferidos e quando necessrio foi realizada a correo da salinidade. O bioensaio realizado em triplicatas consistiu na exposio de 10 fmeas ovgeras do coppodo Tisbe biminiensis a uma soluo teste composta pela amostra a ser testada e microalga (Chaetocerus gracillis). A concentrao de diatomcea utilizada para o teste foi de 0,2 mg de clorofila-a. O bioensaio teve durao varivel de 4 dias para primeira campanha e 7 dias para a segunda campanha. Ao trmino do intervalo de exposio estabelecido, o contedo presente em cada um dos recipientes foi corado com rosa de bengala e fixado com formol para posterior contagem. As variveis observadas no teste so fecundidade e sobrevivncia. Os dados foram tratados utilizando o programa estatstico Bioestat 5.0. 2.4 Anlises Microbiolgicas As anlises microbiolgicas foram realizadas atravs da tcnica de filtro de membrana (Levin et al., 1975) e apenas em amostras do 21 dia da segunda campanha. Para o isolamento de bactrias e fungos em 200mL de gua, as amostras foram filtradas em membranas de 0,45m de porosidade para isolar fungos e o filtrado foi refiltrado em membranas de 0,22 m de porosidade (para bactrias). As membranas foram colocadas em meios TSA (Trypticase Soy gar) para as bactrias e BDA (Batata Dextrose Agar) para os fungos e mantidos temperatura de 30C por 24h (bactrias) e 72h (fungos). Depois deste perodo foi realizada a contagem do nmero de bactrias e fungos em cada tratamento. Todo o isolamento foi realizado em triplicata.

3. Resultados e Discusses
- Primeira campanha Os resultados obtidos por cromatografia gasosa da frao saturada do leo em cada tratamento geraram os cromatogramas da figura 3 e confirmam que o tratamento de petrleo em conjunto com biossurfactante (PB) apontou a maior degradao, caracterizada pela maior reduo percentual das razes n-C17/Pr e n-alcanos/(Pr+Ph), representando maior degradao entre os dias 0 e 30, conforme se observa na tabela 2.
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-0.09 5 10 15 20 25 30 35 Minutes

-0.09 5 10 15 20 25 30 Minutes

Figura 3: Perfil da frao de n-alcanos do leo original e do leo nos tratamentos P, PB e PD, nos dias 0 e 30, no primeiro experimento. Tabela 2b: Porcentagem da reduo dos valores das razes entre n-alcanos, pristano e fitano, comparando os dias 0 e 30 no primeiro experimento. n- alcanos (Pr+Ph) 0,1% 11,6% 19,2%

Amostra P PD PB

n-C17/Pr 4,4% 4,5% 9,7%

n-C18/Ph 6,2% 4,2% 3,7%

A anlise estatstica dos testes toxicolgicos mostrou que na primeira campanha a adio do leo sozinho (P) ou em conjunto com o dispersante (PD) ou com o biossurfactante (PB) no causou toxicidade letal ou sub-letal aos coppodos em nenhum dos tratamentos e em nenhum dos tempos testados. Relativizando os resultados obtidos com o controle e comparando-os ao longo do tempo, em todos os tratamentos no houve efeito do tempo ou do tratamento, ou seja, em todo o experimento no foi verificado nenhum indcio de toxicidade letal ou sub-letal (Figuras 4 e 5).

Figura 4: Fecundidade normatizada pelo controle dos coppodos na primeira campanha, em cada tratamento ao longo dos 30 dias.

Figura 5: Sobrevivncia normatizada pelo controle dos coppodos na primeira campanha, em cada tratamento ao longo dos 30 dias.

- Segunda campanha Na primeira campanha (teste piloto) os resultados da cromatografia gasosa podem ter sido mascarados pela alta volatilidade dos hidrocarbonetos saturados (figura 3), que podem ter sido perdidos durante a cromatografia lquida. Por este motivo, na segunda campanha foram injetados no cromatgrafo amostras do leo total (whole oil), a fim de se obter resultados mais precisos.

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 Os resultados obtidos por cromatografia gasosa do leo em cada tratamento geraram os cromatogramas da figura 6 e apontaram a maior degradao no tratamento PBN, caracterizada pela maior reduo percentual das razes n-C17/Pr, n-C18/Ph e n-alcanos/(Pr+Ph), conforme se observa na tabela 4.
m Volts
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leo original
400

n-C15

300

n-C13

n-C14

n-C16

n-C17 n-C18

n-C19

n-C20

n-C21

n-C22

n-C23

n-C24

n-C25

n-C12

n-C26

n-C27 n-C28

200

n-C11

PRISTANO

n-C29 n-C30

n-C10

FITANO

n-C31 n-C32 n-C33 n-C34

100

n-C35

n-C36

n-C37 n-C38

n-C9

n-C39

n-C8

n-C40

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m Volts

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400

P-0
n-C14 n-C15 n-C16 n-C17 n-C18 n-C19 n-C20 n-C21 n-C22 n-C23 n-C24 n-C25 n-C26 n-C27

400

P-21
n-C17 n-C19 n-C20 n-C21 n-C24 n-C25 n-C22 n-C23 n-C18 n-C26 n-C27 n-C28 n-C16 n-C29 n-C30 PRISTANO FITANO

300

300

n-C28

n-C13

PRISTANO

n-C29

200

200

n-C30

n-C15

n-C31 n-C32 n-C33 n-C34 n-C35

FITANO

n-C31 n-C32 n-C33

n-C34

n-C36

100

100

n-C12

n-C36

n-C37 n-C38

n-C35

n-C37

n-C14

n-C39

n-C39

n-C40

n-C10

n-C11

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n-C12

n-C13

n-C40

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400

n-C14

n-C16

n-C17

PB-0
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400

PB-21
n-C25 n-C17 n-C23 n-C26 n-C27 n-C28 n-C19 n-C18 n-C22 n-C24 n-C20 n-C16 n-C21 n-C29 n-C30 PRISTANO FITANO

300

n-C15

300

n-C13

n-C15

PRISTANO

n-C28

200

200

FITANO

n-C29

n-C31 n-C32 n-C33 n-C34 n-C35

n-C30

n-C12

n-C31 n-C32

n-C33

n-C36

100

100

n-C14

n-C34

n-C35

n-C37 n-C38

n-C36

n-C37

n-C38 n-C39

n-C39

n-C11

n-C40

n-C10

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n-C13

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n-C17

PD-0
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n-C15

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n-C14

300

300

n-C13

PRISTANO

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FITANO

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n-C37 n-C38

n-C37 n-C38

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n-C39

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n-C11

n-C9

n-C10

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n-C11

n-C12

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400

PBN-21
n-C15 n-C16 n-C17 n-C19 n-C22 n-C25 n-C18 n-C20 n-C23 n-C24 n-C21 n-C26 n-C27 n-C28 n-C29 n-C30 FITANO

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PRISTANO

200

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FITANO

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n-C31 n-C32 n-C33 n-C34 n-C35

n-C12

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n-C36

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n-C13

n-C37 n-C38

n-C39

n-C39

n-C11

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n-C15

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n-C17 n-C19 n-C20 n-C21 n-C18 n-C22 n-C23 n-C24 n-C25 n-C16 n-C26 n-C27

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n-C36

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n-C37 n-C38

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Figura 6: Perfil do leo original e do leo nos tratamentos P, PB, PD, PBN e PDN, nos dias 0 e 21da segunda campanha.

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012

Tabela 4b: Porcentagem da reduo dos valores das razes entre n-alcanos, pristano e fitano, comparando os dias 0 e 21 de cada tratamento. Amostra P PD PB PDN PBN n-C17/Pr 6,8% 7,3% 11,2% 36,8% 40,8% n-C18/Ph 7,7% 9,2% 13,7% 36,5% 39,4% n-alcanos (Pr+Ph) -14,3% -4,4% -9,3% 26,5% 30,8%

Esta segunda campanha sofreu algumas modificaes experimentais, como: troca da gua das unidades de simulao em tempos peridicos, utilizao de duas bombas de aerao, aumento da concentrao de biossurfactante e adio de 4.5g de NPK. Ainda assim, os tratamentos utilizando biossurfactante (PB e PBN) apresentaram os melhores resultados de degradao. Alm da comprovao da eficincia da tcnica de biorremediao com a reduo da concentrao de contaminantes nas unidades de simulao, necessria a demonstrao de que a biorremediao no produz metablitos txicos aos organismos. Para isso, foram realizadas anlises toxicolgicas e microbiolgicas apenas em amostras dos os tratamentos utilizando biossurfactante (PB e PBN), visando-se obter o grau da eficincia dos diferentes produtos testados, como aceleradores do processo de biodegradao dos componentes do petrleo. Os testes toxicolgicos, sem relativizar as amostras com o controle, demonstraram um efeito sub-letal significativo nos tratamentos PB e PBN, mas no um efeito letal, apenas no tempo 0. Ao longo do tempo este efeito subletal desaparece. Este efeito sub-letal foi bem intenso e demonstra que em termos toxicolgicos o experimento da primeira campanha e de segunda foram bem diferentes. O efeito sub-letal pode ser devido tanto ao petrleo cru quanto ao biosurfactante, pois no foi testado toxicologicamente no decorrer do experimento o tratamento contendo apenas petrleo (P). Quando as amostras foram relativizadas ao controle, aplicou-se uma ANOVA bi-fatorial, onde apenas o tempo afetou a sobrevivncia e a mortalidade, mas no o tratamento. A fecundidade foi elevando-se no decorrer dos tempos, mas sem diferena significativa entre os tratamentos, sugerindo que ao longo do tempo o efeito sub-letal observado inicialmente foi reduzido independente do tratamento utilizado (Figuras 7 e 8).

Figura 7: Fecundidade mdia dos coppodos na segunda campanha, em cada tratamento ao longo dos 21 dias, com os dados relativizados.

Figura 8: Sobrevivncia mdia dos coppodos na segunda campanha, em cada tratamento ao longo dos 21 dias, com os dados relativizados.

Atravs das anlises microbiolgicas, os resultados mostraram que, no final da simulao, o nmero de bactrias e fungos isolados nas amostras de todos os tratamentos (P, PB, PBN, PD e PDN) variou entre 0,35 x 102 e 1,15 x 104 e so valores inferiores aos relatados por Sutiknowati (2007), que encontrou 4,0 x 104 e 7,1 x 107 para os hidrocarbonetos antraceno, fenantreno e benzopireno. O controle da gua do mar (C) apresenta um maior nmero de bactrias do que de fungos e estes valores so corroborados com os resultados encontrados por Harwati et al. (2007). Em relao ao controle de gua do mar adicionado com petrleo (P) ocorreu uma diminuio do nmero de fungos em relao s bactrias. 8

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012

LEGENDA: 1 = gua do mar; 2 = gua do mar + petrleo; 3 = gua do mar + petrleo + biossurfactante; 4 = gua do mar + petrleo + biossurfactante + NPK; 5 = gua do mar + petrleo + dispersante + NPK; 6 = gua do mar + petrleo + dispersante.

Figura 9: Nmero de unidades formadoras de colnias de bactrias e fungos por litro em cada tratamento, no ltimo dia do segundo experimento.

4. Concluses
Na primeira campanha, as anlises geoqumicas mostraram que o tratamento de petrleo em conjunto com biossurfactante (PB) apontou maior degradao, indicado pela maior reduo percentual (19%) do valor da razo nalcanos/(Pr+Ph). Entretanto, os resultados da cromatografia gasosa podem ter sido mascarados pela alta volatilidade dos hidrocarbonetos saturados. Na segunda campanha foram injetados no cromatgrafo amostras do leo total (whole oil), a fim de se obter resultados mais precisos. Os resultados reafirmaram o potencial do tratamento utilizando biossurfactante, mas neste caso o resultado pode ter sido influenciado pelo bioestmulo, devido adio de NPK em alguns tratamentos contendo os surfactantes, j que o tratamento contendo surfactante qumico e NPK tambm foi satisfatrio. O tratamento contendo biossurfactante e NPK (PBN) revelou uma diminuio de 30,8% da razo n-alcanos/(Pr+Ph), enquanto o tratamento contendo surfactante qumico e NPK (PDN) revelou uma diminuio de 26,5% da razo n-alcanos/(Pr+Ph). Ainda assim, os resultados geoqumicos para tratamentos com biossurfactante apontaram maior biodegradao no final dos experimentos. Os resultados toxicolgicos apontaram que no geral no houve diferena significativa entre os tratamentos com relao fecundidade e sobrevivncia dos coppodos. Na primeira campanha os tratamentos no foram txicos, entretanto na segunda campanha houve um grande efeito letal no tempo inicial. Diante das variveis observadas, sugere-se que esta resposta tenha ocorrido em funo da alta concentrao de biossurfactante. As anlises microbiolgicas indicaram que ocorreu aumento do nmero de fungos em relao s bactrias nos tratamentos contendo apenas biossurfactante (PB) e biossurfactante em conjunto com NPK (PBN), sugerindo que a maior degradao do leo nestes tratamentos seja pela ao de fungos. As anlises de nitrognio total na gua no ltimo dia da segunda campanha em todos os tratamentos (apndice 11) apresentou a maior parte dos resultados abaixo do limite de deteco (<1,6 mg/L), porm revelaram que os tratamentos contendo surfactante qumico e NPK (PDN) e biossurfactante com NPK (PBN) apresentaram o mesmo valor (2,7 mg/L), o que permite sugerir um indcio de bioestmulo. Portanto, os resultados deste estudo, em escala piloto e nas condies experimentais estabelecidas, revelaram que o tratamento utilizando biossurfactante conjuntamente com NPK apresenta maior vantagem quando comparadas a eficincia e a toxicidade de cada tratamento. importante salientar que os resultados dos testes so baseados em um tipo especfico de petrleo que foi selecionado como modelo. Estes dados no devem ser generalizados a todos os tipos de leos leves, alguns dos quais podem ser mais ou menos eficazes sob as mesmas condies de ensaio, devido aos efeitos de diferentes propriedades de cada leo.

5. Agradecimentos
Este estudo foi realizado com o apoio financeiro da CAPES e FINEP PETROBRAS, atravs da RECUPETRO Rede Cooperativa em Recuperao de reas Contaminadas por Atividades Petrolferas.

6. Referncias
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Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012

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