EVALUACIN DE LA PRODUCCIN DE CIDO GIBERLICO CON DIFERENTES SISTEMAS

Hctor Molina Jimnez, Fabin Robles Martnez, Marco A. Brito Arias y Enrique Durn Pramo* Departamento de Bioprocesos, Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa, Instituto Politcnico Nacional. Ave. Acueducto s/n, La Laguna Ticomn, 07340 Mxico, D.F. (55) 57.29.60.00 ext. 56339. eduran@acei.upibi.ipn.mx
Palabras clave: cido giberlico, inmovilizacin celular, Gibberella fujikuroi. Introduccin. El cido giberlico es un producto del metabolismo secundario de Gibberella fujikuroi, su produccin es efectiva en ambientes con limitacin de nitrgeno (1). La inmovilizacin celular representa un conjunto de tcnicas que permiten concentrar la biomasa en espacios reducidos, la reutilizacin del biocatalizador y la separacin facilitada de la biomasa. La utilizacin de sistemas de produccin que utilizan clulas inmovilizadas representa una alternativa viable para la produccin de metabolitos secundarios de inters biotecnolgico. El presente trabajo est relacionado con la evaluacin de la produccin de cido giberlico con diferentes sistemas de clulas libres e inmovilizadas de Gibberella fujikuroi. Metodologa. Se utiliz la cepa Gibberella fujikuroi NRRL 2278. Se realizaron fermentaciones en biorreactor (Bioflo II, New Brunswick Scientific) de 5 litros Los cultivos se realizaron a un pH inicial de 4, agitacin de 240 rpm, aireacin de 0.3 vvm y una temperatura de 28-31C. Se realizaron tambin cultivos en matraz Erlenmeyer y se utilizaron las mismas condiciones de operacin que en los experimentos con el biorreactor a diferencia de que la velocidad de agitacin fue de 100 rpm. Se utiliz la tcnica del cido 3,5-dinitrosaliclico para la determinacin de azcares reductores, la reaccin del fenolhipoclorito de Weatherburn para la determinacin de amonio (2). La biomasa se cuantific por peso seco y se utiliz el mtodo espectrofotomtrico de Holbrook para la determinacin de cido giberlico (3). La inmovilizacin se realiz por el mtodo de atrapamiento en ?-carragenina al 2% en esferas de 3 mm de dimetro y la liberacin celular para la cuantificacin de la biomasa inmovilizada fue posible con ayuda de citrato de sodio 0.1 M. Se utiliz como base el medio de cultivo propuesto por Gonzlez y col. (4), el cual fue optimizado. Resultados y discusin. Se realizaron fermentaciones a diferentes concentraciones de glucosa y con tres fuentes de nitrgeno (cloruro, nitrato y sulfato de amonio). Se optimiz el medio de cultivo propuesto por Gonzlez y su composicin final fue la siguiente: glucosa 25.0 g/L, KH2PO4 5.0 g/L, NH4NO3 1.33 g/L y MgSO4 1.0 g/L. Se procedi a realizar las fermentaciones en matraz agitado y en biorreactor agitado con clulas libres e inmovilizadas, adems se realizaron fermentaciones en columna empacada con clulas inmovilizadas. El cuadro 1 permite comparar los resultados obtenidos en base a la produccin de cido giberlico con los diferentes sistemas utilizados.
Cuadro 1. Produccin de cido giberlico con Gibberella fujikuroi.

[GA 3] Matraz Reactor Columna gL-1 agitado agitado empacada Clulas libres 0.120 0.200 --Clulas 0.160 0.160 0.164 inmovilizadas La utilizacin del biorreactor agitado con clulas libres result proveer condiciones ms favorables y estables para la produccin del cido giberlico con G. fujikuroi, donde se logr producir 0.200 g/L contra 0.120 g/L obtenido por fermentacin en matraz agitado. Las condiciones de agitacin y de transferencia de masa estn seguramente involucradas en dicha diferencia. En relacin a las fermentaciones con clulas inmovilizadas, no se observ diferencia alguna entre los cultivos realizados en matraz agitado y biorreactor, en donde la produccin de cido giberlico fue de 0.160 g/L. Sin embargo, los cultivos realizados en un biorreactor de columna empacada permitieron un ligero aumento en la produccin pero de menor nivel comparada con la obtenida con clulas libres cultivadas en biorreactor agitado. Conclusiones y perspectivas. Bajo las condiciones de estudio, los cultivos de clulas inmovilizadas de Gibberella fujikuroi resultaron en producciones menores a las obtenidas con clulas libres. Las condiciones de cultivo debern ser optimizadas en cultivos de clulas inmovilizadas en vista de aumentar la produccin de cido giberlico.
Agradecimientos. Agradecemos el apoyo financiero del CONACYT (proyecto 30206), y del Instituto Politcnico Nacional (CGPI20010709).

Referencias.
1. Brckner, B; Blechschmidt, D. (1991), Nitrogen regulation of gibberellin biosntesis in Gibberella fujikuroi. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2(35): 646-650. 2. Weatherburn, M. W., Phenol-hipochlorite reaction for determination of ammonia, Analytical Chemistry, vol. 39, No. 8, 1967. 3. Food Chemicals Codex (1981), National Academy Press, Washington, D.C., pp: 133. 4. Gonzlez, P; Delgado, G; Antigua, M; Rodrguez, J; Larralde, P; Viniegra, G; Pozo, L; Prez, M. (1994), Some aspects of Gibberella fujikuroi culture concerning gibberellic acid production. Advances in bioprocess engineering. 425-430.