MTODOS PARA DETECO DE PARASITAS NAS FEZES a) Hoffmann - baseado na sedimentao espontnea das fezes aps duas horas.

um mtodo especfico para pesquisa de Schistosoma mansoni, porm por mostrar-se altamente eficiente tambm nas pesquisas de protozorios, este mtodo amplamente utilizado para a pesquisa dos demais parasitas. b) Baermann & Moraes - Mtodo baseado no Hidrotermotropismo das larvas de Strogilides stercoralis. c) Direto :O mtodo direto especfico para a pesquisa de trofozotos nas fezes (forma adulta dos protozorios). d) Kato e Stoll - Mtodos para contagem de ovos de Helmintos. e) Willis (flutuao em salina saturada) f) MIF sedimentao g) Teste da fita adesiva (pesquisa de Oxirus) So inmeros os mtodos de exames coprolgicos descritos na literatura, os quais podem ser qualitativos ou quantitativos, apresentando diferentes sensibilidades na deteco de ovos e larvas de helmintos e cistos de protozorios. Descrevemos a seguir alguns dos mtodos e solues utilizados de rotina em laboratrios para anlise. A coleta: Cada amostra deve conter no mnimo as seguintes informaes: nome do paciente, nmero de identificao, nome do mdico, data e horrio de coleta. O recipiente deve ser limpo e seco, com a boca larga, de capacidade aproximada de 250ml para que possa conter uma amostra significativa e que tenha vedao hermtica Fezes obtidas de vaso sanitrio no podem ser aproveitadas, porque a gua e a urina poderiam destruir as formas trofozoticas. Fezes excretadas no solo no podem ser aproveitadas, porque larvas de vida livre e outros contaminantes do solo poderiam confundir o diagnstico (principalmente veterinrio). Os recipientes com amostras fecais de pacientes com AIDS devem ser protegidos por um invlucro de plstico e identificados com etiqueta vermelha ou HIV positivo.

Os trofozotos de protozorios morrem e se degeneram fora do corpo humano. O tempo recomendado para amostras lquidas 30 minutos, enquanto das amostras pastosas o de uma hora aps a evacuao. Fezes formadas podem ser examinadas aps um dia.

Fixao: Fixador de Schaudinn: Usado na preservao de fezes frescas ou amostras da superfcie da mucosa intestinal; Esta soluo fixadora usada para a preparao de esfregaos permanentes corados para demonstrao de protozorios intestinais; Soluo de Lugol: Lugol 2,0 g Iodeto de Potssio - KI 4,0 g gua destilada Completar para 100 ml Conservantes de fezes: MIF (Mertiolato, Iodo e Formaldedo) Glicerina 5 ml Formaldedo (40%) 25 ml Mertiolato (ou mercurocromo) 0,1% 200 ml gua destilada 200 ml Soluo de lugol 43 ml Total 473 ml Soluo Mertiolato-Iodo-Formaldedo (MIF) Este mtodo permite obter ao mesmo tempo a preservao e a colorao de quase todos os estgios dos protozorios, de ovos e larvas de helmintos que se encontram nas fezes. Este procedimento tambm permite o exame direto a fresco do material fecal ou depois de vrias semanas, sem a necessidade de outra colorao Vantagens: . Alm de fixador, corante; . Fcil preparo; . til em trabalhos de campo; . Adequado para os mtodos de concentrao Desvantagens: . Inadequado para a preservao da morfologia de trofozotos de protozorios. . O iodeto interfere com outros mtodos de colorao;

. O iodeto pode causar distoro em protozorios. SAF (Acetato de Sdio, cido Actico e Formaldedo) Acetato de Sdio 15 g cido Actico 20 ml Formadedo (40%) 40 ml gua destilada 925 ml Total 1.000 ml

MTODO DIRETO Utilizado para pesquisa de cistos de protozorios e ovos de helmintos. mtodo pouco sensvel e s apresenta resultados positivos em infeces massivas. Procedimento: Adicionar soluo de lugol s fezes, preparar a lmina e observar direto ao microscpio em aumento de 100X e 400X. Especfico para a pesquisa de Trofozotos em fezes frescas. MATERIAL 1. Fezes recm emitidas 2. Lmina e lamnula de vidro 3. Esptula de madeira 4. Soluo de NaCl a 0,85% Aplicar diretamente na lmina de vidro pequena quantidade de fezes frescas fazendo misturar com algumas gotas de soluo salina fisiolgica, homogeneizando suavemente. Cobrir com lamnula e observar imediatamente ao microscpio.

MTODO DE HOFFMAN, PONS & JANER ou HPJ (Sedimentao espontnea) Utilizado na pesquisa de cistos de protozorios e ovos de helmintos. Mtodo baseado na sedimentao espontnea, especfico para a pesquisa de ovos de Schistosoma mansoni, porm altamente eficiente e amplamente utilizado para a pesquisa de todos os parasitas. MATERIAL NECESSRIO 1. Clice de decantao 2. Peneira

3. Gaze dobrada em 4 4. gua corrente ou destilada 5. Esptula de madeira (tipo abaixador de lngua) 6. Lmina e lamnula Tomar cerca de 4 g de fezes recm emitidas, dissolv-las no prprio recipiente de coleta (frasco padro para coleta de amostra) utilizando um pouco de gua. Transferir o material dissolvido para um clice de decantao fazendo filtrar em peneira contendo gaze em 4. Completar at do volume de gua e deixar repousar em superfcie firme e livre de vibraes por no mnimo 2 horas. Retirar o sedimento com um canudo ou pipeta Pasteur e transferir para lmina de vidro adicionando 2 gotas de soluo de Lugol e cobrindo com lamnula. Observar ao microscpio em objetiva de 10x. Tcnica Prtica: 1. Dissolver cerca de 4g de fezes em 10 ml de H2O em frasco pequeno 2. Filtrar em gaze dobrada em quatro, utilizando um clice de sedimentao 3. Completar o clice com gua e homogeneizar com basto de vidro. 4. Deixar em repouso de 2 a 24 horas. 5. Com uma pipeta de pasteur, retirar uma amostra do fundo do vrtice do clice. 6. Examinar ao microscpio, adicionando uma gota da soluo de lugol.

MTODO DE WILLIS FLUTUAO SIMPLES (flutuao em salina saturada) Essa tcnica se baseia na propriedade que alguns ovos de helmintos apresentam de flutuarem na superfcie de uma soluo de densidade elevada e de aderirem ao vidro. Este procedimento especfico para a pesquisa de ovos de Ancilostomdeos. 1. A soluo saturada de cloreto de sdio feita adicionando aproximadamente 40g de NaCl a 100mL de gua sob aquecimento at o ponto em que o sal no se dissolva mais na gua. A densidade desta soluo deve ser de aproximadamente 1,20g/mL. 2. Colocar uma quantidade de fezes coletadas de vrias partes do bolo fecal em uma pequena cuba contendo uma parte de soluo saturada de cloreto de sdio, dissolver as fezes

nesta soluo e acrescentar gua at a borda. 3. Colocar sob a borda da cuba uma lmina de vidro quase tocando a soluo saturada e deixar de 30 a 45 minutos . Aps este tempo, inverter a lmina rapidamente e observar ao microscpio. Tcnica Prtica: 1. Dissolver cerca de 5g de fezes em uma soluo saturada de NaCl. 2. Filtrar em gaze dobrada em quatro em frasco de Borrel (frasco comum)e completar com a soluo saturada de NaCl at formar um menisco convexo na boca do frasco. 3. Colocar uma lmina por sobre as bordas do frasco para uq efique em contato com o lquido ao menos por 5 minutos. 4. Retirar a lmina sem escorrer o lquido e examinar ao microscpio.

MTODO DE FAUST (Centrfugo-flutuao) Utilizado na pesquisa de cistos de protozorios e ovos de helmintos. 1. Dissolver cerca de 5g de fezes em 10ml de gua e filtrar em gaze dobrada em quatro. 2. Depositar o material em tubo cnico de centrfuga e centrifugar a 1500 rpm por 2 minutos. 3. Desprezar o sobrenadante e ressuspender novamente em 10 ml de gua. 4. Repetir os passos 2 e 3 at que o sobrenadante apresente-se claro. 5. Adicionar 10 ml de sulfato de zinco (ZnSO2) 33 %, densidade 1.180, homogenizar e centrifugar a 1500 rpm por 2. 6. Recolher com ala de platina a pelcula superficial, adicionar uma gota da soluo de lugol e observar ao microscpio.

MTODO DE RITCHIE Utilizado na pesquisa de cistos de protozorios. 1. Idntico ao mtodo de FAUST at o tem 4. 2. Adicionar cerca de 8 ml de formol a 10%, homogenizar, descansar por 10 a 20. 3. Adicionar cerca de 2 ml de ter, agitar vigorosamente e centrifugar a 1500 rpm por 2. 4. Desprezar o sobrenadante e examinar o depsito ao microscpio adicionando uma gota da

soluo de lugol.

MTODO DE BAERMANN-MORAES O mtodo de Baermann baseia-se no Hidrotermotropismo positivo das larvas de Strongyloides stercoralis. Utilizado na pesquisa e isolamento de larvas de Strongyloides sp. de fezes e de larvas de nematides do solo. baermann MATERIAL NECESSRIO 1. Estante para Baermann 2. Tubos de Hemlise 3. Peneira e gaze 4. Lminas e lamnulas 5. Tubo de ltex e pina de Mohr 6. Funil 7. gua aquecida a 45C Colocar a gua aquecida no funil com o tubo de ltex vedado pela pina de Mohr, quantidade suficiente para tocar a extremidade inferior da peneira contendo as fezes. Depositar pequena quantidade de fezes sobre a peneira contendo gaze e deixar em repouso por 45 a 60 minutos. Aps este tempo, soltar a pina de Mohr e deixar que o material escorra para um tubo de hemlise. Centrifugar o material em baixa rotao e observar o sedimento em objetiva de 10x. Este mtodo especfico para a pesquisa de larvas de S. stercoralis.

MTODO DE KATO - KATZ Utilizado principalmente na pesquisa de ovos de S. mansoni e outros helmintos. Utilizao do Kit (quantitativo - OPG): 1. Depositar uma pequena quantidade de fezes sobre uma folha de papel higinico colocando a tela por cima e pressionando com a paleta. 2. Colocar sobre uma lmina de vidro a placa de plstico e depositar no centro do orifcio as fezes

que ultrapassaram as malhas da tela (40 - 60 mg). 3. Comprimir as fezes no orifcio da placa at complet-lo. 4. Sobrepor a lamnula de celofane (embebida em verde malaquita) e inverter a preparao realizando presso com o polegar sobre a lmina at obter uma uniformidade do material. 5. Deixar em repouso por cerca de 60 minutos a temperatura ambiente. 6. Contar todos os ovos encontrados e multiplicar o total por 24, resultando em ovos/grama de fezes.

MIF SEDIMENTAO ESPONTNEA 1. Misturar o material fecal fixado pelo MIF. 2. Filtrar a suspenso atravs de gaze dobrada em 4 e colocar o filtrado em tubo cnico de sedimentao com capacidade de 125mL. 3. Adicionar gua corrente, se necessrio, at completar do volume do copo cnico . Deixar a suspenso em repouso durante 1 a 2 horas. 4. Decantar com cuidado 2/3 do sobrenadante sem perder o sedimento. Ressuspender o sedimento com gua corrente e deixar em repouso por mais uma hora. 5. Esse procedimento de lavagem pode ser repetido at que o sobrenadante fique relativamente claro. 6. Colher o sedimento e deposit-lo em uma lmina, fazendo a observao em microscpio.

MTODO DE GRAHAM (Mtodo da fita adesiva) COLETA PARA PESQUISA DE ENTEROBIUS VERMICULARIS (TCNICA DA FITA ADESIVA OU SWAB PERIANAL NOTURNO) Utilizado na pesquisa de ovos de E. vermicularis Tcnica 1. Colocar um pedao de fita adesiva transparente em uma esptula de madeira tipo abaixador de lngua com a parte adesiva voltada para fora 2. Pressionar firmemente a esptula contendo a fita adesiva contra as pregas anais e perianais 3. Colar a fita adesiva em lmina devidamente identificada

4. No momento da execuo do exame, levantar cuidadosamente a fita da lmina e pingar uma gota de toluol ou xileno e pressionar novamente a fita contra a lmina. A preparao ficar clara ou levemente corada, tornando os ovos bem visveis. S analisar o material imediatamente..

Referncias bibliogrficas: AMATO NETO, V. & CORRA, L.L., 1991. Exame parasitolgico das fezes. 5a edio. Sarvier, So Paulo, SP. 92p. CIMERMAN, B. & CIMERMAN, S., 1999. Parasitologia Humana e seus fundamentos gerais. Editora Atheneu, Belo Horizonte, MG. 375 p. DE CARLI, G.A. 2001. Parasitologia Clnica: Seleo de Mtodos e Tcnicas de Laboratrio para o Diagnstico das Parasitoses Humanas. Editora Atheneu, Rio de Janeiro, RJ. 810 p. FERREIRA, A.W. & VILA, S.L.M., 1996. Diagnstico laboratorial das principais doenas infecciosas e auto-imunes. Editora Guanabara-Koogan, Rio de Janeiro, RJ. 302 p. NEVES, D.P. et alli, 1998. Parasitologia Humana. 10a edio. Editora Atheneu, Belo Horizonte, MG. 524 p. REY, L., 1991. Parasitologia. 2a edio. Editora Guanabara-Koogan, Rio de Janeiro, RJ. 731 p. WHO World Health Organization, 2000. Pranchas para o Diagnstico de Parasitas Intestinais. Livraria Editora Santos, So Paulo, SP. 12 p. WHO World Health Organization, 1999. Procedimentos Laboratoriais em Parasitologia Mdica. Livraria Editora Santos, So Paulo, SP. 114 p.