LABORATORIO DE QUMICA ANALTICA III PRACTICA 4. SEPARACIN DE PIGMENTOS POR CROMATOGRAFIA EN COLUMNA. 3.

1 OBJETIVO Aprender la tcnica de cromatografa de columna y separar los pigmentos contenidos en un vegetal. 3.2 INFORMACIN GENERAL

La cromatografa es un poderoso mtodo de separacin que tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia. La cromatografa en columna fue inventada y de nominada as, a principios del siglo xx por el botnico ruso Mikhail Tswett. El empleo la tcnica para separar varios pigmentos vegetales, tales como clorofilas y xantofilas, atreves de una columna de vidrio rellena con carbonato de calcio finamente dividido. Las especies separadas aparecan como bandas coloreadas en la columna, lo que justifica el nombre que eligi para el mtodo (del griego CHROMA que significa <<color>>, y GRAPHEIN que significa <<escribir>>.) La cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil que presenta distintas variantes. En toda separacin cromatografa hay dos fases (solida, liquida o gas) una mvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto intimo. La muestra se introduce en la fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla a separar se invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separacin. Si un componente esta la mayor parte del tiempo en la fase movil el producto se mueve rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho mas lenta. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
3.3 MATERIALES Y REACTIVOS Materiales 1 columna cromatografca 3 vasos de precipitado de 50 ml. 1 probeta de 100 ml. 1 pipeta de 10 ml. 1 matraz Erlenmeyer de 100 ml. 1 bomba de vaco 1 pinza de 3 dedos

1 varilla de vidrio de 60 cm Reactivos Solucin coloreada con pigmento vegetasl 10 g de almina 5 g de CaCO3 30 g de sacarosa 0.5 ml de n-propanol 10 ml de acetona 3.4 PROCEDIMIENTO Se colocan 5 ml de una solucin fuertemente coloreada una columna cromatogrfica de 2-2.5 cm de dimetro y 30 o 40 cm de altura. Previamente empacada de la siguiente forma; almina 5 cm aproximadamente de altura, CaCO3 5 cm y 15 cm de sacarosa. Se comprime el contenido y se conecta a un sistema de vaco. Se aplica el vaco y se permite que el extracto sea absorbido en la columna. Se eluye el extracto con una solucin al 0.5% de n-propanol en ter de petrleo y se observa la coloracin y el numero de bandas que se forman. 3.5 CALCULOS Y RESULTADOS Entregar un diagrama que muestre las coloraciones y el nmero de bandas observadas, adems indicar que tipos de compuestos fueron absorbidos en cada material, resulta til ayudarse de las coloraciones y polaridades. Indicacin: Los pigmentos de las plantas se clasifican generalmente en carotenos xantofilas y Clorofilas. 1. CUESTIONARIO: 2. 1.- Como se identifican los diferentes pigmentos? R:________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ ___________________________ 3. 4. 2.- Qu color eluyo con mayor facilidad? 5. R:________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ ___________________________ 6. 7. 3.- Qu colores tiene ms afinidad por la alumina del papel? 8. R:________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ ___________________________ 9. 10. 4.- Indica la secuencia de separacin de los pigmentos?

11. R:________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ ___________________________ 12. Muestra tus resultados en imgenes.