26 a 30 de maio de 2008 Joo Pessoa, PB UFPB/ABZ

AVALIAO DE TANINOS CONDENSADOS EM PLANTAS FORRAGEIRAS

Patrcia Mendes Guimares Beelen1,3, Jos Morais Pereira Filho2, Roger Nicolas Beelen1
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Centro de Cincias Agrrias, Universidade Federal de Alagoas

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Centro de Sade e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande e-mail para correspondncia: patricia@ceca.ufal.br

Introduo

As forrageiras tropicais so constantemente submetidas a estresses causados por altas temperaturas, dficit hdrico, radiao solar e deficincia de nutrientes que limitam a produo e a qualidade nutricional das mesmas. Alm da limitao na quantidade de nutrientes, muitas espcies tropicais possuem prdisponibilidade gentica para produzir metablitos secundrios como taninos em estgios particulares de desenvolvimento ou sob condio de estresse. Os metablitos secundrios constituem um meio de defesa contra bactrias, fungos, vrus, estresse ambiental e ataque de herbvoros, e podem proporcionar planta caractersticas como gosto amargo, odor repulsivo e provocar intoxicaes ou efeitos antinutricionais nos predadores (GINER-CHAVES, 1996). Vrios trabalhos atestam que os taninos presentes nas forrageiras podem ter importantes conseqncias nutricionais para os ruminantes (Tabela 1), contudo, os mtodos tradicionais de anlise de alimentos no incluem avaliao de taninos e, em funo disso, pouco se sabe a respeito da natureza desses compostos nas espcies forrageiras tropicais. No presente trabalho, so apresentados resultados de pesquisas sobre taninos condensados, as principais metodologias de anlise e problemas metodolgicos, e sugeridos enfoques para pesquisas futuras. Natureza e modo de ao dos taninos

Os taninos so comumente divididos em hidrolisveis e condensados, em funo da sua estrutura qumica. Os taninos hidrolisveis so polmeros de cido glico (galotaninos) ou cido hexahidroxidifnico (elargitaninos) (Figura 1). Esto normalmente presentes em baixa concentrao nas plantas e podem sofrer facilmente hidrlise por bases, cidos e esterases. O

metabolismo microbiano e a digesto gstrica convertem esses taninos em metablitos de baixo peso molecular. Alguns desses metablitos so txicos e esto associados a hemorragias gastro-entricas e necrose do fgado e rins, principalmente em monogstricos (CANNAS, 2001).

Figura 1. Estrutura do tanino hidrolisvel (adaptado de HAGERMAN, 1998)

Os taninos condensados so polmeros de flavan-3-ols (catequina) e ou flavan 3,4 diols (leucoantocianidina) ligados por ligaes do tipo carbono-carbono que no so susceptveis de quebra por hidrlise (Figura 2) e, como conseqncia, no so absorvidos pelo trato gastrointestinal (CANNAS, 2001). Contudo, esses polmeros tem recebido crescente ateno por possurem a capacidade de proteger a protena ingerida da degradao ruminal (by pass), quando em baixa concentrao e por apresentarem importante ao antinutricional quando em alta concentrao (acima de 5% da MS) na dieta.

Figura 2. Estrutura do tanino condensado (adaptado de HARGEMAN, 1998)

Os taninos condensados podem formar complexos com celulose, amido, pectinas, alcalides, outros polifenois e sais de metal pesado (GINER-CHAVES, 1996), entretanto, sua caracterstica mais marcante, que explica a maioria de suas propriedades biolgicas e antinutricionais, a capacidade de formar complexos insolveis com protenas (JEAN-BAIN,

1998). A fora desses complexos depende das propriedades dos taninos, porm tambm das protenas. As protenas com forte afinidade pelos taninos so caracterizadas por apresentarem uma grande proporo de prolina, uma relativa quantidade de aminocidos de cadeia no polar, elevado peso molecular e estrutura terciria aberta (REED, 1995). A maioria das associaes tanino-protena de interesse biolgico so por pontes de hidrognio ou ligaes hidrofbicas. Esses complexos so, ao menos in vitro, reversveis e podem ser dissociados por modificao do pH (JEAN-BAIN, 1998). Assim, os taninos solveis podem ter efeitos opostos sobre a utilizao digestiva e metablica das protenas. Diminuindo a degradabilidade ruminal, eles conseqentemente aumentam a disponibilidade de protena alimentar no duodeno. Por outro lado, os taninos que permanecem livres possuem, em geral, um efeito negativo sobre a digesto, ao inibir a fermentao. A formao efetiva de complexo tanino-protena reversvel no intestino delgado depende da natureza das protenas complexadas, do tipo e grau de polimerizao dos taninos e do pH do rmen (MANGAN, 1988). A presena de taninos condensados na dieta tambm est associada diminuio da digestibilidade dos glicdeos parietais, levando a um decrscimo na produo de cidos graxos volteis, de gs e do valor energtico dos alimentos (KUMAR e SINGH, 1984). Estes efeitos poderiam ser atribudos a ligaes dos taninos solveis com componentes da parede celular (CANO-POLOCHE, 1993); a uma reduo da atividade enzimtica, pela inativao de importantes enzimas microbianas (BAE et al., 1993) e a uma modificao da microflora, devido a uma ao bacteriosttica ou bactericida do tanino (KUMAR e VAITHIYANATHAN, 1990; NELSON et al., 1997; McSWEENEY et al., 2001). Porm, para que esses efeitos possam ocorrer, a molcula de tanino deve ser solvel e conter grupamentos fenlicos suficientes para criar pontes entre as molculas de protena. Estas duas condies so ligadas ao grau de polimerizao, ou seja, a massa molecular do tanino, que pode variar de 500 a 3000 Daltons. Os polifenois vegetais com pesos moleculares inferiores a 500 daltons (cidos fenlicos, flavanides) e os polmeros fenlicos insolveis (lignina), no apresentam a atividade biolgica dos taninos (JANSMAN, 1993). Influncia dos taninos na nutrio de ruminantes

A quantidade de taninos sintetizados pela planta depende da espcie, cultivar, tecido, estgio de desenvolvimento e condies ambientais. Esses fatores influenciam no somente a concentrao, mas tambm a composio em monmeros e o peso molecular dos taninos (LASCANO et al., 2001), caractersticas que podem estar determinando a ao desses fenis na qualidade nutricional das plantas. Os taninos solveis ficam armazenados nos vacolos das clulas, onde no interferem no metabolismo da planta, sendo liberados com a ruptura da clula, que pode ser causada pelo corte ou mastigao da forrageira (MIN et al., 2003). Geralmente, taninos induzem respostas negativas nutrio de ruminantes. Esses efeitos podem ser instantneos como a adstringncia, reduzindo a palatabilidade e consequentemente o consumo, ou em longo prazo, agindo como fator antinutricional ou txico. 3

Tabela 1. Exemplos de estudos sobre os efeitos nutricionais dos taninos condensados Referncia
McNABB et al. (1993)

Espcies estudadas
Ltus pedunculatus

Estudo
Forragem (5,0-5,5% de taninos) oferecida com e sem PEG (100 g/dia) Forragem (3,5% de taninos) oferecida com e sem PEG (100 g/dia) Forragem oferecida com e sem PEG (3,5% da MS)

Efeito
No houve diferena de consumo entre os tratamentos No houve diferena de consumo entre os tratamentos Suplementao com PEG aumentou o consumo em 10% em mdia Efeito significativo da adio de PEG sobre a sntese microbiana

WANG et al., 1994

Ltus corniculatus

BARAHONA et al. (1997)

Desmodium ovalifolium, Flemingia macrophylla

GODOY et al. (2005)

Leucena (Leucaena leucocephala ), Amendoim forrageiro (Arachis pintoi), Estilosantes mineiro (Stylosanthes guianenses cv mineiro ), Estilosantes Campo Grande (Stylosanthes guianenses cv Campo Grande e Calopognio. (Calopogonio sp) Sabi (Mimosa caesalpiniifolia)

Sntese microbiana pela tcnica in vitro de incorporao de radiofsforo das espcies tratadas ou no com PEG

ALVES et al. (2006)

Suplementao, com PEG (10 g /dia), de ovinos e caprinos consumindo feno de sabi

No houve diferena de consumo, digestibilidade da MS, FDN e EE, contudo o PEG melhorou a digestibilidade da PB Alta inibio do crescimento e atividade enzimtica de Rumincoccus flavefaciens FD1

BEELEN et al. (2006 a)

Jurema preta (Mimosa hostilis), Sabi (Mimosa caesalpinifolia) e Moror (Bauhinia cheilantha)

Taninos purificados e diludos em diferentes concentraes sobre o crescimento e atividade enzimtica de Rumincoccus flavefaciens FD1 Consumo e degradabilidade in situ da forragem (26,68%, 15,41% e 8,5% de tanino, respectivamente), tratadas ou no com PEG (90 g/Kg MS) Diversos mtodos de reduo de taninos (cinzas, CaOH e PEG) avaliados pela tcnica de produo de gs

BEELEN et al. (2006 b)

Jurema preta (Mimosa hostilis), Sabi (Mimosa caesalpinifolia) e Moror (Bauhinia cheilantha)

O consumo e degradabilidade in situ da MS, FDN e PB aumentaram em funo do tratamento

NOZELLA (2006)

Angico (Anadenanthera macrocarpa), Aroeira (Astronian urudeuva), Jurema preta (Mimosa hostilis), Malva branca (Sida colrdifolia) e manioba (Manihot pseudoglaziovii) Jurema preta (Mimosa hostilis)

O tratamento com PEG aumentou a produo de gs das espcies Angico, Aroeira e Jurema preta

PEREIRA FILHO et al. (2007)

Degradabilidade in situ do feno de jurema preta (21,92% de tanino) tratado com 2, 4, 6 e 8% de NaOH Nvel de tanino, concentrado e uria sobre o consumo, digestibilidade e emisso de metano em bovinos

Tratamentos com 4, 6 e 8% de NaOH aumentaram a degradao ruminal da MS e PB No houve influncia do tanino sobre a digestibiidade e emisso de metano. O aumento do concentrado na dieta com baixo tanino reduziu a quantidade de metano produzida.

OLIVEIRA et al. (2007)

Sorgo com alta e baixa concentrao em tanino

O efeito dos taninos sobre o consumo voluntrio tem se mostrado varivel na literatura, mesmo em se considerando que uma das funes dos taninos nas plantas a de defesa contra o consumo por herbvoros. Alguns estudos no observaram influncia dos taninos sobre

o consumo voluntrio, enquanto outros ressaltaram o aumento do consumo devido utilizao de Polietilenoglicol (PEG) na dieta (Tabela 1). KUMAR e VAITHIYANATHAN (1990) sugeriram que altas concentraes em tanino poderiam acarretar em diminuio do consumo de trs maneiras: 1. baixa palatabilidade da dieta, causada pela adstringncia, ligao do tanino com protenas salivares e de mucosa; 2. distenso fsica do rmen, resultado da diminuio da digesto da matria seca; 3. resposta hormonal desencadeada a partir de ligaes dos taninos com a parede do intestino delgado. A influncia dos taninos sobre a degradao dos nutrientes depende essencialmente da formao de complexos entre taninos e os componentes da dieta e ao seu efeito sobre a populao microbiana e atividade enzimtica da mesma (KUMAR & VAITHIYANATHAN, 1990; McSWEENEY et al., 2001). Os taninos so considerados inibidores do crescimento microbiano, porm o mecanismo envolvido ainda no bem conhecido. Nas bactrias, esse tm sido associado a formao de complexos entre os taninos e a parede celular das bactrias ou enzimas extra celulares secretadas, fazendo com que ocorra a inibio do transporte de nutrientes para a clula, com conseqente retardo do crescimento do organismo (McSWEENEY et al., 2001). BAE et al. (1993) e JONES et al.(1994) observaram que, em presena de taninos, algumas bactrias so submetidas a modificaes morfolgicas tais como elongao das clulas, presena de grande quantidade de material extracelular e formao de micro-colnias aderentes. Trabalhos demonstraram que Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus albus e Ruminococcus flavefaciens (BAE et al., 1993; NELSON et al., 1997; BEELEN et al., 2006a), so fortemente inibidas pela presena de taninos condensados solveis no meio. Essas trs espcies pertencem ao grupo das bactrias que aderem firmemente ao substrato e so responsveis por at 91% da atividade endoglucanase no rmen (MIRON et al., 2001). CHIQUETTE et al. (1988) sugeriram que as bactrias aderentes penetram melhor nos tecidos contendo baixos teores de taninos. A localizao das vesculas de tanino logo abaixo da epiderme e prximo aos estmatos inibiria a colonizao microbiana. A reduo da digestibilidade no rmen tm sido parcialmente atribuida a inibio da atividade enzimtica microbiana por taninos, a partir da formao de complexos tanino-enzima. MAKKAR et al. (1988), demonstraram que as atividades de urease, carboximetilcelulase, glutamato desidrogenase e alanina aminotrasferase diminuram em dietas ricas em tanino (folhas de Quercus incana) se comparado com dietas pobres em taninos. Em BAE et al. (1993) os taninos de Lotus corniculatus inibiram a atividade de endoglucanases em culturas de Fibrobacter succinogenes S85 a concentraes to baixas quanto 25 g/mL. BEELEN et al. (2006 a e b) observaram a reduo da atividade da endoglucanase pelos taninos das espcies jurema preta, sabi e moror, tanto no contedo ruminal de caprinos quanto em culturas de Ruminococcus flavefaciens FD1. Por outro lado, o consumo de taninos por ruminantes tambm tem sido relacionado a efeitos positivos sobre a nutrio. Dentre os efeitos positivos, associados a concentraes por volta de 3-4% de tanino na MS, destacam-se a proteo da protena alimentar contra a excessiva degradao ruminal; a diminuio do desperdcio de amnia; o aumento da 5

absoro de aminocidos provenientes da dieta no intestino delgado, a preveno do timpanismo e mais recentemente (ANIMUT et al., 2008), a reduo da produo de gs metano no rmen. Em resumo, os taninos presentes nas forrageiras possuem efeitos positivos e negativos sobre o valor nutricional das mesmas (Figura 3). O nvel de protena bruta na dieta, a energia disponvel para a sintese de protena microbiana, assim como a concentrao e adstringncia do tanino influenciam a direo dos efeitos.

Tanino condensado

Solvel

Complexos Tanino-protena

Complexos Tanino-carboidrato

Efeito Digestibilidade negativo Degradao protena NH3 CH4 Reciclagem Sntese microbiana

Celulose amido protena Microrganismos enzimas

Efeitos positivos

Absoro intestinal de AA essenciais Protenas salivares Polietilenoglicol Polivinilpirolidona PPVP Fezes Tanino-protena Tanino-carboidrato

endgena

Figura 3. Efeitos positivos e negativos dos taninos em ruminantes (adaptado de GINERCHAVES, 1996) Respostas adaptativas dos animais

Existe a possibilidade de respostas adaptativas dos animais, geradas pela presena de altas concentraes de tanino na dieta. So elas a secreo de saliva rica em prolina e a presena de microrganismos mais resistentes aos efeitos do tanino. Alguns animais consumidores de plantas tanferas secretam substncias com alta afinidade por taninos, como protenas ricas em prolina (PRP). A quantidade e a eficincia desses agentes na saliva dependem da espcie e da concentrao de taninos na dieta. Trabalhos atestam que no existe PRP na saliva de ruminantes domsticos (BARRY e McNABB, 1999; MAKKAR, 2003). Contudo, esses trabalhos no invalidam a idia de que

outras protenas salivares com alta afinidade por taninos possam ser encontradas em animais consumindo habitualmente forrageiras tanferas. SILVA et al. (1998), avaliando a aceitabilidade de diferentes espcies lenhosas da caatinga por ovinos da raa Santa Ins, constataram que Jurema Preta foi a espcie mais consumida, tanto no incio (janeiro-fevereiro), como no final (maio-junho) do perodo chuvoso. Esses dados podem indicar a adaptao do animal e dos microrganismos aos efeitos inibitrios dos taninos e devem ser considerados na predio do seu efeito sobre o consumo e a digestibilidade. BARRY (1985), observou que a resposta ao tratamento de Lotus penduculatus com PEG foi menor nos animais previamente condicionados a dieta. Em outra linha de pesquisa, diversos trabalhos tm buscado identificar

microrganismos ruminais resistentes a taninos. JONES et al. (1994), observaram que taninos de Onobrychis viciifolia inibiram o crescimento e a capacidade proteoltica de Butyrivibrio fibrisolvens A38 e Streptococcus bovis 45 S1, mas tiveram pouco efeito sobre Provotella ruminicola B14 e Ruminobacter amylophilus WP225. NELSON et al. (1997) estudando as interaes entre trs fontes de taninos purificados e cinco tipos de bactrias ruminais, observaram variaes entre os tipos bacterianos quanto resistncia aos taninos e entre as fontes de taninos quanto quantidade requerida para a inibio do crescimento bacteriano. McSWEENEY et al. (1999) isolou e caracterizou bactrias proteolticas resistentes a taninos. PAIVA et al. (2006), estudando a tolerncia de microrganismos ruminais a taninos, conseguiu isolar 12 cepas que toleraram at 2 g de tanino por litro de meio de cultivo para bactrias ruminais. Essas cepas foram capazes de fermentar a celobiose, dextrose, frutose, glicose, manose e sucrose, porm no a celulose. Principais metodologias de anlise e problemas metodolgicos

Alguns trabalhos apresentam valores totalmente diferentes para a concentrao em taninos de uma mesma espcie. Mesmo sabendo que vrios fatores podem ter influenciado os resultados, no se deve descartar a idia de que a falta de padronizao na escolha da metodologia possa ter contribudo para tal divergncia. Diferentes mtodos colorimtricos, gravimtricos e de ligao com protena foram desenvolvidos para estimar a concentrao e atividade biolgica dos taninos. Trs exemplos de mtodos amplamente citados na literatura, inclusive no Brasil, esto descritos abaixo. Os mtodos Folin Denis (SWAIN e HILLS, 1959) e Azul da Prssia (PRICE e BUTLER, 1977) se baseiam nas reaes de oxirreduo entre compostos fenlicos e ons metlicos, produzindo pigmentos de cor azul. Eles so indicados para a quantificao de fenis totais, uma vez que no distinguem os taninos dos outros fenis, o que pode levar a uma superestimao dos taninos. O padro utilizado o cido tnico, um tanino hidrolisvel. O mtodo butanol-HCL e suas modificaes (PORTER et al., 1986; TERRILL et al., 1992), especfico para tanino condensado (proantocianidinas). Neste mtodo, subunidades de proantocianidinas so oxidadas em antocianidinas originando pigmentos variando da cor rosa ao vermelho, cuja intensidade indica a quantidade de tanino contido na amostra. A 7

metodologia modificada por TERRILL et al. (1992) consegue quantificar, alm do tanino solvel no extrato, o tanino ligado ao resduo de FDN e PB. O padro utilizado pode ser interno, tanino purificado da prpria espcie estudada, ou externo, geralmente tanino purificado de quebracho (Schinopsis balansae). O mtodo de difuso radial, descrito por HAGERMAN (1987), o mais indicado para o estudo da atividade biolgica dos taninos, uma vez que capaz de quantificar complexos tanino-protena solveis, o que no acontece com os mtodos de precipitao de protenas. Pela difuso radial, os taninos contidos no extrato das plantas se difundem atravs de um gel de agarose com protena srica bovina (BSA) e origina um precipitado em forma de anel, cujo dimetro considerando proporcional a capacidade desses taninos precipitarem protenas. Esses mtodos do importantes informaes sobre os compostos fenlicos presentes nos vegetais, contudo, devido problemas ligados preparao das amostras, extrao e tipo de substncia usada como padro, nenhum mtodo considerado ideal (GINER-CHAVES, 1997; HAGERMAN, 1998). Vrias revises sobre anlise de compostos fenlicos j foram publicadas e esto compiladas no Tannins handbook (HAGERMAN, 1998). Descreveremos a seguir os principais pontos limitantes na avaliao de taninos. Preparao das amostras O modo de preparao e armazenamento das amostras pode alterar a estrutura do tanino e comprometer a confiabilidade da anlise, devido a sua habilidade de reagir com outras molculas. Se as amostras so constitudas de material in natura, o ideal que essas sejam transportadas em baixa temperatura e analisadas imediatamente aps o corte. Como na maioria das vezes isso no possvel, as alternativas de conservao do material so: liofilizao, secagem em estufa a uma temperatura entre 40 C e 60 C ou congelamento, em ordem decrescente de eficincia (CANO et al., 1994)(Tabela 2).

Tabela 2. Efeito do mtodo de conservao da amostra de folhas de leguminosas sobre a concentrao em tanino condensado solvel (%TCS)
Espcie Congelada % TCS Calliandra spp. Dioclea guianensis Flemingia macrophylla Phyllodium spp. Tadehagi spp Mdia geral
*

Mtodo de conservao Liofilizada % TCS 10,9 16,0 16,7 22,2 18,4 16,8 a Seca em estufa (60 C) % TCS 7,9 15,4 12,5 19,5 12,2 13,5 b

4,2 10,9 10,8 19,2 16,4 12,3 c

Determinado pelo mtodo Butanol-HCL. Fonte: CANO et al. (1994)

A liofilizao considerada o mtodo mais eficiente para a preservao das caractersticas do tanino, contudo, na ausncia de um liofilizador, a secagem pode ser feita em

estufa, com temperatura prxima ao mnimo (40 C), a fim de conservar ao mximo os taninos solveis e evitar atividades enzimticas que possam comprometer as outras caractersticas da amostra. A secagem a uma temperatura acima de 60 C pode promover ligaes entre os taninos solveis e outras molculas da amostra, subestimando sua concentrao (REED, 1995; MARTN-GARCA e MOLINA-ALCAIDE, 2008). Para MUETZEL e BECKER (2006), a influncia da forma de secagem sobre a composio em taninos espcie-dependente e no afeta sua atividade biolgica. Extrao de taninos Os taninos so extrados com solventes polares como metanol e acetona. Diversas variaes metodolgicas j foram publicadas e vo, desde diferenas na concentrao aquosa dos solventes e pr-extrao das amostras para a eliminao de pigmentos e lipdeos, at a utilizao de ultra-som e concentradores de amostra a vcuo (ROSALES, 1999). O solvente mais utilizado na extrao de tanino a acetona a 70% em meio aquoso, contendo 0,1% de cido ascrbico. A acetona reconhecida como o mais eficiente solvente para a extrao de proantrocianidinas e o cido ascrbico adicionado soluo para prevenir a oxidao dos taninos durante a extrao (JONES et al., 1976). Como esta soluo capaz de extrair outros compostos presentes na amostra, como lipdeos solveis e pigmentos que no so taninos, TERRIL et al. (1992) sugeriu a adio de ter etlico ao protocolo, com o objetivo de retirar as impurezas do extrato. A escolha do mtodo de extrao importante porque os resultados de todas as anlises posteriores podem ser afetados pela eficincia da extrao. Por outro lado, alguns solventes no so compatveis com algumas metodologias. Por exemplo, a acetona interfere nos mtodos de precipitao de protenas, com exceo do mtodo de difuso radial (HAGERMAN, 1998). Uso de padres externos x internos A literatura aponta a escolha do padro como um dos principais problemas encontrados na determinao de taninos condensados (MUPANGWA et al., 2000). A quantidade de tanino condensado de uma forragem pode ser determinada comparando-a com curvas feitas a partir de concentraes conhecidas do tanino purificado da prpria planta estudada (padro interno) ou de um padro comercial (externo). Os resultados so apresentados como absolutos, quando a curva feita utilizando padro interno ou como unidades equivalentes ao tanino utilizado como padro externo (e.g. gramas equivalente tanino de quebracho/kg MS). A melhor forma de se determinar, com preciso, a concentrao em taninos de uma amostra, utilizando o tanino purificado da prpria amostra para a construo da curva padro. O mtodo mais difundido utiliza Sephadex HL-20 para a purificao dos taninos (HAGERMAN, 1998). Ele laborioso e caro, o que praticamente inviabiliza sua utilizao na anlise de um grande nmero de espcies forrageiras ou de dietas contendo diferentes alimentos.

Devido diversidade estrutural dos taninos, a utilizao de tanino purificado de uma nica espcie vegetal no atende, de forma satisfatria, as necessidades de utilizao de um padro absoluto (padro externo). Essa diversidade estrutural pode influenciar a leitura pelo espectrofotmetro e uma mesma medida de absorbncia significar diferentes concentraes entre o padro externo e a amostra. A figura 2 apresenta um exemplo claro deste problema.

1.8 1.6 Absorbncia a 550 nm 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 Quantidade de tanino purificado (mg/mL)

Figura 2. Curva padro dos taninos purificados das espcies Jurema Preta, Sabi e ~ Moror
Fonte: BEELEN et al. (2006c)

No exemplo acima, a escolha do padro poderia ter influenciado seriamente os resultados das anlises. Por exemplo, se o tanino purificado de Jurema Preta tivesse sido escolhido como padro para todas as espcies, uma leitura do extrato de Moror de 0,5 a 550 nm corresponderia a 20,3% de tanino condensado, quando na verdade correspondeu a 9%,utilizando como padro o tanino purificado do prprio Moror. Isto causaria uma superestimao de 225,5% na concentrao de tanino solvel do Moror (BEELEN et al., 2006c). A soluo desse problema pode depender do desenvolvimento de metodologias mais acessveis para a purificao de taninos. Um mtodo que ainda no est muito difundido, utilizando Itrbio trivalente (GINER-CHAVES et al., 1997), conseguiu produzir, de forma mais rpida e barata, padres internos cujos resultados foram compatveis com os obtidos com os taninos purificados com Sephadex LH-20 e merece ser testado. Anlises qumicas x ensaios biolgicos Alm da concentrao em taninos, o peso molecular do tanino, a composio em monmeros (LASCANO et al., 2001) e at a distribuio espacial desses monmeros na molcula de tanino (ROSALES, 1999) podem ser caractersticas que determinam o efeito desse fenol na qualidade nutricional da planta. Assim, o conhecimento da concentrao em taninos de uma forrageira dever ser complementado com a determinao de sua atividade biolgica e ensaios que analisem seu efeito sobre a digestibilidade, metabolismo e desempenho animal.

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A tcnica de digestibilidade in vitro por produo de gs vem sendo, mais recentemente, utilizada em estudos com plantas tanferas. A metodologia descrita por MAKKAR (2001) avalia o efeito dos taninos por meio de bioensaio realizado em sistema in vitro, medindo a produo de gs de amostras na presena ou no de PEG. Quanto maior for o acrscimo na produo de gs pela amostra na presena de PEG, maior a reatividade dos taninos. Polmeros sintticos como polivinil pirolidona (PVP), polivinil polipirolidona (PVPP) e notadamente o polietilenoglicol (PEG) contm um nmero de molculas de oxignio suficientes para formar fortes ligaes com os grupos fenlicos e hidroxilas dos taninos (SILANIKOVE et al., 2001). Em funo disso, esses polmeros, particularmente o PEG, so amplamente utilizados em estudos que buscam entender melhor como os nveis de taninos afetam os ruminantes (Tabela 1). Consideraes finais

O crescente interesse pelos taninos, demonstrado pelo elevado nmero de publicaes sobre o tema em peridicos cientficos renomados, evidencia a importncia desses polifenois na nutrio de ruminantes. Contudo, uma srie de estudos ainda so necessrios para melhorar a qualidade nutricional da dieta dos animais que consomem taninos, como por exemplo: - estimar e caracterizar, de preferncia utilizando uma metodologia padronizada, os taninos condensados em espcies forrageiras que contribuem significativamente para a dieta dos ruminantes; - Comparar a concentrao em taninos de uma mesma espcie forrageira nas diferentes fases do ciclo fenolgico ou sob condies edafo-climticas diversas; - testar mtodos capazes de reduzir a concentrao dos taninos na forragem a valores relacionados com os efeitos positivos sobre a nutrio de ruminantes; - identificar o percentual mximo de participao de cada espcie na dieta, visando controlar as concentraes de tanino ingerido; - identificar provveis respostas adaptativas dos animais a presena de tanino na dieta; - identificar populaes ruminais tolerantes a taninos.

Referncias
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