Rev. bras. oceanogr.

, 46(2):187-193, 1998

Avaliao preliminar da biodegradabilidade de tensoativos aninicos em gua do mar

(Biodegradability of anionic surfactants in sea water)

Ricardo Rodrigues Mastroti 1,Eduinetty Ceci Pereira Moreira de Sousa 1, Denis Moledo de Souza Abessa 1 & Vnia Sass2

lInstituto Ocenogrfico da Universidade de So Paulo (Caixa Postal 66149, 05315-970 So Paulo, SP, Brasil) 2Bioagri Biotecnologia Agrcola (Caixa Postal 573, 13412-000 Piracicaba, SP, Brasil)

Abstract:

In order to evaluate the biodegradability

of four anionic surfactants

(LAS,

SOS, n-SOBS, STPBS) in sea water, 19-day biodegradation tests were conducted, according to the method required by the Health Ministry for approval of commercial products. This method was modified for testing in sea water, as it originally had been described for freshwater. The modifications were considered sufficient as the microorganisms remain active till the end of the test. The results suggested that the biodegradation process was slower in sea water than in freshwater.

Resumo: Com a finalidade de avaliar a biodegradabilidade de quatro tensoativos aninicos (ASSL, OSS, n-OBSS, TPBSS) em gua do mar, foram realizados testes, de 19 dias, seguindo o mtodo exigido pelo Ministrio da Sade para a aprovao de produtos comerciais. Esse mtodo sofreu modificaes para que pudesse ser realizado em gua do mar uma vez que foi originalmente descrito para gua doce. Essas. modificaes foram consideradas satisfatrias uma vez que o inculo manteve-se ativo at o final do teste. Com base nos resultados dos testes, h evidncias de que o processo de biodegradao ocorre mais lentamente em gua do mar do que em gua doce. Descriptors: Anionic Surfactants, Biodegradability, LAS, SOS, n-SOBS, STPBS. Descritores: Tensoativos Aninicos, Biodegradabilidade, ASSL, OSS, n-OBSS, TPBSS.

. .

Introduo
Tensoativos ou surfactantes so substncias qumicas sintticas largamente utilizadas na produo de detergentes, produtos de limpeza e cosmticos. So utilizados tambm para a produo de pesticidas, herbicidas, tintas, plsticos e nas indstrias txteis, de minerao e de alimentos (Lewis, 1991). Devido ao seu uso difundido, os surfactantes so freqentemente encontrados em
Contr. n 820 do Inst. oceanogr. da Usp.

efluentes municipais, bem como nos corpos hdricos receptores, sejam esses dulccolas ou marinhos (Lewis, 1992). Os surfactantes do tipo aninico so os mais utilizados (Ramade, 1987; Lewis, 1990; Augier, 1991) podendo representar at 75% do consumo total (Huston, 1973). Por isso, esta classe de surfactantes representa a forma mais comum de poluio por detergentes (Abel, 1974). O primeiro pas a criar uma lei especfica para detergentes foi a Alemanha. Em 1964, foi

188

Rev. bras. oceanogr., 46(2), 1998

aprovada a "Primeira Lei Alem de Detergentes" que proibia a comercializao de produtos com biodegradabilidade inferior a 80% (Malz, 1973). Outros pases como Estados Unidos, Frana, Reino Unido, Itlia e Japo criaram leis semelhantes. No Brasil, inicialmente, a Portaria 112 de 14 de maio de 1982 do Ministrio da Sade determinava que "as substncias tensoativas aninicas, utilizadas na composio de saneantes de qualquer natureza devem ser biodegradveis" (Brasil, 1982). Porm, critrios precisos que definissem o termo "biodegradveis" no foram estabelecidos. Mais recentemente, o Ministrio da Sade publicou a Portaria 120 de 24 de novembro de 1995 que estabelece "a metodologia a ser adotada para determinao da biodegradabilidade de tensoativos aninicos utilizados na composio de saneantes ou tensoativos puros" (Brasil, 1995). Ainda, segundo esta Portaria, "o produto considerado satisfatrio quando o grau de biodegradao do tensoativo testado for igualou superior ao grau de biodegradao definido para o n-DBSS (n-dodecil benzeno sulfonato de sdio) considerado como referncia de biodegradabilidade para este teste". Apesar de bastante clara e precisa, a Portaria do Ministrio da Sade s prev a realizao de testes para gua doce. Considerando-se que no Brasil, a maioria da populao e das atividades industriais esto localizadas na costa ou prximas a esta (Silva et aI., 1997) e ainda que o tratamento de efluentes urbanos , muitas vezes, ineficiente ou, at mesmo, inexistente, esperado que o ambiente marinho apresente contaminao por surfactantes provenientes destes despejos. Os escassos levantamentos sobre o teor de tensoativos em guas marinhas brasileiras confirmam esta hiptese (CETESB, 1978; Silveira et aI., 1982; Aidar et ai., 1997). Vrios autores estudaram a biodegradao de surfactantes em guas marinhas ou estuarinas, entre eles, Sigoillot & Nguyen (1991, 1992), Terzic et ai. (1992a, 1992b). Entretanto, no Brasil h apenas o trabalho de Pereira et aI. (1981)*. O presente trabalho tem por objetivos realizar testes de biodegradabilidade em gua do mar seguindo o mtodo, originalmente proposto para gua doce, pelo Ministrio da Sade e, ainda, comparar os resultados obtidos nesses testes com outros anteriormente encontrados para gua doce.
(*) Pereira, N.; Malagrino, W. & Tommasi, L. R. Potencial de biodegradao de detergentes aninicos das guas do Esturio de So Vicente (SP). In: REUNIO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA PARA O PROGRESSO DA CINCIA, 33. Salvador, 1981. Resumos. Salvador, SBPC. p. 517.

Material e mtodos
Os testes foram conduzidos na BIOAGRlBiotecnologia Agrcola Ltda., Piracicaba-SP, e tiveram durao de 19 dias (11 a 29 de setembro de 1996). Estes testes foram realizados em duplicata e seguiram o mtodo descrito na Portaria 120 de 24 de novembro de 1995 do Ministrio da Sade (Brasil, 1995), com duas modificaes para a realizao em gua do mar. A primeira modificao foi a utilizao de inculo (microorganismos) de origem marinha ao invs de dulccola, e a segunda modificao foi a utilizao de gua do mar filtrada em membrana Millipore HA com porosiadade de 0,45/lm como gua de diluio ao invs de gua deionizada. A gua do mar foi coletada no dia 08 de setembro de 1996, nas proximidades da Ilha Anchieta, Ubatuba-SP (2331'S 4505' W) e armazenada em gales plsticos. Para a obteno do inculo marinho, foram coletados, no dia 10 de setembro de 1996, seis litros de gua do mar na Praia do Perequ, Guaruj-SP. Essa praia foi escolhida por tratar-se de um local onde esgotos domsticos so lanados ao mar in natura, propiciando o aparecimento de microorganismos. Esse material foi acondicionado em sacos plsticos e mantido sob aerao constante at o incio do teste. Foram testados quatro tensoativos aninicos: n-dodecilbenzeno sulfonato de sdio (n-DBSS), tetrapropileno benzeno sulfonato de sdio (TPBSS), alquilbenzeno. sulfonato de sdio linear (ASSL) da Hoescht do Brasil S.A. (pureza 95 :t 1%) e dodecil sulfato de sdio (DSS) da Bio Rad Laboratories, Richmond, CA, USA (pureza 98 :t 1%). O n-DBSS e o TPBSS representam, respectivamente, o padro de tensoativo biodegradvel e biorresistente definido pelo Ministrio da Sade. O ASSL o surfactante aninico mais comum na formulao de detergentes de uso domstico em todo o mundo (Takada & Ishiwatari, 1987; Gledhill et aI., 1991; Sigoillot & Nguyen, 1992, Larson & Woltering, 1995). O DSS um tensoativo freqentemente utilizado como substncia de referncia em testes de toxicidade. Para cada um dos quatro surfactantes, foram preparadas duas rplicas de 500 ml de soluo a 5 mg/L. Estas solues foram ento inoculadas com os microorganismos e mantidas a 24 :t 1C sob agitao constante de 80 rpm em frascos mbar. Alquotas de 10 ml foram retiradas no 5, 8, 10, 12, 14, 16 e 19 dias de incubao e analisadas espectrofotometricamente seguindo o mtodo das "substncias ativas ao azul de metileno" (SAAM), descrito na Portaria 120 de 24 de novembro do Ministrio da Sade do Brasil. Esse

MASTROTI et ai.: Biodegradabilidade de tensoativos aninicos em gua do mar

189

mtodo baseia-se na formao de um complexo entre o azul de metileno (catinico) e os tensoativos aninicos que aps a extrao com clorofrmio deve ser analizado em espectrofotmetro para quantificao do tensoativo. Para realizao dessas
anlises foi utilizado um espectrofotmetro UV -VIS

HACH DR-2000. Foram ento calculadas as porcentagens de biodegradao atravs da equao: Pt = Ci - Ct x 100%

Ci
onde: Pt = porcentagem de biodegradao no tempo t Ci = concentrao inicial da soluo (mg/L) Ct = concentrao da soluo no tempo t (mg/L)

Resultados
As mdias das porcentagens de biodegradao dos tensoativos foram locadas em um grfico em funo do tempo, em dias (Fig. 1). O ASSL e o DSS apresentaram, ao final do experimento uma taxa de biodegradao prxima quela obtida para o padro de biodegradvel (nDBSS), indicando que essas substncias no so biorresistentes. O TPBSS apresentou um percentual de biodegradao bastante inferior, atigindo ao final do experimento 39,2 %. Os 4 tensoativos apresentaram degradao entre o 16 e o 19 dias (Fig. 1). Essa degradao, realizada pelos microorganismos presentes no inculo marinho, indica que estes mantiveram sua atividade at o final dos testes.

Discusso
A utilizao do inculo marinho para a realizao de testes de biodegradabilidade em gua do mar mostrou-se vivel, uma vez que os microorganismos foram capazes de degradar os tensoativos e mantiveram-se ativos at o final do teste. As taxas de biodegradao encontradas para n-DBSS, ASSL e DSS ao final do experimento foram superiores a encontrada para TPBSS (Fig. 1). Esse resultado era esperado uma vez que tensoativos com cadeia de alcanos ramificada, como o TPBSS, apresentam uma menor biodegradabilidade.

Em dezenas de outros testes realizados com gua doce pela BIOAGRl* em condies semelhantes, o n-DBSS atingiu aproximadamente 90% de biodegradao no 8 dia de incubao. Porm, em gua do mar, nenhum dos surfactantes de cadeia linear (n-DBSS, ASSL e DSS) atingiu 65% de biodegradao mesmo no 19 dia de incubao. A taxa de biodegradao encontrada para n-DBSS ao final do teste em gua do mar (64,5%) foi bastante inferior a normalmente encontrada para gua doce (94 a 99%). Esse resultado, apesar de preliminar, sugere que a biodegradao de tensoativos aninicos ocorre mais lentamente em gua do mar. Essa diferena pode ser resultante de uma menor atividade dos microorganismos marinhos em relao aos dulccolas. Terzic et ai. (1992a) j haviam notado que as bactrias provenientes da camada de gua doce de um esturio apresentam maior eficincia na. degradao de ASSL do que bactrias originrias de uma camada mais salina do mesmo esturio. Segundo Terzic et ai. (1992b), no h critrios confiveis para distinguir bactrias terrestres de bactrias marinhas; entretanto, esses mesmos autores encontraram indcios de que as bactrias que degradam o ASSL so de origem terrestre. Sigoillot & Nguyen (1992) tambm acreditam que haja participao de bactrias de origem terrestre no processo de biodegradao de detergentes. Considerando que as bactrias de origem terrestre realmente exercem um papel relevante na biodegradao dos surfactantes em meio aqutico e que, entre essas, somente as halotolerantes so capazes de sobreviver em gua do mar, uma maior biodegradabilidade pode ser esperada para gua doce em virtude dessa presso seletiva. Os trabalhos realizados at o momento so insuficientes para afirmar que os microorganismos presentes na gua doce so mais eficientes do que os marinhos na biodegradao de surfactantes, ou ainda, que esse processo ocorre mais lentamente em gua do mar. Novos testes devem ser realizados a ttulo de confirmar essa hiptese. Nos pases em desenvolvimento, como o Brasil, grande parte dos efluentes lanados ao mar no passam por tratamentos eficazes. Entretanto, a avaliao de risco ambiental (environmental risk assessment) realizada para muitos produtos de comercializao global feita considerando-se o tratamento de efluentes existente nos pases desenvolvidos. Alm disso, a falta de recursos financeiros para modernizao das estaes de tratamento de esgotos (ETE) demanda uma medida
(*) Dados no publicveis por fora de sigilo industrial.

190

Rev. bras. oceanogr., 46(2), 1998

70 60 ~ 50 ~ ~ .g 40
."

1t

. '" . . '" '" ,- - -'- -"" '" '" .' . . '" fIIIII I
/ I

. .. .. - -~:::-: ..

--

.. .....

..-"

E ~ 30 ."

:c 20
10
/

/,'
~
,,'"

/~ - - - - - -.-:.--: ,.. . ..'

.. -..,."," ".
"."

....

---~.' ....-.-

-' -" -' -".-"

"."

",'*... ",..'"

" ./..8 10 12 tempo(dias)

14 16 19

o O

---. --ASSL

- - - DSS -n-DBSS

- . - - TPBSS

Fig. 1. Curvas da biodegradao dos tensoativos ASSL, SDS, n-DBSS e TPBSS.

de rpida implantao e pouco onerosa. Uma possvel soluo pode ser o aumento no tempo de residncia, em gua doce, dos efluentes em tratamento antes do seu lanamento no ambiente marinho. Essa medida pode ser conseguida atravs da construo de tanques com fluxo em "zig-zag" ou lagoas propiciando uma maior biodegradao dos tensoativos alm de promover uma maior volatilizao e/ou decaimento de outras substncias antes do seu lanamento ao mar. Durante esse perodo de residncia, os efluentes devem ser mantidos sob aerao, uma vez que as bactrias capazes de degradar os surfactantes so estritamente aerbicas (Sigoillot & Nguyen, 1992). No Brasil, todos os produtos que contenham tensoativos aninicos precisam ser avaliados quanto a sua biodegradabilidade, segundo os critrios estabelecidos pelo Ministrio da Sade. Para tanto, vrias empresas foram credenciadas para realizar testes padronizados e emitir laudos com valor legal. Contudo, os critrios estabelecidos pelo Ministrio da Sade carecem de uma reviso. O mtodo das SAAM, indicado na Portaria 120 de 24 de novembro de 1995, foi descrito na dcada de 50 (Longwell & Maniece, 1955). Alm de obsoleto, trata-se de um mtodo simples, porm no especfico, isto , pode so&er interferncias de outras substncias que no sejam surfactantes aninicos. Vrias outras substncias naturais ou artificiais podem apresentar afinidade e complexar-se com o azul de metileno influenciando, deste modo, o resultado do teste (Larson & Woltering, 1995). Alm disso, o mtodo das SAAM considera apenas a biodegradao primria (Q)e ~-oxidao), isto , a degradao parcial da cadeia de alcanos (Fig. 2). Aps essa degradao inicial, as molculas

de surfactante perdem a afinidade pelo azul de metileno e, por isso, no so mais detectadas, porm, as substncias resultantes dessa degradao apresentam toxicidade e, portanto, devem ser consideradas. Para que haja a biodegradao total
(mineralizao) do surfactante, aps a Q) e

~-

oxidao, devem ocorrer ainda, a dessulfonao e a quebra do anel benznico (Fig. 2). Aps todo esse processo, o surfactante degradado em metano e/ou dixido de carbono, minerais e gua, substncias que no apresentam toxicidade. Atualmente, mtodos mais modernos e confiveis esto disponveis como, por exemplo, o mtodo da cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) (Cavalli et aI., 1996) ou o mtodo ISO 9439 (ISO, 1990). Cavalli et aI. (1996) sugerem a utilizao do mtodo da CLAE por ser capaz de determinar a concentrao de subprodutos da biodegradao do surfactante. Atravs desse mtodo possvel acompanhar todo o processo de biodegradao at a mineralizao do produto. Ainda, segundo Larson & Woltering (1995), esse mtodo combina rapidez, sensibilidade e seletividade, sendo ideal para anlises de rotina ou com grande nmero de amostras. A escolha do mtodo das SAAM justificada pelo Ministrio da Sade devido ao baixo custo e fcil realizao dos testes. Entretanto, de pouco valem esses argumentos se o objetivo maior, proteger os recursos naturais, no for plenamente atingido. A utilizao desse mtodo no presente trabalho serviu para mostrar mais uma inconsistncia do mtodo, o que considerado "seguro" para gua doce pode no representar o mesmo nvel de "segurana" para o ambiente marinho.

MASTROTI et aI.: Biodegradabilidade de tensoativos aninicos em gua do mar

191

CHTCHrCH$-CH,-CH,-cHrcHrCH,-cH'-CH' S03Na ro-oxidao

~O CHrCHrCH2-CH-CHrCHrCH2-CHrCH2-CHrCH

$
$'OH

I ~-oxidao

'OH

~O
CH3-CH2- CHr CH- CH2- CH

dessulfonao benznico

e oxidao do anel

I
BIOMASSA

(adaptado de Cavalli el ai.. 1996)

Fig. 2. Esquema simplificado da biodegradao do ASSL.

Idealmente, devemos desenvolver mtodos e critrios especficos para as condies brasileiras. Quando isso no for possvel, os mtodos e critrios adotados por agncias ambientais de outros pases devem, imprescindivelmente, sofrer cuidadosas adaptaes. Considerando que a biodegradao o processo que determina o destino e a distribuio de surfactantes e tantas outras substncias no ambiente aqutico (Terzic et aI., 1992a), mais ateno deve ser dada a esse processo, tanto por parte da classe cientfica, como por parte dos legisladores.

Gelso Vazzoler" pela reviso das referncias bibliogrficas, aos Assessores pelas valiosas contribuies e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) pela bolsa de mestrado concedida a Ricardo Rodrigues Mastroti.

Referncias bibliogrficas
Abel, P. D. 1974. Toxicity of synthetic detergents to fish and aquatic invertebrates. 1. Fish Biol., 6(3):279-298. Aidar, E.; Sigaud-Kutner, T. C. S.; Nishihara, L.; Schinke, K. P.; Braga, M. C. C.; Farah, R. E. & Kutner, M. B. B. 1997. Marine phytoplankton assays: effects of detergents. Mar. environ. Res., 43(1-2):55 - 68. Augier, H. 1991. Impact des dtergents sur l'environnement marin. Revue int. Ocanogr. Md., (101/104):236-243.

Agradecimentos
Os autores agradecem Profa. Dra. Elizabeth Aidar e Profa. Dra. Elisabete S. Braga G. Saraiva pelas crticas e sugestes, BIOAGRI Biotecnologia Agrcola Ltda pelo apoio dado a esse trabalho, ao Dr. Luciano Cavalli do Regulatory and Environmental Affairs Departament de Milo pelas sugestes, aos funcionrios da Biblioteca "Prof. Dr.

192

Rev. bras. oceanogr., 46(2), 1998

Brasil. Ministrio da Sade. 1982. Portaria, n 112. Referente substncias tensoativas aninicas, utilizadas na composio de saneantes de qualquer natureza, devem ser biodegradveis. Braslia, Dirio Oficial da Repblica Federativa do Brasil. p.l0904, Seo 1, pU. Brasil. Ministrio da Sade. 1995. Portaria, n 120. Estabelece o "Mtodo para determinao da biodegradabilidade de tensoativos aninicos", com validade em todo o Territrio Nacional. Braslia, Dirio Oficial da Repblica Federativa do Brasil. p.19323, Seo 1, pU. Cavalli, L.; Cassani, G. & Lazzarin, M. 1996. Biodegradation of linear alkylbenzene sulphonate (LAS) and alcohol ethoxylate (AE). Tenside Surfactants Deterg., 33(2):158- 165. CETESB. Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental. 1978. Poluio das guas no Esturio e Baa de Santos. Relatrio Tcnico. So Paulo, CETESB. 2 v. Gledhill, W. E.; Saeger, V. W. & Trehy, M. L. 1991. An aquatic environmental safety assessment of linear alkylbenzene. Environ. Toxicol. Chem., 10(2):169-178. Huston, E. J. 1973. Discussion: Synthetic detergents constituints and eutrophication. In: Jenkins, S. H. ed. Water quality: management and pollution control problems. Oxford, Pergamon Press. p. 285-288. ISO. International Organization for Standardization. 1990. Water quality: Evaluation in an aqueous medium of the ultimate aerobic biodegradability of organic compounds - Methods by analysis of released carbon dioxide. London, ISO. 176p. Larson, R. J. & Woltering, D. M. 1995. Linear alkylbenzene sulfonate (LAS). In: Rand, G. M. ed. FundamentaIs of aquatic toxicology: effects, environmental fate and risk assessment. Washington, Taylor & Francis. p. 859-882. Lewis, M. A. 1990. Chronic toxicities of surfactants and detergent builders to algae: a review and risk assessment. Ecotoxicol. Environ. Saf., 20(2): 123140.

Lewis, M. A. 1991. Chronic and sublethal toxicities of surfactants to aquatic animaIs: a review and risk assessment. Water. Res., 25(1):101-113. Lewis, M. A. 1992. Review paper: The effects of mixtures and other environmental modifying factors on the toxicities of surfactants to &eshwater and marine life. Water. Res., 26(8):1013-1023. Longwell, J. & Maniece, W. D. 1955. Determination of anionic detergents in sewage, sewage eflluents, andriverwater. Analyst, 80:167-171. Malz, F. 1973. Synthetic detergents and water: The solution of the problem in Germany. In: Jenkins, S. H. ed. Water quality: management and pollution control problems. Oxford, Pergamon Press. p. 293-306. Ramade, F. 1987. Ecotoxicology. 2nded. New York, John Wiley. 262p. Sigoillot, J. C. & Nguyen, M. H. 1991. Metabolisme des souches bacteriennes impliquees dans Ia degradation des tensio-actifs en milieu marin. Revue int. Ocenogr. Md., (1011104):265-269. Sigoillot, J. C. & Nguyen, M. H. 1992. Complete oxidation of linear alkylbenzene sulfonate by bacterial communities selected &om coastal seawater. Appl. environ. Microbiol., 58(4):13081312. Silva, E. M.; Peso-Aguiar, M. C.; Navarro, M. F. T. & Chastinet, C. B. A. 1997. Impact ofpetroleum pollution on aquatic coastal ecosystems in Brazil. Environ. Toxicol. Chem., 16:100-111. Silveira, M. A. V.; Pereira, N. & Tommasi, L. R. 1982. Resultados preliminares sobre os teores de detergentes aninicos na Baa e Esturio de Santos. Bolm Inst. oceanogr., S Paulo, 31(2):9599. Takada, H. & Ishiwatari, R. 1987. Linear alkylbenzenes in urban riverine environments in Tokyo: distribution, source, and behavior. Environ. Sci. Technol., 21: 875-883.

MASTROTI et ai.: Biodegradabilidade de tensoativos aninicos em gua do mar

193

Terzic, S.; Hrsak, D. & Ahel, M. 1992a. Enrichment and isolation of linear alkylbenzenesulphonate (LAS) degrading bacteria from estuarine and coastal waters. Mar. Pollut. BulI., 24(4):199-204. Terzic, S.; Hrasak, D. & Ahel, M. 1992b. Primary biodegradation kinetics of linear alkylbenzene sulphonates in estuarine waters. Water. Res., 26(5):585-591.

(Manuscrito recebido 19 maro 1998; revisado 11 novembro 1998; aceito 10 dezembro 1998)