Practica N 1 LA BIOSEGURIDAD Y EL LABORATORIO CLNICO I.

DEFINICIN

Es el conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la seguridad del personal que trabaja en el Laboratorio frente a diferentes riesgos producidos ya sea por agentes fsicos, qumicos biolgicos y mecnicos.

II.

INTRODUCCIN.

La preocupacin por eliminar los riesgos y proteger al personal docente, administrativo y estudiantes, ha llevado a que las condiciones de trabajo recaen sobre todos y cada uno de los usuarios de los laboratorios. La bioseguridad es una doctrina de comportamiento encaminada a lograr actitudes y conductas que disminuyen el riesgo del trabajador en cuanto a su salud, de adquirir infecciones en el medio laboral. El conocimiento y la aplicacin adecuada de estas normas como la utilizacin de bata, guantes, tapabocas, entre otros; As como la importancia de estas normas antes, durante y despus de cada prctica es un deber de cada estudiante en el laboratorio donde se este desenvolviendo. Estas normas son la base de un buen control de calidad del producto o trabajo que se este llevando a cabo. Desde el siglo XIX, despus de la construccin del primer laboratorio; se encontr que todos los trabajadores estaban expuestos a una serie de riesgos que atentaban contra su integridad. Por este motivo es que los laboratorios han sido construidos y modificados para que los riesgos sean mnimos (campanas extractoras de gases, alarma para gas, extintores, lavaojos o duchas, entre otros), se deben tener siempre en cuenta una serie de precauciones y seguir unas normas de seguridad bsicas como: utilizar una bata de laboratorio que deber estar siempre abrochada, evitar el contacto con fuentes de electricidad y de calor, etc. En resumen estas normas estn destinadas a mantener el control de los factores de riesgo, tanto qumicos, fsicos, orgnicos, psicolgicos, ambientales, biolgicos, ergonmicos y de seguridad, los cuales atentan contra la salud de las personas que trabajan en el laboratorio. Muchos de los accidentes que ocurren en un laboratorio, son ocasionados principalmente por dos razones: la falta de conocimiento acerca de la labor que se realiza dentro de l y a la negligencia para seguir las normas mnimas de seguridad. Es importante tener en cuenta que las normas no son la respuesta nica en los laboratorios en donde se realiza actividades de investigacin, pero es muy importante que esas normas sean aplicadas rigurosamente en el recinto donde se realiza la experiencia. III. MARCO TEORICO Segn el manual de microbiologa medica de Jawets Ernest. Melnick Josphl. Todos los establecimientos laborales, incluyendo los laboratorios de anlisis, investigacin y dems,

necesitan tener una serie de normas para llevar un desempeo seguro y garantizar resultados exitosos. De acuerdo con el procedimiento a realizar, se determina el uso de elementos de proteccin especficos tales como: Uso de mascarilla y protectores oculares: En los procedimientos que se generen gotas de sangre o lquidos corporales. Con esta medida se previene la exposicin de mucosas de boca, nariz y ojos, evitando que se reciban inculos infectados. Uso de mascarilla buconasal: Protege de eventuales contaminaciones con saliva, sangre o vmito, que pudieran salir del paciente y caer en la cavidad oral y nasal del Trabajador. Al mismo tiempo, la mascarilla impide que gotitas de saliva o secreciones nasales del personal de salud contaminen al paciente, debe usarse en los pacientes en los cuales se halla definido un plan de aislamiento de gotas. Uso de braceras: para evitar el contacto del antebrazo y brazo con sangre o lquidos Corporales en procedimientos invasivos como partos normales, cesrea, citologa y odontologa, entre otros. Uso de guantes: Reducen el riesgo de contaminacin por fluidos en las manos, pero no evitan las cortaduras ni el pinchazo. Es importante anotar que el empleo de guantes tiene por objeto proteger y no sustituir las prcticas apropiadas de control de Infecciones, en particular el lavado correcto de las manos. Los guantes deben ser de ltex bien ceidos para facilitar la ejecucin de los procedimientos. Si se rompen deben ser retirados, luego proceder al lavado de las manos y al cambio inmediato de estos. Si el procedimiento a realizar es invasivo de alta exposicin, se debe utilizar doble guante. El guante se dise para impedir la transmisin de microorganismos por parte del personal de salud a travs de las manos; por tal motivo cuando se tengan los guantes puestos deben conservarse las normas de asepsia y antisepsia. Para personal de oficios varios y el encargado de manejo de residuos, los guantes deben ser ms resistentes, tipo industrial. Delantal de caucho: Es un protector para el cuerpo; evita la posibilidad de Contaminacin por la salida explosiva o a presin de sangre o lquidos corporales; por ejemplo, en drenajes de abscesos, atencin de heridas, partos, puncin de cavidades y cirugas, entre otros. Polainas: Se utilizan para trabajadores de la salud que estn expuestos a riesgos de salpicaduras y derrames por lquidos o fluidos corporales. Gorro: Se usa con el fin de evitar en el trabajador de la salud el contacto por salpicaduras por material contaminado y adems evita la contaminacin del paciente con los cabellos del trabajador de salud. A. MANTENIMIENTO DE ELEMENTOS DE PROTECCIN PERSONAL

Los elementos de proteccin personal se clasifican segn el rea del cuerpo que se quiere aislar. Este tipo de proteccin puede ser: ocular, buconasal y facial, de extremidades superiores y cuerpo. 1. Proteccin ocular. Monogafas de seguridad. Usuarios: Cirujanos, Obstetras, Mdicos, Instrumentadoras quirrgicas, personal de Enfermera que realice procedimientos con factor de Riesgo Biolgico, personal de oficios varios, lavandera, laboratorio clnico y de patologa, personal en entrenamiento como mdicos residentes, internos y estudiantes. Caractersticas de las monogafas: Poseer Ventilacin indirecta mediante rejillas laterales, lo que las hace antiempaantes. Permitir el uso de anteojos prescritos. Absorber los rayos ultravioleta. Tener lentes resistentes al impacto. Mantenimiento: Lavar los protectores oculares con agua y jabn de tocador. Utilizar un pauelo facial para secador; no emplear otro tipo de tela o material abrasivo, tampoco frotarlas con las manos. Evitar dejar caer las monogafas o colocarlas con los lentes hacia abajo porque se pueden rayar fcilmente. En lo posible deben ser guardadas en el estuche respectivo. Almacenarla en un lugar seguro y en ptimas condiciones de aseo. No utilice soluciones custicas para su lavado o desgerminacin. No esterilice las monogafas en autoclave. 2. Proteccin buco nasal y facial Mascarilla Usuarios: Todo el personal expuesto a factores de riesgo biolgico. Caractersticas de la mascarilla:

 Es un elemento de proteccin personal y desechable por turno. Protege desde el puente nasal hasta el inicio del cuello; especial para cubrir la barba. Debe mantenerse alejada de lquidos inflamables y cidos porque el roce con estas sustancias o la humedad, puede deteriorar la mascarilla. La mascarilla especfica para manejo de paciente con diagnstico de TBC debe Tener las siguientes caractersticas: Filtro tipo Referencia 1860 Resistente a los fluidos. 3. Proteccin de cuerpo y extremidades superiores: Delantales Usuarios: Cirujanos, Personal mdico, de enfermera e instrumentadoras quirrgicos que realicen procedimientos invasivos con el riesgo de contacto con lquidos corporales. Igualmente los odontlogos, personal de laboratorio, lavandera y oficios varios. Las caractersticas del delantal varan segn el oficio a realizar. Caractersticas del delantal: Ser de tela impermeable o material similar para el delantal quirrgico. Para oficios varios y lavandera se utiliza un delantal industrial en el mismo material pero de un calibre ms resistente. Es de bajo peso. Por su impermeabilidad, puede ser usado por debajo de la ropa quirrgica, para evitar el contacto del cuerpo con fluidos corporales. No es desechable. Mantenimiento: Envelo a la lavandera en bolsa roja. En el proceso de desinfeccin, utilice solucin de hipoclorito de sodio, luego lvelo con abundante agua para evitar que el hipoclorito residual debilite el material. Seque el delantal al medio ambiente, evitando que presente quiebres. Dblelo con cuidado y envelo a los servicios en el menor tiempo posible

4. Braceras. Usuarios: Personal mdico de Urgencias, de enfermera e instrumentadores quirrgicos que realicen procedimientos invasivos con riesgo de contacto con lquidos corporales. Caractersticas de las braceras: Es de bajo peso. No es desechable. Ser de tela impermeable. Mantenimiento: Envelo a la lavandera en bolsa roja. En el proceso de desinfeccin, utilice solucin de hipoclorito de sodio, luego lvelo con abundante agua para evitar que el hipoclorito residual debilite el material. Secarlas al medio ambiente, evitando que presente quiebres. Dblelo con cuidado y envelo a los servicios en el menor tiempo posible. 5. Guantes Industriales Usuarios: Personal de aseo. Caractersticas de los guantes Pendiente especificacin: Amarillo zonas administrativas, Negro para zonas asistenciales Mantenimiento: Lavar con agua y jabn. Los de reas contaminadas se sumergen en hipoclorito a 5000 ppm por 20 minutos. Enjuagar y secar al aire libre. Guantes Industriales Media Caa B. NORMAS GENERALES BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLNICO. Del Personal.

 El personal que trabaje en el laboratorio debe cumplir a cabalidad las normas de bioseguridad. Al ingresar al laboratorio se debe tener en cuenta el debido porte de la bata manga larga, abotonada y limpia, as mismo una vez se ingrese se debe colocar los abrigos libros y dems objetos, en sitios adecuados para evitar un posible accidente y NUNCA sobre los bancos o mesones. Lvese las manos a la hora de entrar y al trmino de cada sesin de trabajo, secndolos con toallas de papel e igualmente si se tiene contacto con material patgeno. El personal con cabello largo deber recogerlo para trabajar dentro del laboratorio. As como usar todos los implementos necesarios para la proteccin segn el nivel de riesgo biolgico. Durante la prctica no se deben guardar ni consumir alimentos y bebidas dentro del laboratorio, maquillarse o manipular lentes de contacto. No es permitido fumar en el sitio de trabajo o laboratorio. Se debe colocar un calzado adecuado para las practicas en el laboratorio, as como mantener las uas cortas, limpias y sin esmalte. Todo personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto con materiales potencialmente infecciosos sin la debida proteccin. Se usaran mascaras faciales si existe el riesgo de salpicaduras o aerosoles de sangre u otros lquidos corporales. Use delantal plstico en aquellos procedimientos en que se esperen salpicaduras, aerosoles o derrames importantes de sangre u otros lquidos orgnicos. Utilice en forma sistemtica guantes plsticos o de ltex en procedimientos que conlleven manipulacin de elementos biolgicos y cuando maneje instrumental o equipo contaminado en la atencin de pacientes. Hacer lavado previo antes de quitrselos y al terminar el procedimiento. Hable en tono bajo y evite al mximo el movimiento dentro del laboratorio. Abstngase de tocar con las manos enguantadas alguna parte de su cuerpo y de manipular objetos diferentes a los requeridos durante el procedimiento. Mantenga sus elementos de proteccin personal en ptimas condiciones de aseo, en un lugar seguro y de fcil acceso.

 Las personas sometidos a tratamiento con inmunosupresores no deben trabajar en reas de alto riesgo biolgico. El personal se abstendr de usar brazaletes o collares largos antes de comenzar a trabajar ya que pueden contaminarse fcilmente con muestras clnicas o cultivos. Del ambiente. El acceso al laboratorio estar limitado solo al personal autorizado. Toda rea debe estar marcada con la respectiva seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin. Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas durante la sesin de laboratorio para evitar la contaminacin por corrientes de aire. Al inicio y trmino de una prctica se debe limpiar la superficie de trabajo con una solucin desinfectante. El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado, durante el trabajo o el trmino del mismo. No guardar alimentos en las neveras ni en los equipos de refrigeracin de sustancias contaminantes o qumicos. Disponga el material patgeno en las bolsas de color rojo, rotulndolas con el smbolo de riesgo biolgico. Paredes y pisos deben ser lisos para facilitar la limpieza con soluciones desinfectantes como Pirosan, Cresol, etc. No debe encerarse el piso o barrer en seco. En todas las puertas de laboratorio debe estar colocada las seal de RIESGO BIOLOGICO. Se debe contar con cmaras de Bioseguridad, lmparas de luz ultravioleta y cualquier otro equipo o instalacin que sea necesario para proteger al personal. Los laboratorios deben contar con servicios de agua, luz y desague, los mismos que deben funcionar en forma satisfactoria. Del manejo de la muestra. Emplee los equipos segn las instrucciones o los procedimientos operativos estandarizados, al igual que emplee los protocolos correspondientes a la practica. Maneje todo paciente como potencialmente infectado. Las normas universales deben aplicarse con todos los pacientes independientemente del diagnstico, por lo

que se hace innecesario la clasificacin especfica de sangre y otros lquidos corporales como infectada o no infectada. Evite la atencin directa de pacientes si usted presenta lesiones exudativas o dermatitis serosas, hasta tanto stas hayan desaparecido. Si presenta alguna herida, por pequea que sea, cbrala con esparadrapo o curitas. Mantenga actualizado su esquema de vacunacin contra Hepatitis B. Maneje con estricta precaucin los elementos cortopunzantes y deschelos en los guardianes. Los guardianes debern estar firmemente sujetos de tal manera que pueda desechar las agujas halando la jeringa para que caigan entre el recipiente, sin necesidad de utilizar para nada la otra mano. Cuando no sea posible la recomendacin anterior, evite desenfundar manualmente la aguja de la jeringa. Deseche completo. No cambie elementos cortopunzantes de un recipiente a otro. Abstngase de doblar o partir manualmente la hoja de bistur, cuchillas, agujas o cualquier otro material cortopunzante. Evite reutilizar el material contaminado como agujas, jeringas y hojas de bistur. Realice desinfeccin y limpieza a las superficies, elementos, equipos de trabajo, al final de cada procedimiento y al finalizar la jornada. En caso de derrame o contaminacin accidental de sangre u otros lquidos corporales sobre superficies de trabajo. Cubra con papel u otro material absorbente; luego vierta hipoclorito de sodio a 5000 partes por milln sobre el mismo y sobre la superficie circundante, dejando actuar durante 30 minutos; despus limpie nuevamente la superficie con desinfectante a la misma concentracin y realice limpieza con agua y jabn. El personal encargado de realizar dicho procedimiento debe utilizar guantes, mascarilla y bata. En caso de ruptura del material de vidrio contaminado con sangre u otro lquido corporal los vidrios se deben recoger con escoba y recogedor; nunca con las manos. Los recipientes para transporte de muestras debe ser de material irrompible y cierre hermtico. Debe tener preferiblemente el tapn de rosca. Manipule, transporte y enve las muestras disponindolas en recipientes seguros, con tapa y debidamente rotuladas, empleando gradillas limpias para su transporte. Las gradillas a su vez se transportarn en recipientes hermticos de plstico o acrlicos que detengan fugas o derrames accidentales. Adems deben ser fcilmente lavables.

 En caso de contaminacin externa accidental del recipiente, ste debe lavarse con hipoclorito de sodio a 1000 partes por milln y secarse. Use pipetas automticas para evitar cualquier riesgo de contaminacin oral. El pipetear lquidos con la boca es una prctica inadecuada y altamente riesgosa. Las cnulas, tubos contaminados y dems elementos de trabajo deben someterse a procesos de desinfeccin, desgerminacin y esterilizacin en autoclave; igual tratamiento deber darse a las cnulas, tubos y dems elementos de trabajo. A los tubos de ensayo con sangre en cogulos, se les debe colocar hipoclorito de sodio a 5000 ppm. durante 30 minutos, taparlos y una vez desechado este contenido, proceder a la desgerminacin y esterilizacin mediante calor hmedo o seco para su posterior reutilizacin. El material contaminado que deba ser desechado fuera del laboratorio, debe introducirse en recipientes resistentes, que se cerrarn antes de sacarlos del laboratorio, estos a su vez se depositaran en bolsa Roja rotulada como: Riesgo Biolgico material contaminado a incinerar, y entregarla al personal del Aseo para su disposicin final. Los procedimientos que entraan manipulacin de cultivos de clulas infectadas, manejo de material con elevadas concentraciones de bacterias y actividades que generen aerosoles o gotitas como en los procedimientos de homogeneizacin y mezcla rigurosa, deben llevarse a cabo utilizando cabinas de seguridad biolgica. No se colocar ningn material en la boca ni se pasar la lengua por las etiquetas. Nunca se debe mezclar material infeccioso haciendo burbujear aire a traves de la pipeta ni soplar material infeccioso fuera de las pipetas. Desarrollar el hbito de mantener las manos lejos de la boca, nariz, ojos y cara. Esto puede prevenir la autoinoculacin. Antes de centrifugar inspeccionar los tubos que no tengan rajaduras. CLASIFICACION DE LOS MATERIALES DE LABORATORIO. Materiales Crticos: Son los que se introducen en los tejidos estriles o ingresan al sistema vascular. Deben esterilizarce para evitar graves infecciones. Materiales Semcicrtios: Son los que estarn en contacto con membranas, mucosas o piel. Requieren alto nivel de desinfeccin mediante germicidas qumicos. Materiales no crticos: Son los que estan en contacto con la piel del paciente. Requieren el uso de desinfectantes de bajo nivel, tales como detergentes, hipoclorito y los amoniois cuaternarios.

SEGURIDAD BIOLOGICA. Las muestras de sangre y otros liquidos corporales se deben recolectar, transportar, manejar y procesar con precausiones estrictas. Guantes, batas y proteccin para la cara. El lavado consistente y completo de las manos es un componente esencial de control de infeccin. La centrifugacin de muestras biolgicas produce aerosoles finamente dispersados que son una fuente de infeccin de alta riesgo. Lo ideal es que las muestras permanezcan tapadas durante la centrifugacin. DERRAMES. Cualquier otro derrame de sangre, lquido corporal u otro material potencialmente infeccioso debe ser limpiado y desinfectar de inmediato el rea o equipo, la limpieza incluye: Usar equipos de proteccin apropiada. Emplear dispositivos mecnicos para recoger vidrio u otros objetos ahusados. Absorber el derrame con toallas de papel apsitos de gasa o pauelos de papel. Desinfectar el sitio de derrame con una solucin apropiada o balnqueador al 10% con un tiempo de contacto apropiado. Enjuagar el sitio de derrame con agua. Desechar los materiales en recipientes apropiadaos para materiales biopeligrosos CUESTIONARIO 1. A QUE SE DENOMINA CLASIFICADOS. RESIDUOS BIOPATOGNICOS Y COMO ESTN

Son aquellos desechos o elementos materiales en estado slido, lquido, semilquido o gaseoso que presenta caractersticas de toxicidad y/o actividad biolgica que pueda llegar afectar directa o indirectamente la salud de los seres vivos y causar algn tipo de contaminacin del suelo, el agua y la atmsfera. Son Residuos con actividad biolgica, provenientes de reas de internacin, emergencias, quirfanos, partos, traumatologa, laboratorio clnico, Hemoterapia, consultorios, anatoma patolgica, morgue, odontologa. Incluye sondas, tubuladuras, tubos de drenaje y aspiracin, recipientes para drenajes, filtros de hemodilisis, guantes, campos descartables, catteres para accesos vasculares, paales, guas y sondas para alimentacin enteral, apsitos o gasas con sangre o pus. Los residuos se separan por sus caractersticas, en el lugar donde se producen, estos residuos biopatognicos se colocarn en bolsas rojas. Clasificacin de los Residuos Biopatognicos A. Segn su procedencia pueden ser agrupados en:

 Residuos de tipo clnico Residuos de tipo radioactivo Residuos de tipo citostatico 1. Los residuos de tipo clnico son aquellos productos biolgicos que proceden de los propios pacientes o de objetos o materiales con los cuales puedan haber estado en contacto. Pueden ser agrupados en: Residuos clnicos infecciosos: al contener microorganismos son capaces de originar una enfermedad infecciosa. - Residuos clnicos no infecciosos: son los que no estn incluidos en el grupo anterior y en general el resto de los residuos producidos en el centro asistencial. Las condiciones que deben cumplirse para que un residuo infeccioso cause un problema sanitario real son: - Que se encuentre presente un organismo patgeno. - Que dicho patgeno sea suficientemente virulento. - Que se encuentre en cantidad suficiente. - Que alcance una adecuada va de entrada al organismo receptor. - Que el organismo receptor sea en ese momento susceptible a contraer la infeccin trasmitida por el agente patgeno. 2. Los residuos de tipo radiactivo son aquellos materiales o sustancias que conteniendo productos radiactivos o siendo radiactivos ellos mismos, son susceptibles de pasar al medio ambiente. 3. Los residuos de tipo citostatico estan conformados por los residuos procedentes de farmacos que inhiben la division o el crecimiento celular. B. Segn su estado fsico: en que se encuentren en dos grandes grupos: Residuos lquidos. Residuos slidos. 1. Los residuos lquidos a su vez pueden ser: - De vertido permitido a la red de alcantarillado: cumpliendo todas las condiciones y limitaciones legales en materia de vertido de residuos lquidos para proteger los recursos hdricos. - De vertido prohibido a la red: abarca los residuos radiactivos y los citostticos. - Con tratamiento previo a su vertido a la red: los aceites y grasas, las mezclas explosivas y los materiales coloreados. Toxicos o peligrosos: en funcin de determinados parmetros como su punto de inflamacin. ph, corrosividad, capacidad de daar tejidos humanos, su capacidad de reaccionar y su contenido en productos cancergenos, mutagnicos y teratogenicos. -

2. Los residuos slidos pueden ser clasificados en: Residuos slidos de tipo I / Residuos asimilables a urbanos: Comprende los residuos no especficos de la actividad asistencial como los de cocina. los derivados de la actividad administrativa. envases vacios de medicamentos. todo aquel material sometido a algn proceso de descontaminacin. etc. Residuos slidos de tipo II / Residuos clnicos (o biolgicos): Son todos aquellos que se producen como resultado de la actividad clnica (realizacin de anlisis, curas, intervenciones quirrgicas) y que no estn incluidos en la categora de residuos infecciosos. Comprende los textiles manchados con fluidos corporales, vendajes, algodn usado, apsitos, equipos de goteo, bolsas vacas de orina. sondas. Catteres, equipos de dilisis, material de un solo uso para la obtencin de lquidos corporales, bolsas de ostomia, etc. Residuos slidos de tipo III / Residuos especiales (patolgicos y/o infecciosos): engloba a aquellos residuos con capacidad potencial de producir contagio y toxicidad como el caso de los residuos generados en los laboratorios de microbiologa e inmunologa (cultivos. restos de animales), residuos de quirfanos y paritorios. residuos del laboratorio de anatoma patolgica, los citostaticos procedentes de los servicios de hematologa y oncologa. y objetos punzantes y cortantes contaminados en general.

2. DEFINIR: LIMPIEZA, DESINFECCIN, ANTISPTICOS, ESTERILIZANTE. Limpieza: Procedimiento fsico-qumico encaminado a eliminar el material ajeno al objetivo que se pretende limpiar. Desinfeccin: La destruccin, inactivacin o remocin de aquellos microorganismos que pueden causar infeccin u ocasionar otros efectos indeseables; la desinfeccin no implica necesariamente esterilizacin. Sustancia qumica que destruye los microorganismos y que se aplica sobre material inerte sin deterioro. No necesariamente elimina las esporas bacterianas. Antispticos: Sustancia que impide el crecimiento o la accin de los microorganismos, ya sea destruyndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se aplica sobre superficies corporales. Sustancia qumica de aplicacin tpica sobre tejidos que destruye o inhibe los microorganismos sin afectar a los tejidos sobre los que se aplica. Esterilizante: Sustancia que destruye toda forma de vida microbiana. Un objeto estril (en sentido microbiolgico) est libre de microorganismos vivos. Proceso fsico-qumico dirigido a destruir toda la flora microbiana. En el hospital, se aplica a los microorganismo que pueden existir en objetos inanimados. El calor hmedo (autoclave a vapor) y el xido de etilo (gas) son los principales sistemas de esterilizacin. Algunos compuestos qumicos considerados como desinfectantes pueden utilizarse como esterilizantes si se usan adecuadamente.

3. SEGN LA OMS CUALES MICROORGANISMOS.

SON

LOS

GRUPOS

DE

RIESGO

DE

LOS

PRACTICA N 2

ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA AMILASA.

I.

INTRODUCCIN .

El almidn, homopolmero de la glucosa es el polisacrido de plantas ms empleado en la industria alimentara y textil; presenta 2 tipos de estructuras, la amilasa conformada slo por enlaces alfa 1-4 y la amilopectina que adems tiene enlaces 1-6, responsables de las ramificaciones de esta ltima.

Las enzimas encargadas de la hidrlisis del almidn son las amilasas las cuales tiene actividades muy especiales:

-Alfa amilasa: Endoglucosidasas que rompen los enlaces alfa 1-4, pero como mnimo alejados en 3 residuos de glucosa del extremo no reductor y / o de la glucosa que forma el enlace alfa 16. Tienen diferentes usos: en la industria harinera, en la produccin del alcohol, en la industria cervecera y en la panadera, para aumentar la produccin de azcares fermentables. Son producidas principalmente por clulas vegetales, bacterias y hongos; generalmente requieren calcio para su actividad. El producto final de su actividad sobre el alimidn es : 40% maltosa, 25 % maltotriosa, 30 % de dextrinas lmites que tienen entre 6 y 9 unidades de glucosa y aproxidamadamente un 5 % de cadena lineales de entre 4 y 9 glucosas. -Beta amilasas: Son exoglucosidasas alfa 1-4 que liberan unidades de maltosa desde el extremo no reductor. Estn distribuidas en vegetales pero una buena fuente son las bacteras, sobre todo las de gnero Bacillus. Producen hasta un 94 % de maltosa a partir de almidn en presencia de una enzima desramificante. -Aminoglucosidasas o glucoamilasas: So exoglucosidasas alfa 1-4 que libera unidades de glucosa a partir del extremo no reductor, es exclusivamente de origen microbiano ( hongos del gnero Aspergillus) Tienen tambin actividad alfa 1-6.

-Isoamilasas o isomaltasas: Rompen enlaces alfa 1-6; se encuentran en clulas animales y vegetales. A este grupo pertenecen las pululanasas, que se llaman as porque pueden hidrolizar al pululano (poli alfa 1-6 maltatriosa), son producidas por Aerobacter aergenes y tiene mucha utilidad en la industria.

En la presente prctica vamos a utilizar a una alfa amilasa salival, por la facilidad de su obtencin; para estudiar la cintica enzimtica. Esta enzima tiene un pH y temperaturas ptimas de accin de 6,9 y 37 C respectivamente.

II.

OBJETIVO.

Estudiar la cintica enzimtica utilizando como modelo a la amilasa salival. Observar la influencia del ph y temperatura en la actividad enzimtica.

III.

PARTE EXPERIMENTAL.

3.1.

MATERIALES Y REACTIVOS.

Matraz. Tubos de ensayo. Pipetas. Vasos de precipitado. Gasa.

Termmetro. Bao Mara. Cocinilla.

Muestra biolgica.

Almidn. Saliva

Reactivos.

Solucin de lugol. HCl. Solucin de bicarbonato de calcio. Agua destilada. Ferricianuro de potasio.

3.2.

PROCEDIMIENTO

Obtencin de la amilasa:

Elegir un estudiante que no este resfriado, luego enjuagarse la boca con agua potable y seguidamente ingerir aproximadamente 20 ml de agua destilada y retenerla por un tiempo de 3 a 4 min.

Vaciarla el agua ingerida en un matraz de 50 ml, usar inmediatamente, caso contrario mantener la muestra en bao de hielo.

Medida de la actividad a diferentes concentraciones de almidn:

Obtencin e identificacin del almidn:

Hacer calentar 30 ml de agua destilada en un matraz, luego un poco de almidn de papa (rallar una papa y extraer con una gasa por expresin) a los minutos se obeserva la formacin de un engrudo diluido.

Enfriar la solucin, luego tomar 5 ml de contenido y colocar en 2 tubos de ensayo .

Al primero agregar solucin de yodo y lugol.

Al segundo agregar reactivo Fehling y calentar.

Observar y esquematizar los resultados.

3.2.3. Actividad de la amilasa sobre el almidn e influencia del Ph.

A la solucin sobrante de almidn agregar un poco de solucin de amilasa (0.5 ml ) separar en dos porciones, al primero llevar a pH bsico 8 con buffer ( bicarbonato calcico) y el segundo a un pH cido con HCL. Ambas soluciones incubar en bao Mara a 37 C por un tiempo de 5 min, agitando su contenido cada cierto tiempo.

En ambos soluciones tomar en un tubo de ensayo, cada 3 min. 2 ml del contenido, enfriar este en chorro de agua fra y aadir gotas de yodo y lugol, observar lo que se sucede a medida que pasa el tiempo. Tomar 5 ml de la solucin de almidn ms amilasa y efectuar la determinacin de azcar reductor. Adicionar a la solucin 2 ml del reactivo de color (ferrocianuro de potasio en carbonato de sodio concentrado)

Cubrir el tubo de ensayo con un trozo de papel aluminio para evitar el ingreso de oxgeno el cual puede reoxidar al ferricianuro.

Llevar el tubo de ensayo a bao mara hirviente por 15 minutos exactamente, observar el cambio de coloracin, de colora amarillo a transparente. La actividad viene a ser el grado de decoloracin.

IV. V. VI.

COMENTARIOS. CONCLUSIONES. RESOLUCIN DEL CUESTIONARIO. Que sucede a medida que pasa el tiempo y porque se da este fenmeno de la saliva mas almidn y lugol? Cual es el producto final de amilasa con almidon? Explicar el fundamento de la reaccin de almidn mas lugol, azcares reductores fehling AyB. Explicar que sucede con los tubos a los que se agrega HCl, aumenta la temperatura y adiciona bicarbonato de sodio? Cual es la composicin de la saliva y jugo pancretico y que funcin cumple. Cual es la composicin qumica del almidn y que caractersticas tiene?

PRACTICA N 03.

TOMA DE MUESTRAS SANGUINEAS.

I.

Objetivo.

Adquirir prctica en la toma de muestra de sangre venosa y sangunea.

II.

MARCO TEORICO.

La sangre para poder ser estudiada debe extraerse del organismo y en ocasiones fraccionarse en sus componentes fundamentales: Plasma o suero. La extraccin sangunea puede realizarse por diversos mtodos siendo los ms empleados: La puncin venosa y puncin capilar. Al igual que cualquier otra tcnica o prctica mdica, la extraccin sangunea precisa de un adecuado control de calidad y que de ello depende muchas veces el que el resultado del anlisis de la muestra de sangre sea correcto. Se efectuar en ayunas o no, dependiendo de la prueba a utilizar. Existen a continuacin las diferentes metodologas.

2.1.

SANGRE VENOSA:

La sangre venosa es necesaria para la mayora de las pruebas que requieran anticuagulacin o cantidades mayores de sangre, plasma o suero, de lo que podra proporcionar la sangre capilar.

Seleccin de las venas para la venopuncin: Las venas superficiales de la cara anterior del antebrazo son las ms comunes para la venopuncin. Las principales son:

a) Vena ceflica, ubicada en la parte superior del antebrazo y del lado del pulgar de la mano. b) Vena baslica, ubicada en la parte inferior del antebrazo y del lado del dedo meique de la mano. c) Vena cubital mediana, que conecta las venas baslica y ceflica en la fosa antecubital (flexin del codo)

Ventajas. Puede hacerse repetidos exmenes con el mismo espcimen. Alcuotas del espcimen (plasma o suero) pueden congelarse para referencia futura.

Desventajas:

Requiere mayor preparacin que el mtodo capilar, por su largo procedimiento. El mtodo es tcnicamente difcil en nios, individuos o obesos y pacientes en shock. La hemlisis debe ser evitada, pues se obtiene una disminucin en el contaje de eritrocitos e interfiere en muchas pruebas clnicas. Debe evitarse la formacin de hematomas dentro y fuera de la vena, primero con una puncin limpia con la aguja y aplicando suficiente presin sobre el lugar de puncin despus de terminado el proceso. Debe evitarse prolongado xtasis venoso producido por el torniquete pues produce hemlisis y otros cambios que ponen la sangre en un estado inadecuado para anlisis de gases, contajes sanguneos, determinacin de plasma sanguneo y algunas pruebas de coagulacin. Los componentes de la sangre no son estables, los recuentos de leucocitos y plaquetas e ndice de sedimentacin debe realizarce antes de que pasen 2 horas desde que se obtuvo la sangre.

2.2.

SANGRE CAPILAR.

Cuando la cantidad de sangre que se precisa es muy pequea o cuando por diferentes motivos no pueda practicarse una puncin venosa, debe recurrirse a la puncin capilar.

Ventajas.

Puede obtenerse con facilidad. Es un material preferible cuando ha de realizarse extensiones en sangre perifrica.

Desventajas.

Slo se obtiene pequeas cantidades de sangre y exmenes de repeticin requieren nuevas muestras. La sangre en microtubos se puede bemolizar y la hemlisis interfiere con la mayora de pruebas de laboratorio. En pacientes con resistencia disminuida a la infeccin (leucemia, diabetes, uremia, deficiencias inmunolgicas) una muestra tomada es mucho ms problable que conduzca a una infeccin que otra tomada del brazo. El contaje de eritrocitos y glbulos blancos, as como el recuento de plaquetas y meticulositos no debe realizarse en sangre capilar debido a la difcil estandarizacin del flujo sanguneo capilar.

III.

PARTE EXPERIMENTAL.

3.1.

EXTRACCIN SANGRE VENOSA.

MATERIALES.

Tubos de ensayo o frascos de vidrio rotulados bien limpio para la recoleccin de muestra. Jeringas estriles descartables de acuerdo al volumen de la muestra a tomar y agujas descartables estriles N 20. Ligador. Lapiz de cera o plumn marcador. Algodn y alcohol medicinal.

PROCEDIMIENTO. Preparar todo el material necesario para la recoleccin de la muestra. Etiquetar el tubo en el que se va recolectar la muestra con los datos que vienen en la orden: Nombre del paciente, edad, fecha y hora. Si corresponde, verificar alguna restriccin de una dieta. Asepsia de manos, con lavado de agua y jabn o en su caso limpiar con una torunda de algodn con alcohol. Poner al paciente en una posicin cmoda y descubra la zona de aplicacin, de preferencia de boca arriba o sentado con el antebrazo separado del cuerpo con la palma hacia arriba. Localizar la vena palpndola con el dedo ndice para reconocer su direccin, profundidad y grosor, escoger la mas cargada y resaltante., por lo general las mas utilizadas son las del pliegue del codo (ceflica, baslica y media) La extraccin puede realizarce de preferencia en cualquier vena accesible del cuerpo, pero por lo general se eligen las venas del pliegue del brazo (venas mediana, mediana baslica y mediana ceflica. Tambin en las venas cubital y radial)

Realizar la asepsia del lugar de aplicacin, con movimientos firmes y siguiendo un solo sentido: en crculos de adentro hacia fuera y de arriba hacia abajo, dejar secar al aire!

Anude el torniquete por encima de la vena a unos 5 cm por encima del punto de puncin, pedir al paciente que habra y cierre la mano varias veces, luego mantener cerrada haciendo puo. Realizar la asepsia del sitio de puncin friccionando con trozo de algodn humedecido con alcohol. Coger la jeringa con el bisel hacia arriba o la aguja N 21 N 20 Con el pulgar de la mano izquierda fijar la vena, estirando en sentido opuesto al que se introducir la aguja. Introducir la aguja en la piel en un ngulo de 45 , bajar el ngulo de penetracin e ir introduciendo la aguja hasta penetrar en la vena, tirar suavemente del embolo para comprobar que la guja est dentro de la vena (ver sangre en la jeringa) canalizar en

direccin a la vena casi paralela a la pared para evitar perforar la pared posterior de la vena, tomar la cantidad de sangre necesaria a flujo continuo, no ejercer aspiracin excesiva para evitar hemlisis, aspirar el mbolo a una velocidad igual al flujo sanguineo.

Soltar la ligadura y pedir al paciente que deje de hacer puo. Terminada la extraccin, coloque un trozo de algodn humedecido en alcohol sobre el sitio de puncin y retire la aguja lentamente, siguiendo siempre la direccin de la vena. Presione con el algodn sobre el sitio de puncin unos 3 5 min. Si se utiliz una jeringa, llenar los tubos, desprendiendo previamente la aguja de jeringa.

3.2.

EXTRACCIN SANGRE CAPILAR.

MATERIALES. Lanceta estril de desechable (2 mm. de profundidad) o aguja descartable N 20. Algodn y alcohol medicinal. Tubo capilar descartable.

PROCEDIMIENTO. La sangre capilar se obtiene de la punta de un dedo en los adultos y del dedo gordo del pie en los nios.

Desinfectar la zona con alcohol de 70 %, dejar sacar al aire. Punzar la piel con una lanceta estril o aguja descartable N 20. Usar gasa para descartar la primera gota y recoger las siguientes, en el tubo capilar descartable. Presione con el algodn sobre el sitio de puncin unos 3 4 min.

IV. V. VI.

COMENTARIOS. CONCLUSIONES. RESOLUCIN DEL CUESTIONARIO. Que factores fisiolgicos afectan los resultados de una prueba de laboratorio clnico. Definir: antiglicolitico, cuagulante, anticuagulante y gel separador. Que anticuagulantes existen y para que tipo de determinaciones se utilizan. A que se denomina sangre cuagulada, desfibrinacin y sangre sin cuagularCuales son las complicaciones mas frecuentes en la recoleccin de sangre y como evitarlos. Cual es la diferencia entre plasma y suero, cuales son sus ventajas y desventajas.