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COURS DE METABOLISME
Chapitre 8 Pr C. ZINSOU

LA NEOGLUCOGENESE BIOSYNTHESE DU GLUCOSE A PARTIR DU PYRUVATE

1 - INTRODUCTION 2 - ETAPES ENZYMATIQUES 2.1 - TRANSFORMATION DU PYRUVATE EN PHOSPHOENOLPYRUVATE 2.1.1 - Phase mitochondriale 2.1.2 - Phase cytosolique 2.2 - TRANSFORMATION DU PHOSPHOENOLPYRUVATE EN FRUCTOSE 1-6 BISPHOSPHATE 2.3 - TRANSFORMATION DU FRUCTOSE 1-6 BISPHOSPHATE EN GLUCOSE 2.3.1 - Dphosphorylation du fructose-1,6-bisphosphate en fructose-6-phopshate 2.3.2 - Isomrisation du fructose 6-phosphate en glucose 6-phosphate 2.3.3 - Dphosphorylation du glucose 6-phosphate en glucose 2.4 - BILAN 3 - REGULATION RECIPROQUE DE LA GLYCOLYSE ET DE LA GLUCONEOGENESE 3.1 Rgulation allostrique 3.2 Rgulation hormonale

NB : Voir illustrations et figures sur le document de travail

1 - INTRODUCTION Certains tissus comme le cerveau, les globules rouges, la rgion mdullaire du rein, le cristallin, la corne de lil, et le muscle en contraction rapide ont besoin dun approvisionnement continu en glucose. Seul le foie est capable dassurer cette fonction par mobilisation du glycogne et par noglucogense. Les rserves du foie sous forme de glycogne sont values 190 g. Les besoins journaliers en glucose sont estims 120 g pour le cerveau, 40 g pour le reste de l'organisme. Dans les fluides, circulent 20 g de glucose l'tat dissous. On en dduit que les rserves en glucose hpatique ne couvrent que les besoins d'un jour en labsence dalimentation glucidique. Le glucose peut tre synthtis par la voie de la noglucogense ou gluconognse partir de prcurseurs comme le pyruvate, le lactate, le glycrol issu de lhydrolyse des triglycrides et des ceto-acides provenant de la dsamination des acides amins glucoformateurs. La majeure partie du glucose noform (90 %) est synthtise dans le foie et les 10 % restants dans les reins. Les reins jouent ainsi un rle mineur sauf dans le cas de jene prolong o leur contribution devient trs importante. La noglucogense est active dans le cas du jene et dans le diabte. En cas dexercice physique pendant lequel le glucose musculaire est dgrad en lactate, la noglucogense hpatique est stimule ; pour retransformer en glucose, le lactate, issu de la glycolyse musculaire. Voir cycle des Cori. Bien que la noglucogense soit habituellement dfinie comme la transformation du pyruvate en glucose et que la glycolyse soit la dgradation du glucose en pyruvate, la noglucogense n'est pas l'inverse de la glycolyse. En effet, trois ractions de la glycolyse sont irrversibles et se situent au niveau des sites de contrle. glucose + ATP glucose 6- + ADP Fructose 6- + ATP Fructose-1,6-bis + ADP PEP + ADP Pyruvate + ATP (hexokinase) (Phosphofructokinase 1) (Pyruvate kinase)

Pour contourner ces 3 difficults, la cellule fait appel dautres ractions thermodynamiquement plus favorables avec la coopration des mitochondries. 2 - ETAPES ENZYMATIQUES La plupart des tapes qui conduisent du pyruvate au glucose sont catalyses par les enzymes de la glycolyse qui interviennent en sens inverse (ractions rversibles). Les trois ractions irrversibles sont remplaces par d'autres ractions quilibre thermodynamique plus favorable et catalyses par des enzymes spcifiques de la noglucogense. Le dmarrage de la noglucogense exige la conversion du pyruvate en phosphonolpyruvate. Deux pyruvates sont ncessaires pour faire un glucose. 2.1 - TRANSFORMATION DU PYRUVATE EN PHOSPHOENOLPYRUVATE C'est la premire tape . Elle ne peut tre ralise par l'action de la pyruvate kinase selon la raction suivante qui est endergonique. 2 Pyruvate + 2 ATP 2 Phosphonolpyruvate + 2 ADP G'= + 7.5 kcal/mol

Pour obtenir cette phosphorylation du pyruvate il y a coopration entre la mitochondrie et le cytosol.

2.1.1 - Phase mitochondriale Le pyruvate, export dans la mitochondrie, est d'abord carboxyl par la pyruvate carboxylase, situe dans la matrice. Lenzyme est une ligase biotine. LATP est ncessaire. La pyruvate carboxylase se rencontre dans les mitochondries du foie et des reins mais pas dans celles des muscles. La squence des ractions est rsume sur la figure 21. 2 Pyruvate + 2 CO2+ 2 ATP 2 oxaloactate + 2 ADP + 2 Pi Loxaloactate form est rduit en malate par la malate dshydrogenase mitochondriale. Le malate est ensuite transport de la mitochondrie dans le cytosol. 2 Oxaloactate + 2 NADH,H+ 2 malate + 2 NAD+ . 2.1.2 - Phase cytosolique Le malate est roxyd en oxaloactate par la malate dshydrognase cytosolique. 2 Malate + 2 NAD+ 2 Oxaloactate + 2 NADH,H+ (Malate DH)

Enfin l'oxaloactate est transform en phosphonolpyruvate, suivant une raction rversible) en prsence du GTP par la phosphonolpyruvate carboxykinase (PEPcarboxykinase), enzyme spcifique de la noglucogense. 2 Oxaloactate + 2 GTP 2 PEP + 2 GDP + 2 CO2 En rsum la raction phosphonolpyruvate est : globale de la transformation du pyruvate en

2 Pyruvate + 2 ATP + 2 GTP 2 PEP + 2 ADP + 2 GDP + 2 Pi Chez certains micro-organismes et vgtaux, la phosphorylation du pyruvate en PEP est ralise par une raction compltement diffrente, catalyse, en une seule tape, par une pyruvate orthophosphate dikinase : 2 Pyruvate + 2 ATP + 2 Pi 2 PEP + 2 AMP + 2 PPi 2.2 - TRANSFORMATION DU PHOSPHOENOLPYRUVATE EN FRUCTOSE-1,6- BIS La squence des ractions qui vont conduire du PEP au glucose est cytosolique. La transformation du phosphonolpyruvate en furctose-1,6-bis est ralise par la squence des ractions glycolytiques rversibles, fonctionnant en sens inverse. Nous nous contenterons de les crire en rappelant les noms des enzymes. Voir figure 19. 2 PEP + 2 H2O 2 glycrate 2- 2 glycrate 2- 2 glycrate 3- (Enolase) (Phosphoglycrate mutase)

2 Glycrate 3- + 2 ATP 2 (3-glycroyl 1-) + 2 ADP (Glycrate 3- kinase) 2 (3-glycroy1 1-) + 2 NADH,H+ 2 glycraldhyde 3-+ 2 Pi + 2 NAD+ (glycraldhyde 3- DH)

1 glycraldhyde-3- 1 dihydroxyactone-3-

(Phosphotriose isomrase)

3-glycraldhyde + 3-dihydroxyactone Fructose-1,6-bis (Aldolase 1) Le bilan global de la squence est l suivant : 2 PEP + 2 H2O + 2 ATP + 2 NADH,H+ Fructose-1,6-bis + 2 ADP + 2 Pi + 2 NAD+ 2.3 - TRANSFORMATION DU FRUCTOSE 1-6 BISPHOSPHATE EN GLUCOSE Une squence de 3 ractions, dont une rversible, conduit au glucose. 2.3.1 - Dphosphorylation du fructose-1,6-bis en fructose 6- On connat la raction qui transforme le fructose 6-phosphate en fructose 1-6 bis. Cette raction qui est catalyse par la phosphofructokinase 1 (transfrase) est irrversible. La raction inverse qui enlve le groupement phosphate est catalyse par la fructose-1,6 bisphosphatase (FBP1), enzyme cl et site de rgulation principal de la voie. Fructose-1,6-bis + H2O fructose 6- + Pi 2.3.2 - Isomrisation du fructose 6- en glucose 6- La raction est catalyse par la phosphogluco-isomrase (PGI) Fructose 6- glucose 6- 2.3.3 - Dphosphorylation du glucose 6- en glucose Le dpart du groupement phosphate du glucose 6- est effectu par une hydrolase : glucose 6-phosphatase dont limportance est fondamentale dans le maintien de la glycmie. On la trouve dans le foie et dans les reins mais pas dans les muscles stris. glucose 6- + H2O glucose + Pi 2.4 - BILAN Le bilan de la formation du glucose partir de 2 pyruvate est le suivant : 2 pyruvate + 4 ATP+ 2 GTP + 2 NADH,H+ Glucose + 4 ADP + 2 GDP + 6 Pi + 2 NAD+

Sur le plan nergtique la synthse du glucose consomme 4 ATP + 2 GTP soit lquivalent de 6 liaisons phosphates riches en nergie. 3 - REGULATION RECIPROQUE DE LA NEOGLUCOGENESE ET DE LA GLYCOLYSE La Noglucogense et la glycolyse se droulent dans le cytosol. La plupart des intermdiaires leur sont communs. Des conflits peuvent apparatre au niveau de leur utilisation. En effet les deux processus ne rpondent pas aux mmes objectifs : la glycolyse est engage dans la production de lnergie et la noglucogense dans sa conservation. La rgulation rciproque des 2 processus simpose de manire les ajuster en fonction de ltat nergtique et des besoins cellulaires ou des tissus.

Dans ces conditions, les deux voies sont rgules de telle sorte que l'une est inhibe lorsque l'autre est active et vice versa. Comme nous lavons vu, le principal signal qui rgle cette rgulation est le rapport ATP/AMP. 3.1 - Rgulation allostrique Compte tenu du fait que la noglucogense et la glycolyse utilisent des squences de ractions fonctionnant en sens inverse elles font lobjet dune rgulation allostrique efficace qui font intervenir deux couples denzymes : Phosphofructokinase 1/Fructose 1,6bisphosphatase 1 (PFK1/FBP1) et Pyruvate dshydrognase/Pyruvate carboxylase (PDH/PC). Voir figure ci-aprs. Lorsque le rapport ATP/AMP est trs faible, il indique que pratiquement tout l'ATP est utilis. La cellule a besoin de fabriquer de l'ATP. La glycolyse et la phosphorylation oxydative doivent alors fonctionner activement pour satisfaire les besoins en ATP. En revanche, si ce rapport est lev les besoins en ATP et en prcurseurs biosynthtiques sont satisfaits. La glycolyse ralentit et lexcs du pyruvate est retransform en glucose.
3.1.1 - Phosphofructokinase 1 /Fructose 1,6 bisphosphatase 1 (PFK1/FBP1)

Le niveau lev dAMP active la phosphofructokinase 1 (PFK1) de la glycolyse et inhibe la fructose -1,6-bisphosphatase (FBP1) de la noglucogense. Inversement lorsque les concentrations en ATP et en citrate sont trs leves, la glycolyse ralentit. Ce ralentissement est assur par l'inhibition de la phosphofructokinase 1 (PFK1) par l'excs d'ATP et de citrate. Paralllement la fructose-1,6-bisphosphatase 1 (FBP1) est active et la noglucogense est stimule. Ces enzymes sont considres comme les sites principaux de contrle de ces deux voies. Un effecteur positif de PFK1 devient simultanment un effecteur ngatif de FBP1 et vice versa, Ainsi se trouve ralise une rgulation coordonne des deux voies par le mme mtabolite. 3.1.2 - Pyruvate dshydrognase /Pyruvate carboxylase (PDH/PC). La pyruvate dshydrognase et la pyruvate carboxylase constituent le deuxime couple d'enzymes rciproquement rgules affectant la glycolyse et la noglucogense. Ces deux enzymes sont mitochondriales. En cas de besoin en ATP, le fructose-1,6-bisphosphate stimule la pyruvate kinase pour produire du pyruvate indispensable la formation de lactyl-CoA. Une activit de la pyruvate DH favorise la glycolyse. En cas d'excs d'ATP, signal de ralentissement en aval du cycle de Krebs et de la phosphorylation oxydative, le citrate et lactyl-CoA saccumulent. Lactyl-CoA en excs devient un effecteur ngatif de la pyruvate DH mais un activateur de la pyruvate carboxylase qui, en temps normal, est peu active. Le pyruvate est alors transform en oxaloactate, ce qui engage ses carbones dans la noglucogense plutt que dans le processus de production de lATP. Bien que l'activit de la pyruvate carboxylase soit faible en temps ordinaire, elle est cependant fondamentale dans la rgulation de la production de lnergie. En effet, l'oxaloactate, produit de la carboxylation du pyruvate, est un intermdiaire catalytique du cycle de Krebs. Dans ce cas, la raction catalyse par la pyruvate carboxylase est considre comme une raction nourricire (anaplrotique) du cycle tricarboxylique. Elle assure le maintien du taux ncessaire en oxaloactate mitochondrial, si des prlvements sont oprs pour la synthse de laspartate (par exemple).

Figure : Rgulation allostrique rciproque de la noglucogense et de la glycolyse. 3.2 Rgulation hormonale Dans cette rgulation il faut considrer le cas du foie dont le rle fondamental est de maintenir le taux du glucose sanguin. La rgulation rciproque de la glycolyse et de la noglucogense est assure par le taux de fructose-2,6-bis (F-2,6-bis). Il rsulte, dans le foie, de la phosphorylation du fructose 6-phophate par la phosphofructokinase 2 (PFK2). Ce mtabolite est un effecteur allostrique positif de la phosphofructokinase-1 et ngatif de la fructose-1,6-bisphosphatase 1 (FBP-1). En concentration suffisante il active par ce biais la glycolyse pendant quil inhibe la noglucogense. Le fructose-2,6-bisphosphate est synthtis par la phosphofructokinase 2 (PFK2) et dphosphoryl en fructose 6-phosphate par la fructose 2,6-bisphosphatase 2 (FBP2). Ces deux activits appartiennent un complexe enzymatique bis-fonctionnel. Lquilibre entre les deux activits du complexe (et par consquent le taux cellulaire de F-2,6-bis) est assur par le glucagon. La transduction se fait par lintermdiaire de lAMPc comme second messager et par lintermdiaire de la protine kinase A. La PFK2 est dsactive par phosphorylation, en prsence de lATP, par la protine kinase A, ce qui arrte la production du fructose-2,6-bis. En mme temps la mme protine kinase A stimule par phosphorylation lactivit de la FBP2 permettant la dphosphorylation du fructose-2,6-bis en fructose 6-. La baisse de la concentration cellulaire en fructose-2,6-bis active la noglucogense. Inversement linsuline, par ses ractions en cascade, conduit lactivation, par phosphorylation, dune protine phosphatase insulino-dpendante. Cette dernire permet la dphosphorylation la fois de PFK2- et de FBP2-. La synthse de fructose-2,6-bis peut reprendre avec comme consquence la stimulation de la glycolyse et larrt de la noglucogense. Par le jeu dinterconversion dune forme dans lautre pour chacune des enzymes du complexe, la rgulation rciproque de la glycolyse et de la noglucogense est efficacement assure dans les cellules hpatiques sous laction du glucagon et de ladrnaline dune part et de linsuline dautre part, voir figure ci-dessous.

Dans les mmes conditions la protine kinase A peut aussi phosphoryler la Pyruvate kinase hpatique qui devient inactive. Le phosphonolpyruvate nest plus converti en pyruvate mais remonte la voie de la noglucogense.

Tableau comparatif de glycolyse et de la noglucogense . Ce quil faut retenir

Caractristiques Glycolyse Noglucogense Dfinition Voie de dgradation du glucose en Voie de synthse du glucose partir pyruvate du pyruvate Localisation Ractions enzymatiques Cytoplasme Tous tissus 10 : - 3 irrversibles - 7 rversiblesCytoplasme Foie et Reins 11 - 3 irrversibles - 8 rversibles

Ractions rversibles communes

- Glucose-6 fructose 6- Phosphoglucose isomrase - Fructose-1,6-bis Glycraldhyde 3- + PDHA Aldolase 1 - Glycral.-3- .Dihydroxyactone 3- Phosphotriose isomrase - Glycrald. 3- + NAD+ + Pi PGP + NADH,H+ Glycrald.-3- DH - PGP + ADP Glycrate-3- + ATP Phosphoglycrate kinase - Glycrate-3- Glycrate 2- Phosphoglycrate mutase - Glycrate 2- PEP + H2O Enolase - Hexokinase : Gluc+ ATP G-6-P + ATP -Phosphofuctokinase 1 F-6- + ATP F-1,6-bis + ADP - Pyruvate kinase PEP + ADP Pyruvate + ATP - Glucose 6-Phosphatase : G-6- + H2O Glucose + Pi
- Fructose-1,6-bisphosphatase

Ractions spcifiques

F-1,6-bis + H2O F-6- + Pi - PEP carboxykinase


Oxaloac. + GTP PEP + GDP+ CO2

- Pyruvate carboxylase :
Pyr. + CO2 + ATP Oxal. + ADP + Pi

Energtique

Production de : 2 ATP et de 2 NADH,H+

Consommation de 4 ATP, 2 GTP et 2 NAD(P)H,H+

NB : PGP : 3-glycroyl 1-, PDHA : 3-Phosphodihydroxyactone PEP : Phosphonolpyruvate, .