QUE ES UN BANCO DE SANGRE? Segun la Definicin establecida por la norma Oficial Me xicana 003-SSA2-1993.

Es el establecimiento autorizado para obtener, recolectar, conservar, aplicar y proveer sangre humana, as como para analizar y conservar, a plicar y proveer componentes de la misma. QU MOTIVA A UNA PERSONA A DONAR SANGRE? La mayor parte de las veces, el donador se dirige a una unidad Atendiendo a la solicitud de un amigo o pariente; Las personas conscientes del valor del acto de donar se tornan donadores volunta rios TIPOS DE DONANTES Reposicin o Familiares Voluntarios Voluntarios Altruistas Repetidos (Futuro Deseado) CULES SON LOS REQUISITOS PARA DONAR SANGRE? Para donar sangre la persona debe: Portar documento de identidad con fotografa. Tener edad entre los 18 y 65 aos. Tener pero corporal superior a 50 Kg. Estar en buen estado general de salud. Adems de eso, el candidato a donar sangre, pasa una evaluacin para verificar si realmente est en condiciones de donar o no. QUE ES UN BANCO DE SANGRE: Segun la Definicin establecida por la norma Oficial Mexicana 003-SSA2-1993. Es el establecimiento autorizado para obtener, recolectar, conservar, aplicar y prove er sangre humana, as como para analizar y conservar, aplicar y proveer componente s de la misma. FUNCION DEL BANCO DE SANGRE LA FUNCIN DEL BANCO DE SANGRE ES DETERMINAR QUIN ES EL DONADOR IDEAL Y DETECTAR LA S UNIDADES INFECTANTES.ADEMAS DEALMACENAR, PROCESAR Y DISTRIBUIR LA SANGRE, HEMO DERIVADOS Y RECIBIR A LOS DONANTES. TIPOS DE DONANTES Reposicin o Familiares Voluntarios Voluntarios Altruistas Repetidos (Futuro Deseado) SELECCIN DEL DONADOR Iniciamos con un cuestionario y una breve historia mdica. Tu informacin debe ser v erdadera y ser totalmente confidencial pero nunca sers obligado a contestar o a do nar si no quieres. Se toma la temperatura, talla, peso y la presin arterial para determinar que te e ncuentras en buenas condiciones,Una pequea muestra de sangre nos mostrar si la don acin ser segura y conoceremos tu tipo de sangre No se adquiere ninguna enfermedad a travs de la donacin, ya que el equipo que se u sa es nuevo, estril y desechable. Se extraen en promedio 459 mL. ( una pinta ) de sangre en una bolsa de plstico es tril, sin que esto provoque molestias Se realizan los exmenes de laboratorio para conocer la presencia de enfermedades infecciosas como la Hepatitis B y C, el SIDA, la Sfilis y la Brucelosis ( fiebre de malta ). Si lo deseas, los resultados los podrs tener en una semana despus de l a donacin sin costo alguno. Si la sangre tiene resultados de laboratorio POSITIVOS o REACTIVOS, ser eliminada y NUNCA USADA RECUERDA: la Donacin de Sangre es Voluntaria y Gratuita Eres candidato ideal para donar sangre SI:

Eres mayor de 18 aos Y 65 AOS Pesas por lo menos 50 Kg Cuentas con buen estado de salud Portar documento de identidad con fotografa. NO eres candidato ideal si: Hace tres das tuviste fiebre, infeccin, tomaste medicinas, alcohol o tuviste tu sa ngrado menstrual Hace 45 das donaste sangre Hace 6 meses te operaron o estuviste embarazada Padeces ataques, moretes o sangrados espontneos, alta o baja presin no controlada, diabete s y recibes insulina, problemas del corazn, alergias graves o una infeccin actual Has tenido enfermedades venreas Usaste o usas drogas Tuviste hepatitis Has tenido los ojos amarillos, fiebre y orina oscura Si tu o tu pareja recibieron sangre, tuvieron contacto con homosexuales, descono cidos o sexo servidoras Has recibido quimioterapia para el tratamiento del cncer. Hemoderivado Un hemoderivado es todo aquel tejido que se deriva o separa a partir de la sangr e. Casi siempre se separan por medio de una centrifuga en un laboratorio, basndos e en la densidad de los diferentes componentes de la sangre; lo mas denso se va hasta el fondo mientras que lo menos denso queda en la parte superior. En este p roceso se separa la sangre total en: suero, plasma, eritrocitos, plaquetas y alg unas veces incluso queda una pequea parte de glbulos blancos.La manera correcta de conservarse es por congelacin una vez que cada componente se aisla. Los que son utilizables son:1. Paquete globular (eritrocitos): es el que se emplea en las tr ansfusiones. 2. Plasma: en el se encuentran factores de la coagulacin y protenas. 3. Concentrado plaquetario: Es menos empleado que los anteriores, pero se utiliz a en aquellos pacientes con deficiencia de plaquetas. TIPOS DE HEMODERIVADOS Los principales hemoderivados con inters teraputico son: concentrados de factores dela coagulacin (conc. FVIII, conc. FIX y conc. comp. protrombnico), inmuniglobuli nas (IM,IV o IV especficas), antitrombina-III y albmina, como ejemplos ms conocidos, y fibringe -no, Cl-esterasa inhibidor, alfa-1-proteasa , colinesterasa menos utilizados. Durante los das 9 y 10 de noviembre ha tenido lugar en Barcelona el I Curso de In tro -duccin a la Farmacoterapia de los Hemoderivados. Las principales conclusione s en cuanto a criterios de seleccin y utilizacin han sido los siguientes: Los concentrados de factor VIII (hemofilia A) o IX (hemofilia B) deben utilizars e bajo protocolo siguiendo dos estrategias de tratamiento: demanda o profilaxis. En cuanto a los preparados a emplear existe actualmente un cierto consenso en q ue los concentrados de factor VIII obtenidos por recombinacin gentica debieran uti lizarse preferentemente en aquellos pacientes hemoflicos no tratados anteriorment e o que sean VIH y VHC negativos. Los concentrados de factores del complejo protrombnico (CP) [factores II, VII, IX y X (factores vitamina K dependientes)] deben emplearse en el tratamiento de dfi cits combinados de dichos factores fundamentalmente adquiridos: hepatopata, intoxi cacin/reversin de anticoagulacin oral. Debe valorarse la eleccin del preparado comerc ial en relacin a la seguridad. Al no existir unas indicaciones universalmente aceptadas, la utilizacin racional de albmina exige (incluso ms que otros hemoderivados) una protocolizacin de indicac iones que debiera considerar varios aspectos, entre los que cabra descartar los s iguientes: slo son candidatos aquellos pacientes con niveles plasmticos inferiores a 20-25 g/l, en muchas situaciones es preferible la utilizacin de cristaloides y /o expansores del plasma, la protocolizacin debera poner especial atencin en la duracin

del tratamiento. Los criterios de seleccin y utilizacin de inmunoglobulinas intravenosas (IGIV) deb en contemplar varios aspectos: a) Indicacin. Debe ser una indicacin autorizada o como mnimo ampliamente aceptada p or la bibliografa internacional y/o conferencias de consenso. Este punto es impor tante ya que, a veces, existen situaciones en que este hecho no se tiene en cuen ta. b) Caractersticas tcnicas. En ciertas situaciones el perfil tcnico de una determina da inmunoglobulina puede ser un factor de decisin. Los aspectos ms relevantes a te ner en cuenta son: Conocimiento de la poltica de donantes del fabricante: cantidad, controles, proce dencia Mtodo de purificacin empleado y grado de seguridad de no transmisin de partculas vric as. Contenido en IgA. Porcentaje de polmeros y fracciones. Distribucin de subclases. Integridad del fragmento Fc. Contenido en determinados anticuerpos: ttanos, citomegalovirus, hepatitis B Criterios de costes. Las inmunoglobulinas de administracin intramuscular (IGIM) sufren un proceso de f raccionamiento menos selectivo, que desnaturaliza una parte de las inmunoglobuli nas, por lo que no deben administrarse por va intravenosa riesgo de activacin del c omplemento. La IGIM con inters teraputico son la antitetnica, antihepatitis B y ant i-Rh. La antitrombina III es necesaria para que el efecto anticoagulante de la heparin a se manifieste. De hecho cuando existe un dficit importante de esta ltima la accin anticoagulante de la heparina disminuye. Su uso podra estar justificado en pacien tes con dficit congnito de antitrombina III con riesgo de trastornos tromboemblicos (intervenciones quirrgicas, parto, etc.). Sus indicaciones son ms controvertidas en dficit adquiridos. Existen otros hemoderivados, cuantitativamente menos importantes, pero que prese ntan indicaciones concretas: concentrados de fibringeno, inhibidor de Cl-esterasa o 1 ntitripsin , lgunos no registr dos en Esp , sometidos p steuriz cin y por t nto con riesgo mnimo de tr nsmisin de p rtcul s vric s. REACCIONES POSTRANFUCIONALES Se denomin re ccin postr nsfusion l los efectos desf vor bles que pueden p re cer en un p ciente dur nte o despus de l tr nsfusin de lgn hemoderiv do consecu enci del mismo. A pes r de los v nces des rroll dos en l obtencin y conserv cin de l s ngre, l tr nsfusin conllev riesgos que no h y que olvid r l hor de su indic cin que deriv n de l n tur lez del producto ( diversid d ntignic , p otenci l infectivo), lter ciones del producto en su lm cen miento y c mbios de volumen y de electrolitos en el sujeto. Desde l p ricin del SIDA l ctitud de l pobl cin frente l tr nsfusin h c mbi do, dem nd ndo un tr nsfusin sin riesg os. Dich dem nd no es ctu lmente lc nz ble. Se distinguen re cciones tr nsfu sion les inmedi t s y t rd s segn el momento de p ricin. A.- Re cciones postr nsfusion les inmedi t s. 1.- Re cciones hemoltic s gud s por incomp tibilid d eritrocit ri . Se producen por l lisis intr v scul r de los hem ties tr nsfundidos. Suelen deberse incomp tibilid d ABO ( muy frecuentemente en rel cin con error en l identific cin del p ciente o de l muestr de s ngre ), ms r r mente pueden c us r re cciones hemoltic s los sistem s Kidd y Duffy. Los sntom s observ dos son fiebre, esc lofros, urtic ri , opresin torcic , dolor lum b r, t quic rdi , nuse s y vmitos. Si l re ccin es sever se produce un col pso c ircul torio debido l ctiv cin del complemento por l lisis intr v scul r y li ber cin de sust nci s v so ctiv s 2.- Re cciones febriles no hemoltic s. Suelen est r c us d s por nticuerpos ntileucocit rios ( leuco glutinin s ). Se producen en p cientes previ mente sensibiliz dos ntgenos del sistem HLA con

histori de tr nsfusiones previ s o emb r zos. Clnic mente se m nifiest n por fie bre y esc lofros. Son l s ms frecuentes. 3.- Re cciones lrgic s . En gener l, no suelen ser gr ves. Se tribuyen nticuerpos en el receptor cont r l s proten s del pl sm del don nte. Se producen en 1-2% de l s tr nsfusiones y se m nifiest n con signos y sntom s de urtic ri . Responden l tr t miento con ntihist mnicos como pol r mine, no siendo preciso suspender l tr nsfusin. 4.- Re cciones por sobrec rg circul tori . Se producen ms fcilmente en p cientes con lter ciones c rdiolgic s que dems se ven gr v d s por l situ cin de nemi . L infusin dem si do rpid o de dem si do vol umen son f ctores contribuyentes est complic cin, sobre todo en c so de s ngre con l rgo periodo de lm cen miento. 5.-Edem pulmon r no c rdiognico 6.-Hemlisis no inmunolgic s. 7.- Sepsis b cteri n 8.-Complic ciones por tr nsfusin m siv B.- EFECTOS ADVERSOS RETARDADOS. Son quellos efectos tribuibles l tr nsfusin que p recen en un periodo no in medi to ( l c bo de d s, sem n s o meses ). 1.-Re cciones hemoltic s demor d s o t rd s. Se deben l produccin de nticuerpos de form rpid frente ntgenos tr nsfundid os, h y o no existido inmuniz cin previ por emb r zo o tr nsfusin. Se detect n emiz cin del p ciente unos d s despus de l tr nsfusin. L m yor destruccin eritrocit ri se produce entre el d 4 y el 13 postr nsfusin. El tr t miento p s por l identific cin del nticuerpo y l tr nsfusin si es prec iso de hem ties que c rezc n del ntgeno, y conseguir un buen hidr t cin y diure sis. 2.-Tr nsmisin de enfermed des infeccios s. A pes r de los v nces en los tests microbiolgicos que se someten tod s l s don ciones de s ngre , y el test de utoexclusin previo l don cin, el riesgo de tr nsmisin de enfermed des no est complet mente err dic do. Los princip les gentes infecciosos que pueden ser tr smitidos tr vs de l tr nsfusin son los siguientes : E.- Otr s infecciones (M l ri , otr s hep titis ( p.e. virus de l hep titis G ) , Citomeg lovirus, Virus de Epstein-B rr, HTLV-1 y Toxopl smoxis ) 3.- Enfermed d injerto contr husped. 4.- Hemosiderosis. AFERESIS L Afresis es un procedimiento especi l de don cin de s ngre, medi nte el cu l se extr e s ngre enter de un don nte y se sep r en sus componentes. Luego se lm cen el componente dese do -en ste c so pl quet s- y se restituye el resto de l s ngre l don nte. Como es f ctible recolect r gr n c ntid d de pl quet s de un solo don nte, l fresis red uce el nmero de exposiciones del p ciente. Quin necesit l Afresis? Los p cientes que se benefici n medi nte l tr nsfusin de productos s nguneos prov enientes de l fresis son quellos que sufren cncer o leucemi , los que prob blem ente recib n un tr spl nte y los p cientes que tienen tr stornos s nguneos t les como nemi plsic . Cmo funcion l Afresis? L s ngre se extr e del br zo del don nte tr vs de un conexin estril, que l dir ige un comp rtimiento centrfugo ubic do dentro de un equipo sep r dor de clul s. El equipo centrifug l s ngre p r sep r r l s pl quet s de los otros component es. L s pl quet s se recogen y los dems componentes se restituyen l don nte por

o CONCENTRADO DE PLAQUETAS: Son prep r dos por centrifug cin, p rtir de un unid d de s ngre complet . Volumen: 30 50 cc Contienen: 5.5 x 10 10 pl quet s. Conserv cin: Temper tur mbiente (20-24c) en git cin continu 2. CONCENTRADOS DE PLAQUETAS: indic ciones o Contr indic cin: o En prpur trombtic trombocitopnic y trombopeni inducid o por hep rin . V lor r en trombopeni inmune. o Indic ciones: o Segn cifr de pl quet s y situ cin clnic . Tr nsfusin s: o PRUEBAS PRETRANSFUCIONALES L metodolog de l s prueb s pretr nsfusion les de comp tibilid d v r segn los rec ursos del servicio de tr nsfusin y l urgenci del c so, unque de cuerdo con l norm ofici l mexic n siempre debe incluirse l tcnic de l ntiglobulin hum n como mnimo. L s tcnic s en medio proteico y con enzim s proteoltic s pueden ser t iles p r l distincin de l especificid d de un nticuerpo.3 Intern cion lmente se h n est blecido los siguientes procedimientos: Solicitud de producto y d tos relev ntes del receptor. Identific cin y coleccin de l s muestr s s ngune s del receptor. Estudios y prueb s del don dor. Determin cin del grupo ABO y RHo (D) del receptor. Deteccin de nticuerpos irregul res. Seleccin de componentes ABO y Rho (D) propi dos p r el receptor. Comp r cin entre result dos ctu les y el histori l de l s prueb s tr nsfusion les re liz d s con nteriorid d. Prueb s cruz d s Prueb m yor : se utiliz n dos got s de suero del receptor ms un got de eritrocitos l v dos del don dor. Prueb menor: dos got s de suero o pl sm del don dor ms un got de eritrocitos del

Son inofensiv s l s don ciones de pl quet s? S. C d don cin se h ce b jo l estrict supervisin de person l c p cit do, observ ndo l don nte minucios mente lo l rgo de todo el proceso. L don cin no disminuye mucho el nmero de pl quet s en el cuerpo del don nte, y l s pl quet s don d s son reempl z d s en menos de 48 hor s. Es imposible contr er SIDA o lgun otr enfermed d vir l c us de l don cin de pl quet s. Sin est prctic , ser imposible en lgunos p cientes sostener en el tiempo el po yo tr nsfusion l de concentr dos pl quet rios, sobre todo en p cientes de grupos s nguneos de b j frecuenci o en quellos que se h n sensibiliz do ntgenos pl quet rios ( ntiHLA o especficos), h cindose refr ct rios l s tr nsfusiones de pl quet s. Siempre que se recolect n componentes por fresis, el don nte debe otorg r su con sentimiento inform do. TRANSFUSION DE HEMODERIVADOS

el otro br zo. L don cin dur entre 1 y 2 hor s. El sep r dor celul r es un sistem cerr do y estril, que emple s y equipos desc rt bles de nico uso.

guj s desech ble

receptor. Autotestigo: un got de eritrocitos del receptor ms dos got s se suero del receptor. L concentr cin de l s clul s debe ser de 2.5 3 %. A menos que exist un urgente necesid d de s ngre, el suero o pl sm del receptor L concentr cin de l s clul s debe ser de 2.5 3 %. A menos que exist un urgent e necesid d de s ngre, el suero o pl sm del receptor, debe ser sometido prueb cruz d con los eritrocitos del don nte ntes de l tr nsfusin de componentes eritrocit rios. L signific cin de un prueb cruz d r dic en el co ntrol fin l de l comp tibilid d ABO entre el don nte y el receptor. Interpret cin de l deteccin de nticuerpos y prueb s cruz d s v Deteccin de nticuerpos neg tiv , prueb cruz d comp tible L m yor de l s muestr s sometid s prueb present deteccin de nticuerpos neg tiv y prueb cruz d comp tible con l s unid des seleccion d s. Sin emb rgo, un deteccin de nticuerpos neg tiv no g r ntiz que el suero se encuentre exento de nticuerpos eritrocit rios clnic mente signific tivos; slo indic que no contie ne nticuerpos re ctivos con l s clul s de l prueb de deteccin medi nte l s tcnic s emple d s. T mpoco un prueb cruz d comp tible g r ntiz un supervivenci eritrocit ri n orm l, por ello,debe re liz rse conjunt mente con un t miz p r nticuerpos o co n otr tcnic p rte de l solucin s lin , como l lbmin .4 L deteccin de nticuerpos libres en suero se re liz enfrent ndo el suero del re ceptor o p ciente con eritrocitos de fenotipo conocido v Deteccin de nticuerpos positiv , prueb s cruz d s incomp tibles L deteccin de nticuerpos y l s prueb s cruz d s, o mb s, pueden ser positiv s c us de lo nticuerpos, uto nticuerpos, inter cciones dvers s con re ctivos y form cin de roule ux. El problem debe ser identific do y resuelto ntes de en treg r l s ngre p r tr nsfusin. Cu ndo h y presentes lo nticuerpos inesper dos , l prueb de deteccin de nticuerpos suele ser positiv , pero l frecuenci del ntgeno influye sobre l c ntid d de prueb s cruz d s incomp tibles. Cu ndo l deteccin de nticuerpos es positiv , l especificid d del o los nticue rpos debe ser identific d y us rse el ntisuero correspondiente p r confirm r que l os eritrocitos de unid des comp tibles por prueb s cruz d s c recen del correspo ndiente ntgeno. Altern tiv mente, l s unid des de don ntes se puede someter prim ero l deteccin de ntgenos con el ntisuero correspondiente y seleccion r unid des neg tiv s p r l s prueb s cruz d s. No es neces rio confirm r l usenci d e ntgeno si el nticuerpo del p ciente es nti-M, N, P, Le o Leb, menos que se re ctivo 37 C. Si h y mltiples nticuerpos o un nticuerpo que re ccion con un ntgeno de lt i ncidenci , o si el nticuerpo est presente en concentr ciones muy b j s, debe us rse tcnic s especfic s como elusin, bsorcin o l combin cin de l s mism s. Es muy import nte disponer de l histori clnic del p ciente, l cu l debe conte ner di gnstico, histori tr nsfusion l, ntecedentes ginecoobsttricos (mujeres), s i el p ciente h present do re cciones tr nsfusion les, fech de l ltim tr nsfu sin, s como d tos de l bor torio que permit n tener un p nor m p r l resolucin del problem .

Algunos problem s y sus soluciones son los siguientes: 1. L s clul s del p nel de eritrocitos de fenotipo conocido no tienen el ntgeno. Los p neles extr njeros c recen de clul s con ntgen o Di , frecuente en l pobl cin mexic n (6.9 %); se sugiere us r un p nel que conteng los ntgenos de l pobl cin estudi d . 2. L concentr cin del nticuerpo es muy b j y slo se detect con clul s fresc s, ejemplo: nti-Duffy y nti-Kidd, que present n fenmeno de dosis. L solucin consiste en h c er fenotipos eritrocit rios del p ciente y repetir l investig cin de nticuerpos co n el doble del volumen de suero en estudio (cu tro got s). y con el uso de tcnic s ms potentes: bromelin p r el Kidd y prueb de LISS p r Kidd y Duffy. Conclusin L s prueb s pretr nsfusion les muestr n un p nor m mplio de los ntgenos y nti cuerpos que puede tener un individuo. Aunque primer vist p recier que se tr t de un tem muy conocido p r quien re liz prueb s pretr nsfusion les, es import nte que se tomen en cuent los p sos y p rocedimientos por re liz r, con nf sis en el control de c lid d. En l s prueb s c ruz d s incomp tibles es cruci l el cuid do en todo el estudio del p ciente y en l correct interpret cin de los result dos; no debe perderse de vist que en l s tcnic s bsic s existen much s limit ciones, por ello se combin n v ri s metodolo g s p r mejor r l segurid d y efic ci de l s tr nsfusiones. TIPOS DE ANTICOAGUALENTES PARA LA CONSERVACION DE LA SANGRE M nipul cin y proces miento de l muestr Muestr s de s ngre, un vez que se tiene l muestr p r n liz r est se tiene que dirigir l l bor torio correspondiente, el tr nsporte de l muestr es un proceso delic do, debido que l s clul s s ngune s son frgiles. L s muestr s tienen que lleg r en perfecto est do, etiquet d s y en el tubo decu do. P r eso l muestr se tiene que tr t r con ntico gul ntes Antico gul ntes, son compuestos que evit n l co gul cin de l s ngre que se utiliz n p r poder obtener el pl sm o t mbin p r poder m ntener l s ngre tot l. Tiene que cumplir lgun s c r cterstic s: No debe interferir en el est do fisiolgico ni en el morfolgico de l s clul s, y dems tiene que permitir que se pued retr s r el nlisis de l muestr . De form gener l un muestr no debe est r ms de 24 hor s en el refriger dor 4C. Tipos de ntico gul ntes: Citr to sdico, este ntico gul nte impide que el C se ionice, el C es indispens ble p r l co gul cin, el citr to se utiliz en los tubos de hemost si en l siguiente concentr cin 1V de citr to p r 9V de s ngre, t mbin se utili z el citr to en l VSG, se utiliz 1V de citr to p r 4V de s ngre T pn zul: Tubo estril con ntico gul nte citr to de sodio (1/9) T pn negro: Tubo estril con ntico gul nte citr to de sodio (1/4) EDTA, (Etilen di mino tetr ctico), se encuentr en form de s l disdic o en form de s l tripotsic , ct como quel nte del C , es decir que se fij l c lcio y s impide que el C

Prueb cruz d

incomp tible nticuerpos irregul res neg tivos

pued intervenir en los procesos de co gul cin, los tubos que contienen EDTA se utiliz n p r recuentos celul res porque el EDTA respet l morfolog de l s clul s, es c p z de gu nt r l s ngre dur nte 24 hor s 4C, un exceso de EDTA provoc c mbios degener tivos y destruye l s pl quet s. Se recomiend que l s ngre recogid con EDTA se n lice ntes de 2 hor s porque sino l s pl quet s se glutin n, se recomiend un concentr cin de EDTA 1,5 mg/ml de s ngre. Hep rin , es un ntico gul nte fisiolgico, impide que l protrombin se tr nsforme en trombin , p r que exist l co gul cin tiene que h ber fibrin , y p r que est se pued form r se necesit fibringeno, pero el fibringeno necesit l form cin de l trombin y est su vez necesit l presenci de protrombin . L hep rin se puede encontr r en form sdic o de litio, l hep rin conserv muy bien l morfolog de l s clul s, sin emb rgo no sirve p r re liz r frotis s nguneos porque l s clul s cogen un color zul do que dificult despus l observ cin. L concentr cin utiliz d es de 15-20 l/ ml de s ngre, se utiliz en g sometr s. Fluoruro, se utiliz porque es muy buen conserv nte de l glucos . ACD, se utiliz en b ncos de s ngre y t mbin cu ndo se quiere re liz r un estudio met blico de los hem tes. Est form do por cido ctrico, citr to sdico, dextros y gu destil d y se utiliz 1 V de ACD por 4 V de s ngre. Tubos de recogid de muestr s A temper tur mbiente l s re cciones biolgic s tr nscurren 4 veces ms rpido que como se h r en el interior del org nismo, l s muestr s de s ngre se conserv n bien si no tr nscurre ms de un hor desde l extr ccin, pero si el nlisis se v demor r tiene que ser refriger d 4C, no se puede refriger r l s ngre que se v y utiliz r p r obtener luego suero o pl sm , en esos c sos h y que h cer primero l sep r cin y luego refriger r. Tubos de hemogr m , que se utiliz n p r recuentos celul res, se identific n porque tiene un t pn m lv (EDTA K3). Tubos de hemost si , son tubos que contienen citr to en porcin 1/9, l s prueb s de hemost si se h cen en pl sm y p r eso h y que centrifug r ntes de que tr nscurr 1 hor desde l extr ccin, un vez que se obtiene el pl sm se puede congel r (-20/-40 C), sino se congel l s determin ciones no deben super r l s 6 hor s de esper y se pondr en un refriger dor. Tubos p r V.S.G., t pn negro, citr to Tubos p r bioqumic , t pn m rillo, llev un gel sep r dor. L s determin ciones se h cen en suero y sino es posible en pl sm . Se utiliz n quellos tubos que tienen gel por su comodid d, porque l centrifug r el gel se coloc entre l s clul s y el suero y no dej que se

mezcle, esos tubos con gel permiten conserv r l s ngre h st 48 hor s Proces miento de muestr s de hemost si , hem timetri y bioquimic ) P r hemost si , l s muestr s de s ngre p r l determin cin de hemost si deben lleg r l l bor torio en el tubo con t pn zul, que llev r como ntico gul nte citr to sdico, h y que segur rse de que no p se ms de 1 hor desde l extr ccin p r obtener suero, entonces se somete centrifug cin 1500 G dur nte 15 minutos. Se puede obtener de estos tubos pl sm pobre en pl quet s, un vez que se re lice l sep r cin l n ltic se tiene que h cer ntes de 6 hor s, sino se tiene que congel r. b) P r hem timetri , l s muestr s deben est r en un tubo de t pn m lv con EDTA, l s determin ciones deben re liz rse en dos hor s despus de l extr ccin. De este tubo se h cen los siguientes p rmetros: recuentos celul res, determin cin hem tocrito, determin cin Hb, ndices corpuscul res, recuentos de reticulocitos. No se puede h cer l VSG. c) P r bioqumic , l s muestr s v n p s r por 3 et p s precentrifug cin, centrifug cin y postcentrifug cin. Precentrifug cin: l s determin ciones se h cen en suero o pl sm , pero no en s ngre tot l. L s muestr s deben ser refriger d s porque se podr lter r lgunos iones N + K+. Centrifug cin: l s ngre debe perm necer en su recipiente h st que comience su proces miento, si lo que queremos es obtener pl sm entonces h y que centrifug r l muestr ntes de que p se 1 hor despus de l extr ccin. L velocid d debe ser entre 850 y 1000 G, siempre en el recipiente origin l. Si el tubo no tiene gel h y que dej r co gul r l s ngre y luego centrifug r, entonces se puede h cer menor velocid d, nunc se puede centrifug r lostubos biertos y c d vez se us n ms los tubos con gel. Postcentrifug cin:h y que est r seguros de que el suero est libre de clul s, si hemos utiliz do tubos con gel, el gel v impedir que h y es mezcl , sino se h n emple do tubos con gel se tiene que sep r r y luego y se pueden h cer l s determin ciones TECNICAS SSEROLOGICAS Perfil p r el estudio de l s Hep titis Vir les L s hep titis producid s por los virus A, B, C, Delt , y E se di gnostic n c si exclusiv mente medi nte tcnic s serolgic s unque en el c so de lgun s de ell s p ued re liz rse l deteccin de l p rtcul vir l, sus ntgenos o su DNA o RNA. Est s determin ciones, se denomin n m rc dores serolgicos y de su estudio podemos ext r er d tos sobre l presenci o no de infeccin por lguno de ellos, l situ cin bi olgic del virus en rel cin con el husped y prob blemente el pronstico de l enferme d d. P r l hep titis B el m rc dor por excelenci es el conocido como nticuerpo fr ente l nucleocpside vir l ( nti- HBc). En nuestr experienci , y d d s l s c r cterstic s biolgic s de este nticuerpo (v se c pitulo correspondiente l s hep t itis vir les) y de su cintic , su usenci desc rt que el proceso heptico se deb

ido un hep titis B y por t nto no es neces rio el estudio de ningn m rc dor suplement rio. En el c so de que su deteccin se positiv deberemos re liz r estudios suplement rios p r l determin cin de ntgenos vir les (Ag-HBs, Ag-HBe, DNA) p r poder fij r el e st do replic dor del virus e infeccioso del p ciente. L cur cin y proteccin se s egur por l p ricin de nticuerpos frente l ntgeno de envoltur ( nti-HBs) sie mpre que su concentr cin supere l s 10-25 UI/mL. En el c so de l v cun cin ste ser el nico m rc dor positivo y que el p ciente no p deci l enfermed d y por t nto s u nti-HBc serneg tivo. Tr s l v cun cin, un vez que se h n conseguido nticuerp os por encim de l t s de proteccin p rece que no es neces ri un nuev rev cu n cin. Los estudios sobre l inmunid d celul r en estos p cientes s lo demuestr n present ndo un gr n estmulo clon l nte un nuev exposicin. L investig cin del virus delt , en nuestro medio, c si deber qued r restringid los p cientes con ntecedentes de diccin drog s por v p renter l (ADVP) siend o excepcion l l coinfeccin o superinfeccin en otro tipo de enfermos. El di gnstico de l Hep titis por virus C result ms problemtico debido fund ment l mente l s b j s t s s de viremi que este virus produce y l retr so en l pro duccin de nticuerpos. Existen un serie de protocolos o lgoritmos di gnsticos so bre los que no existe un consenso gener liz do. Por un l do tenemos l posibilid d de detect r conjunt mente nticuerpos frente diferentes proten s vir les (es tructur les y no estructur les) medi nte l tcnic de ELISA D do que los ntgenos emple dos en l prueb son en gener l de ori gen recombin nte o sinttico existe l posibilid d de obtener result dos f ls ment e positivos por lo que l positivid d de un prueb p r nticuerpos deber ser co nfirm d de lgun otr form . En gener l esto se re liz estudi ndo por sep r d o l respuest inmune c d un de l s proten s o ntgenos vir les (RIBA, INNOLIA , MATRIX, etc.), p r que l re ctivid d se debid lguno de ellos. L presen ci de nticuerpos frente este virus no presupone ni proteccin ni cur cin de l enfermed d. Curios mente pueden coexistir nticuerpos circul ntes p r el virus y sus ntgenos. P r l demostr cin de l presenci del virus se recurre l dete ccin de su ARN medi nte tcnic de mplific cin gentic . Recientemente se h postul d o l import nci que p r el tr t miento tiene el conocer el tipo de virus infec t nte y l c rg vir l, de t l form que midiendo estos p rmetros lo l rgo del tr t miento podremos ev lu r l evolucin de l enfermed d heptic . El virus E se d i gnostic igu lmente medi nte l deteccin de nticuerpos frente l mismo. Perfil serolgico p r Virus de l inmunodeficienci dquirid P r el di gnstico de est infeccin se emple en primer lug r un prueb de ELISA p r l deteccin de nticuerpos. Est s prueb s se f bric n con dos diseos: un s so n indirect s y otr s competitiv s. L s primer s son lt mente sensibles y son l s emple d s rutin ri mente en los b ncos de s ngre y en los l bor torios de di g nstico y l s segund s, menos sensibles pero muy especfic s, pueden emple rse p r confirm r los result dos positivos obtenidos con l s prime r s. Tod muestr con re ctivid d p r est s prueb s deber confirm rse con otr m uestr de suero solicit d l p ciente y si es igu lmente re ctiv medi nte l r e liz cin de un prueb de confirm cin tipo Western Blot o Innoli . Un vez que el p ciente h sido di gnostic do l serolog , dur nte el seguimiento clnico del p ciente, se reducir l determin cin de ntgeno p24 y los nticuerpo s frente ell ( nti-p24). No existen otros m rc dores tiles p r este fin. Exis te l creenci que h y much s re cciones neg tiv s p r nticuerpos y que puede tr t rse de p cientes en f se de seroconversin (f se de vent n ). En nuestr expe rienci los result dos obtenidos con l s prueb s de ELISA tienen un v lor predic tivo muy elev do lo que h ce injustific d l bsqued de ntgeno en todos los enfe rmos seroneg tivos unque stos teng n f ctores de riesgo. Pens mos que nic mente e n p cientes seroneg tivos, con f ctores de riesgo y sntom s clnicos comp tibles co n l primoinfeccin l investig cin del ntgeno p24 puede est r justific d y obtene r lgn rendimiento. En los c sos de ccidentes con instrumentos o lquidos cont min dos con estos virus creemos que l seroneg tivid d repetid lo l rgo de 6-12 meses desc rt l infeccin. En este momento podemos pl nte rnos l necesid d de i nvestig r ntgeno p24 en s ngre de don nte de rg nos.

TECNICA DE CHAGAS PARA LA IDENTIFICACION DE PARASITOS L enfermed d de Ch g s, t mbin conocid como trip nosomosis meric n , es un pro blem de s lud pblic en 17 p ses l tino meric nos, donde es endmic . Debido su imp cto econmico, p rtir de 1993 el B nco Mundi l l consider como l enfermed d p r sit ri ms gr ve en Amric .1 El gente etiolgico de l enfermed d de Ch g s es el protozo ri o p rsito Tryp nosom cruzi; los vectores n tur les de este p rsito son chinches d el gnero Tri tom . Al liment rse y excret r heces infect d s, l chinche tr nsmi te l husped m mfero este gente p tgeno, lo que permite que T. cruzi penetre tr vs de l s herid s o mucos s. L tr nsmisin vectori l es l form norm l de infeccin entre los nim les y es l ms comn en el hombre, pero se puede dquirir t mbin med i nte tr nsfusin s ngune o tr nspl nte de rg nos de person s infect d s, s como po r v congnit y, ms r r mente, por l ingestin de sust nci s cont min d s o por l i nfeccin ccident l en el l bor torio.2 De st s, l infeccin por tr nsfusin s ngune e s el segundo mec nismo de tr nsmisin despus de l vectori l, debido l incremento de l migr cin de person s de l s zon s rur les endmic s zon s urb n s donde no existen los tri tominos,3-5 e incluso zon s rur les no endmic s. De m ner que l trip nosomosis meric n es otr de l s enfermed des soci les o de l pobrez , y en Mxico se podr consider r como un riesgo de s lud emergente.6 El di gnstico serolgico de l trip nosomosis meric n en su f se crnic es oblig d o, y que es difcil l demostr cin del p rsito en circul cin o en los tejidos;6 de i gu l m ner result difcil est blecer un di gnstico confirm tivo dur nte l s f ses sintomtic s o con cu dros clnicos leves, por lo que es import nte l est nd riz cin de l s prueb s serolgic s p r demostr r los nticuerpos contr T. cruzi. 8 L Org niz cin Mundi l de l S lud (OMS) y l Org niz cin P n meric n de l S lud (OPS) recomiend n que se utilice ms de un procedimiento serolgico p r reducir el error en el di gnstico.10 L confirm cin de un c so indetermin do de trip nosomos is meric n por di gnstico serolgico se est blece cu ndo h y l menos dos prueb s serolgic s positiv s.11 El reconocimiento de don dores de s ngre seropositivos T. cruzi es recomend do como un prueb de rutin en los b ncos de s ngre, pero el problem prctico que enfrent n los b ncos de s ngre en el t miz je de individ uos ch gsicos es el porcent je t n v ri do de muestr s que present n re ctivid d lrededor del v lor de corte. Por t nto, p r el t miz je de don dores de s ngre , se recomiend tener un v lor de corte lo ms b jo posible p r segur r l lt sensibilid d, y de est form no tener un gr n nmero de f lsos positivos. P r in crement r l eficienci de l prueb se deben utiliz r fr cciones pur s inmunodo min ntes de T. cruzi o proten s recombin ntes.12 Se obtuvieron sueros de 500 don dores de s ngre del B nco de S ngre del HGRO del IMSS de Oriz b , Ver cruz. Dentro de los criterios de seleccin se incluyeron per son s entre 18 y 65 os de ed d que present r n un seroneg tivid d l virus de l hep titis B (HBV), de l hep titis C (HCV), l ntgeno de superficie del virus de l hep titis B (HBsAg), l Brucell bortus (BrA), l VDRL y l virus de inmunodeficienci quirid (VIH). L s muestr s fueron obtenid s entre los meses de octubre de 2001 enero de 2002 ; los don dores que cept ron p rticip r se les plic un cuestion rio clnico-epi demiolgico sobre d tos person les, hbitos y costumbres, tipos de viviend , m nifes t ciones clnic s y reconocimiento de los tri tominos. Obtencin de sueros L obtencin de l s muestr s de los don dores de s ngre fue colect d de l ven p erifric medi nte el sistem V cut iner. De cuerdo con l s encuest s re liz d s y con los estnd res est blecidos por el b nco de s ngre, de l s 500 muestr s slo s e obtuvieron 420 sueros de hemodon dores p r l re liz cin del estudio. El suero fue sep r do por centrifug cin 1 200 x g dur nte 10 minutos, licuot do en tub os eppendorf y congel do -20 C h st su uso. Expresin y purific cin de l proten MBP::Hsp70 El fr gmento TcHsp70 fue obtenido de l siguiente m ner : p rtir de un biblio tec de cDNA de m stigotes de T. cruzi en el vector l mbd gt11 se obtuvo l cl on TcHsp70 medi nte el t miz je con un pool de sueros de p cientes ch gsicos.5 P r l obtencin de l proten recombin nte MBP::Hsp70 se clon el fr gmento de cDNA

TcHsp70 en el sitio Eco RI del vector de expresin pMAL-C2 (New Engl nd BioL bs) d ndo lug r l plsmido pMAL-Hsp70. Este plsmido se utiliz p r tr nsform r b cteri s E. coli de l cep DH5- . Fin lmente, l proten recombin nte MBP::Hsp70 (125 kD ) fue inducid y purific d de cuerdo con l s instrucciones del proveedor.14 Prep r cin del extr cto crudo de T. Cruzi Los p rsitos (epim stigotes) de l cep Y de T. cruzi se cultiv ron y prop g ron en un medio (LIT), suplement do con 10% de suero fet l bovino (GIBCO). Los p rsitos en f se l og rtmic fueron colect dos por centrifug cin, l p still obtenid se resuspendi e n PBS (N Cl 137 mM, KCl 2.7 mM, N 2HPO4 4.3 mM y KH2PO4 1.4 mM, pH 7.4) y fueron sometidos ciclos de congel cin-descongel cin p r lis r los p rsitos. L conce ntr cin de proten fue determin d por el mtodo de Br dford. T miz je de sueros Se determin l presenci de nticuerpos nti-T cruzi en l s 420 muestr s de suero emple ndo como prueb t miz l tcnic de ELISA y utiliz ndo como ntgeno l proten recombin nte MBP::Hsp70. Se utiliz ron pl c s de fondo pl no (Cost r) l s cu l es se recubrieron con l proten MBP::Hsp70 un concentr cin de 2 g/ml en mortig u dor de c rbon tos 0.1 M, pH 9.6, y se incub ron dur nte tod l noche 4 C. Se desc rt el ntgeno no unido y se bloque ron l s pl c s con 200 l de PBS l s cu les conten n 5% de leche descrem d y fueron incub d s dur nte dos hor s 37 C. Posteriormente se incub ron l s pl c s con 50 l de c d uno de los sueros de los hemodon dores un dilucin fin l de 1:50 por triplic do. Se l v ron cu tro veces con PBS (N Cl 137 mM, KCl 2.7 mM, N 2HPO4 4.3 mM y KH2PO4 1.4 mM, pH 7.4), que conten 0.05% de Tween 20 (PBST). Despus de los l v dos, se greg c d uno de los pozos 50 l de un nticuerpo c br ntihum no (Zymed) copl do peroxid s un dilucin de 1:1 000 en PBST y fue incub do dur nte un hor temper tur mbient e. Despus de ocho l v dos y uno dicion l nic mente con PBS se dicion ron 100 l de l solucin sustr to (citr to de sodio 100 mM pH 4.2, H2O2 0.03%, que conten 1mg/ml de ABTS [2, 2, - zino-bis(3-ethylbenzthi zoline)-6-sulfonic cid] (Zymed); despus de 10 minutos, l s pl c s fueron led s 415 nm en un lector de ELISA (Multysc n L b System). L os sueros positivos fueron sometidos un segundo t miz je utiliz ndo como ntgen os un extr cto crudo de epim stigotes de T. cruzi (ECE) y l proten MBP::Hsp70. El v lor de corte (vc) p r este ens yo se est bleci medi nte l medi obtenid d e un muestr de 25 sueros de sujetos s nos ms cu tro desvi ciones estnd r. P r e l c so de l proten MBP::Hsp70, el v lor de corte se fij en 0.230 U de densid d pt ic (DO), mientr s que p r el ECE, en 0.215 U de DO. Los sueros que rroj ron r esult dos positivos medi nte l prueb ELISA, fueron proces dos p r l determin cin de nticuerpos contr T. cruzi emple ndo otr s dos prueb s serolgic s diferen tes (WB y IFI). Western blot con sueros de hemodon dores (WB) 200 g de l proten MBP::Hsp70 y de ECE de T. cruzi (cep Y) fueron sep r dos elec trofortic mente en geles de poli cril mid -SDS l 10% en presenci de un mortigu dor de muestr (Glicerol 2%, SDS 4%, Tris-HCl 50 mM pH 6.8, b-ME 200 mM, zul d e Bromofenol 0.2%),15 y tr nsferidos p pel de nitrocelulos (BIO-RAD) p r su inmunodeteccin.16,17 Los sueros de c d individuo fueron utiliz dos como nticuer pos prim rios un dilucin de 1:100 en TBS-T (N Cl 150 mM, Tween 20 0.05 %, lech e descrem d 2%, y Tris-HCl 10 mM pH 7.4). Los nticuerpos unidos l membr n fueron detect dos utiliz ndo un segundo nticuerpo IgG c br ntihum no conjug do fosf t s lc lin (Pierce) un dilucin de 1:5 000 y l uego revel do con NBT (nitro zul de tetr zolium) y BCIP (5-bromo-4-cloro-3-indol fosf to) (sigm ). L s muestr s fueron consider d s positiv s cu ndo se observ por lo menos un b nd de reconocimiento diferente l del control de segundo nticuerpo (2 Ab). Ens yo de inmunofluorescenci indirect (IFI) Los sueros que rroj ron result dos positivos medi nte l prueb de ELISA fueron proces dos por IFI de cuerdo con lo descrito por R mos-Echev rr y col bor dore s.18 Brevemente, se coloc en un port objetos un suspensin de epim stigotes de l cep , se fij ron los p rsitos, y los sueros de los don dores y los controles fuer on diluidos 1:50 en PBS e incub dos por 30 minutos en cm r hmed . Posteriormente,

los port objetos fueron l v dos e incub dos con el segundo nticuerpo nti-IgG hum no conjug do fluorescen un dilucin de 1:20 dur nte 30 minutos 37C. Desp us de l incub cin, los port objetos fueron observ dos en un microscopio de epiflu orescenci . L presenci de un fluorescenci verde sobre los p rsitos fue consid er d como prueb positiv . L s muestr s positiv s se m rc ron con un +/+++ de cuerdo con el gr do de fluorescenci observ do, utiliz ndo como punto de refere nci un control positivo. En todos los ens yos serolgicos se utiliz como control positivo un pool de sueros de p cientes ch gsicos y como control neg tivo sueros de hum nos norm les. inmunologi b sic y clinic Ir pgin 1 ... 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ... 27 Previo | Prox. Ver como pgin individu l Ver como multi-pgin s Cite este ens yo APA (2011, 03). B nco De S ngre. Buen sT re s.com. Recuper do 03, 2011, de http://ww w.buen st re s.com/ens yos/B nco-De-S ngre/1734894.html MLA "B nco De S ngre" Buen sT re s.com. 03 2011. 03 2011 <http://www.buen st re s.co m/ens yos/B nco-De-S ngre/1734894.html>. CHICAGO "B nco De S ngre." Buen sT re s.com. 03, 2011. consult do el 03, 2011. http://ww w.buen st re s.com/ens yos/B nco-De-S ngre/1734894.html. Documentos S lv dos Usted no tiene ningn tr b jo gu rd do en este momento. Ens yos rel cion dos con Norn s Qye Rigen El B nco De S ngre ...el b nco de s ngre y el puesto de s ngr do, dems de: El m nejo y... 2 p gesDec 2009 Pr ctic s De B nco De S ngre ... l 0.85 %, de los que se obtiene di ri mente en el b nco centr l de s ngre. 5 ml... 5 p gesJ n 2010 B nco De S ngre ... dministr r l s ngre don d l p ciente que l requier . 2.- Activid des... 41 p gesM r 2010 B nco De S ngre ...en los servicios de medicin tr nsfusion l y b ncos de s ngre p r l ... 49 p gesJul 2010 B nco De S ngre. Como Se Tr b j En Uno? ...de l NOM-003-SSA2 que especific l s l bores cotidi n s en un b nco de s ngr e... 34 p gesAug 2010