LABORATORIO DE QUMICA ANALTICA III PRACTICA 6 IDENTIFICACIN DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA. 6.

1 OBJETIVO Conocer la tcnica de separacin en capa fina y aplicarla para separar los pigmentos de un vegetal. 6.2 INFORMACIN GENERAL La cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil que presenta distintas variantes. En toda separacin cromatografa hay dos fases (solida, liquida o gas) una mvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto intimo. La muestra se introduce en la fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla a separar se invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separacin. Si un componente esta la mayor parte del tiempo en la fase movil el producto se mueve rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho mas lenta. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa. La fase mvil ser un disolvente apolar (mezcla de ter de petrleo/acetona/benceno en proporcin 85/10/5). La fase estacionaria, de naturaleza polar, ser el agua adsorbida en el papel de celulosa utilizado como soporte. La fase mvil ascender por el papel sin mezclarse con el agua, al tiempo que los pigmentos se irn separando en funcin de su polaridad. Los pigmentos ms polares se retendrn ms en la fase estacionaria, mientras que los ms apolares avanzarn ms rpido junto con la fase mvil. La movilidad de cada compuesto respecto al frente del disolvente tiene un valor caracterstico, en unas condiciones experimentales determinadas, que se conoce como coeficiente o factor de reparto (Rf).

Rf = Xp/Xd Xp= distancia alcanzada por el pigmento Xd= distancia alcanzada por el disolvente

Mtodo 1. Extraccin: en el papel de celulosa se dibujan 2 lneas con lpiz. Una a 2 cm de uno de los extremos y otra a 1 cm del otro extremo. 2. Se Cortar una hoja de espinaca en tiras estrechas. Colocar un trozo de hoja y machacarla sobre una superficie plana con las pinzas. Retirar los restos de hoja. Colocar una mancha sobre la lnea

situada a 2 cm del papel de celulosa, repetir el proceso, hasta tener una mancha oscura de pigmentos en el papel.

6.3. MATERIALES Y REACTIVOS Reactivos Papel de silicagel G60 100 ml ter de petrleo/acetona/benceno en proporcin 85/10/5. 3 vasos de precipitado de 100 ml 1 plancha de calentamiento Tubos capilares

6.4 PROCEDIMIENTO Se concentra la solucin obtenida de la extraccin de pigmentos anterior por evaporacin a bao maria hasta obtener un mililitro. Despus se enfra y tapa la muestra para su posterior aplicacin sobre la placa. Entonces se divide la placa en 8 columnas con la ayuda de una punta de lpiz y cada una de ellas se aplica (parte inferior de la placa) una pocin de cada pigmento, mediante un capilar procurando que cada mancha no forme un circulo de mas de 5 mm de dimetro. Adems se aconseja que la muestra problema se aplique en la columna central. Se deja evaporar el solvente de la muestra sobre la placa y se procede a efectuar el corrimiento, colocando la placa dentro de una cmara de desarrollo previamente saturada con la solucin eluyente. La placa se conserva dentro hasta que el lquido llegue a la lnea lmite de corrimiento (marcada con lpiz desde el principio). Entonces se retira la placa de la cmara y se deja que se escurra con cuidado. Una vez seca la placa se observa el nmero de pigmentos que se presenta en la muestra problema y se mide la distancia recorrida por el lquido de desarrollo y la recorrida por cada mancha coloreada, se toma como referencia el lugar de aplicacin de cada mancha. Hay que calcular el Rf correspondiente a cada mancha. 6.5 CALCULOS Y RESULTADOS Entregar un dibujo que muestre los resultados obtenidos, el nmero y tipo de cada colorante presente en la gelatina y el Rf de cada colorante estndar y de los colorantes que presente la muestra problema. Investigar: La formula qumica y los usos comunes de los siguientes pigmentos vegetales. Calcular el RF.