Universidade Federal de So Joo del Rei Campus Alto Paraopeba

Prtica 1 Preparo de Curvas Analticas

Mayara Sousa 0845057-9 Ndia Alves Nery Balbino 0845062-5

Relatrio apresentado professora Ana Maria de Oliveira como uma das exigncias da disciplina Anlise Instrumental.

Ouro Branco Maro de 2011

Preparo de curvas analticas 1. Resumo A prtica consistiu no preparo de curvas analticas para a determinao da concentrao de amostras de permanganato de potssio. Para isso, realizou-se a padronizao externa, a padronizao interna e o mtodo da adio de padro. Com a equao da reta gerada pelo grfico, C versus A, pode-se ento calcular a concentrao da amostra desconhecida. Erros de clculo no incio da marcha analtica comprometeram a realizao dos mtodos, limitando sua exatido. Os resultados no foram satisfatrio, pois os mtodos apresentaram limitaes que ficaram ainda mais agravadas devido aos erros. 2. Introduo Os trs tipos mais comuns de calibrao de mtodos analticos incluem a padronizao externa, o mtodo da adio de padro e a padronizao interna [1]. Para tanto se utilizam curvas de calibrao, que representam a relao entre a concentrao dos padres utilizados e/ou a absorbncia ou a transmitncia medidas. O sucesso de uma curva de calibrao depende da exatido com que so conhecidas as concentraes dos padres e quo prxima a matriz dos padres est da matriz das amostras a serem analisadas [1,2]. O mtodo de padronizao externa utiliza solues de concentraes conhecidas preparadas a partir de um padro, que so introduzidos no instrumento e assim registra-se a resposta instrumental. Os dados resultantes so colocados em um grfico com a resposta do instrumento versus a concentrao do analito. Utilizando este grfico ou a equao da curva resultante, pode-se calcular a concentrao da substncia na amostra [1,3]. A padronizao interna consiste na preparao das solues padro de concentraes conhecidas da substncia de interesse, s quais se adiciona a mesma quantidade conhecida de um composto chamado padro interno. A amostra tambm analisada aps a adio da mesma quantidade conhecida do padro interno. A substncia usada como padro interno deve ser similar substncia a ser quantificada, no reagir com a substncia ou outro componente da matriz e no fazer parte da amostra. A calibrao envolve colocar em um grfico a razo entre o sinal do analito e o sinal do padro interno em funo da concentrao do analito nos padres. Essa razo para as amostras ento usada para obter as concentraes de analito a partir da curva de calibrao [1,3].

O mtodo da adio padro consiste na adio de quantidades conhecidas de uma soluo-padro a alquotas da amostra de mesmo volume. Cada soluo ento diluda a um volume fixo antes da medida. As medidas so realizadas com a amostra original e depois com a amostra mais o padro, aps cada adio. Constri-se uma curva analtica relacionando as quantidades da substncia adicionada s amostras com as respectivas medidas obtidas [1,2]. 3. Objetivos Preparar curvas analticas por diferentes mtodos e comparar o resultado obtido entre eles. 4. Materiais, Mtodos e Instrumentos 4.1. Materiais e Reagentes Permanganato de potssio Reagentes Analticos Dinmica; Dicromato de potssio VETEC; Permanganato de potssio para uso adulto e peditrico FARMAX; Balo volumtrico de 100 mL; Balo volumtrico de 1L; Esptula; Bquer de 100 mL; Basto de vidro; Pipetas volumtricas de 5 mL; Pipeta graduada de 10 mL; Pipeta automtica de 200 L Digipet; 4.2. Instrumentos: Balana Analtica Bioprecisa FA-2104N; Espectofotmetro Biospectro SP 220. 4.3. Metodologia Inicialmente foram dissolvidos 0,1057 g de permanganato de potssio em 100 mL de gua destilada e em seguida foram transferidos para um balo volumtrico de 1L e completou-se o volume com gua destilada.

 Padronizao externa Preparou-se 50 mL de uma soluo estoque de permanganato de potssio 0,0006 mol L-1 calculou-se os volumes necessrios desta soluo para a preparao das solues padres com concentraes de 1,2 10-5 mol L-1; 2,4 10-5; 4,8 10-5 mol L-1; 7,2 10-5 mol L-1 e 1,2 10-4 mol L-1 em bales volumtricos de 100 mL. Esses volumes de soluo estoque foram adicionados a cinco bales volumtricos de 100 mL e aferidos com gua. Em seguida, pipetou-se 4 mL da soluo de permanganato de potssio preparada inicialmente, que foram transferidas para um balo volumtrico de 100 mL completandoo com gua para a diluio. Ento a amostra foi comparada visualmente para a identificao da concentrao aproximada pela tonalidade. As solues padres foram colocadas no fotmetro e ento foi realizada a leitura das suas transmitncias e absorbncias, a partir desses valores construiu-se uma curva analtica A Conc. Em seguida, a soluo diluda de permanganato de potssio foi colocada no fotmetro para a leitura da transmitncia, e ento, foi calculada a concentrao da amostra. Padronizao interna Foram preparadas as mesmas solues padres da padronizao externa, mas antes da aferio das solues adicionou-se a cada balo volumtrico 4 mL de soluo de dicromato de potssio 0,0005 mol L-1. As solues estoque de permanganato e de cromato foram colocadas separadamente no fotmetro e a leitura das absorbncias e transmitncias foi feitas. Ento se construiu a curva analtica com padronizao interna. Em seguida, pipetou-se 4 mL da soluo de permanganato de potssio preparada inicialmente, que foram transferidas para um balo volumtrico de 100 mL e adicionou-se 8 mL de soluo de dicromato de potssio 0,0005 mol L-1 e completou o volume com gua. A leitura foi realizada e determinou-se a concentrao da amostra. Adio de padro Transferiu-se 5 mL da soluo de permanganato de potssio diluda para um bquer e agitou. A absorbncia foi medida no fotmetro no pico mximo de absoro do permanganato de potssio. Transferiu-se novamente 5 mL da soluo de permanganato diluda para um bquer, adicionou-se 100 L de soluo estoque de permanganato de potssio 0,0006 mol L-1. Agitou-se e leu-se no fotmetro a absorbncia e transmitncia a

525 nm. Repetiu-se esse mesmo procedimento com a adio de 150 L e depois 200 L e fez-se as leituras. A concentrao de permanganato na amostra foi determinada por extrapolao da curva de adio de padro.

5. Resultados e discusso Com a metodologia utilizada os resultados podem ser descritos atravs de um grfico, ao qual temos uma curva analtica, representada por uma equao. Apresentam-se os valores obtidos no espectrofotmetro em uma tabela e posteriormente ser gerado o grfico conforme os dados experimentais. Inicialmente foi preparada uma soluo com uma amostra de permanganato de potssio para uso adulto e peditrico. A amostra foi pesada, e a massa medida foi:

Atravs de uma regra de trs simples calculou-se o valor da massa em mols: O volume da soluo preparada foi:

A concentrao da amostra foi obtida atravs da frmula apresentada abaixo: (1)

A partir dessa soluo, prepararam-se as amostras em que os mtodos analticos foram aplicados para a determinao da concentrao.

5.1. Padronizao externa A padronizao externa foi realizada para a determinao da concentrao de uma amostra de permanganato de potssio utilizando-se uma curva analtica. Para a construo desta foram preparadas cinco solues padro. As absorbncias e transmitncias dessas solues foram medidas a 525 nm, que o comprimento de onda em que o pico de absorbncia do permanganato de potssio mximo. Para a preparao das solues padro foi feita uma soluo estoque de permanganato de potssio 0,0006 mol L-1. Devido a erros de clculo durante a realizao da prtica a massa pesada, g, foi aproximadamente dez vezes superior a necessria, o que levou a erros na concentrao encontrada justificando, assim, a

diferena do valor esperado. Para minimizar os erros nos resultados, os volumes dos padres foram multiplicados por 9,89. Cada amostra foi colocada no fotmetro e foi feita a leitura das absorbncias e das transmitncias. As transmitncias tambm foram calculadas pela lei de Beer a fim de uma comparao com a leitura realizada no equipamento. A Transmitncia pode ser calculada atravs da lei de Beer: (2) Onde: A = Absorbncia. T = Transmitncia. Para a primeira soluo:

As medidas da absorbncia e transmitncia de cada padro, assim como os volumes necessrios para sua preparao, suas respectivas concentraes e os valores das transmitncias calculadas a partir da lei de Beer (equao 2) so apresentadas na Tabela 1. As transmitncias foram calculadas com os valores de absorbncia obtidos pelo fotmetro. Tabela 1: Concentrao das solues padro, volume da soluo estoque gasto, Absorbncia e transmitncias medida e calculada. Soluo padro de KMnO4 1 2 3 4 5 Concentrao das solues padro Volume de soluo estoque(L) Absorbncia a 525 nm Transmitncia (%) Medida Calculada

0,217 0,448 0,922 1,363 1.931

60,3 35,7 12,0 4,30 1,20

60,7 35,6 12,0 4,33 1,17

Os volumes necessrios para a preparao de cada alquota foram calculados da seguinte forma: (3)

Onde: = Concentrao da soluo estoque de permanganato de potssio = Volume a ser determinado (alquota) = Concentrao da alquota = Volume da soluo padro Para a primeira alquota tem-se:

Os demais valores foram apresentados na Tabela 1. A transmitncia e a absorbncia da amostra de concentrao desconhecida foi medido no fotmetro, tendo os seguintes valores:

De acordo com a Lei de Beer: Com os dados de Absorbncias (A) e com as concentraes (C) das solues padro foi construda a curva analtica, apresentada na Figura 1:

Figura 1: Curva analtica obtida a partir da padronizao externa. A concentrao da amostra foi calculada a partir da equao da reta obtida na curva analtica (1): Onde:

Substituindo o valor da absorbncia da amostra, temos:

Pelo

mtodo

de

mnimos

quadrados

obteve-se

equao

da

reta

com o quadrado do coeficiente de correlao A concentrao encontrada,

[2].

, a concentrao de 4 mL da

amostra diluda em 100 mL de gua. Pela equao (3) calculou-se a concentrao da amostra original, , multiplicou-se a concentrao pela ,

massa molar do permanganato de potssio obtendo assim a concentrao em

, como a soluo foi preparada em 1L temos que a massa de permanganato de potssio presente na amostra igual a:

Pode-se perceber que o clculo da concentrao da amostra na padronizao externa, a partir da equao linear da reta de tendncia em relao curva de absorbncia em funo da concentrao, mostrou-se negativo. Tal resultado pode ser explicado pela ampla margem de erro existente quando se utiliza a equao da reta de tendncia. Como ela uma equao generalizada do grfico, essa no satisfaz todos os pontos do grfico, gerando-se assim algumas discrepncias nos resultados obtidos. A padronizao externa se mostra eficiente para matrizes no complexas, isto , que no apresente efeitos de matriz. Sendo assim, devido presena de interferentes no analito o mtodo no foi satisfatrio.

5.2. Padronizao Interna Na padronizao interna a calibrao envolve colocar em um grfico a razo entre o sinal do analito e o sinal do padro interno em funo da concentrao do analito nos

padres. Essa razo para as amostra ento usada para obter as concentraes de analito a partir da curva de calibrao [1]. Um padro interno uma quantidade conhecida de um composto, diferente do analito, que adicionada amostra desconhecida. Padres internos so teis quando a quantidade de amostra analisada no reprodutvel, quando a resposta do instrumento varia de anlise para anlise ou quando perdas de amostras ocorrem durante o preparo da amostra [4]. O padro interno utilizado foi o dicromato de potssio, K2Cr2O7, por ser fsica e quimicamente similar ao analito, assim ele interage com os interferentes da matriz e minimiza seus efeitos na resposta [5]. Para a construo da curva analtica foram preparadas solues padres iguais as preparadas na padronizao externa, porm antes das leituras adicionou-se um volume conhecido, , de dicromato de potssio , que o padro

interno. As leituras foram realizadas a 370 nm para o dicromato de potssio e a 525 nm para o permanganato de potssio. Os valores das medidas dos padres, assim como os da amostra so apresentados na Tabela 2. Tabela 2: Determinao das absorbncias e transmitncias dos padres a 370 nm e 525 nm. Soluo padro de KMnO4 1 2 3 4 5 Amostra 0,212 0,283 0,444 0,598 0,906 0,206 0,283 0,530 1,037 1,398 1,979 0,059 Concentrao da soluo padro ( Absorbncia (K2Cr2O7) Absorbncia (KMnO4) Razes das absorbncias KMnO4/K2Cr2O7 1,335 1,873 2,336 2,334 2,184 0,286 61,6 52,3 36,0 25,3 12,5 62,3 52,1 29,5 9,20 4,00 1,00 87,1 Transmitncia (K2Cr2O7) (%) Transmitncia (KMnO4) (%)

As transmitncias foram novamente calculadas a partir da lei de Beer, pela equao (2). Os valores encontrados esto mostrados na Tabela 3.

Tabela 3: Transmitncias calculadas a partir da lei de Beer. Concentrao da soluo padro ( Transmitncia (K2Cr2O7) (%) 61,4 52,1 36,0 25,2 12,4 Amostra 62,2 Transmitncia (KMnO4) (%) 52,1 29,5 9,2 4,0 1,0 87,3

Com as razes das Absorbncias (A) e com as concentraes (C) das solues padro foi construda a curva analtica , C versus A, apresentada na Figura 2:

Figura 2: Curva analtica obtida a partir para padronizao interna. A concentrao da amostra foi calculada a partir da equao da reta obtida na curva analtica (1): (4) Onde:

Substituindo o valor da absorbncia da amostra, temos:

A concentrao encontrada,

, a concentrao de 4 mL da

amostra diluda em 100 mL de gua. Pela equao (3) calculou-se a concentrao da amostra original, , multiplicou-se a concentrao pela massa ,

molar do permanganato de potssio obtendo assim a concentrao em

, como a soluo foi preparada em 1L temos que a massa de permanganato de potssio presente na amostra igual a:

Pelo

mtodo

de

mnimos

quadrados

obteve-se

equao

da

reta

com o quadrado do coeficiente de correlao

, que

um valor muito baixo para esse parmetro, pois por ser uma reta deveria ser prximo a 1. Quando o quadrado do coeficiente de correlao igual a 1, a correlao dita perfeita. Quanto mais prxima de zero for o valor do coeficiente de correlao menor ser a indicao de que as variveis estejam correlacionadas linearmente [4]. Comparando os resultados obtidos pelos dois mtodos j descritos, observou-se que eles apresentam grande diferena, o que no era esperado pois foram realizados a partir da mesma amostra. Esse mtodo limitado, pois existe uma grande dificuldade de encontrar uma substncia adequada para servir com padro interno. Porm, quando bem empregado esse mtodo pode compensar efeitos de matriz, desvios decorrentes da preparao da amostra, alm de erros aleatrios e sistemticos [1,5]. 5.3. Adio de padro Na adio de padro, quantidades conhecidas de analito so adicionadas amostra desconhecida. A partir do aumento do sinal, deduzimos quanto de analito estava presente na amostra original. Este mtodo requer uma resposta linear para o analito. [4] Na adio de padro a curva analtica foi construda relacionando o volume de soluo estoque de permanganato de potssio 0,0006 adicionada a amostra e as respectivas absorbncias medidas. A leitura no fotmetro foi novamente realizada a 525 nm, por ser o pico mximo de absoro do permanganato de potssio. As transmitncias foram calculadas de acordo com a lei de Beer, pela equao (2). A Tabela 4 mostra a quantidade de soluo estoque adicionada, suas medidas (transmitncia e absorbncia) e as transmitncias calculadas.

Tabela 4. Volumes das solues estoque e da amostra, medidas das absorbncias e das transmitncias lidas e calculadas para o mtodo adio de padro. Volume de soluo estoque adicionada (L) Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Amostra 4 0,00 100 150 200 Concentrao da soluo estoque adicionada ( ) 0,00 1,18 x 10-5 1,75 x 10-5 2,31 x 10-5

Transmitnci a medida (%)

Trasmitncia calculada (%)

Absorbncia

87,1 80,3 78,8 75,2

87,1 80,2 78,7 75,2

0,060 0,096 0,104 0,124

A curva analtica, Concentrao de padro adicionado (V) versus Absorbncia (A), foi construda com valores apresentados na Tabela 4.

A concentrao desconhecida da amostra foi ento calculada a partir da extrapolao da curva analtica da adio de padro. A equao obtida foi na

, com coeficiente de correlao

. Fazendo

equao da reta, obteve-se a concentrao de permanganato na amostra, cujo valor . A concentrao encontrada, , a concentrao de 4 mL da

amostra diluda em 100 mL de gua. Pela equao (3) calculou-se a concentrao da amostra original, , multiplicou-se a concentrao pela massa molar do permanganato de

potssio

obtendo

assim

concentrao

em

, como a soluo foi preparada em 1L temos que a massa de permanganato de potssio presente na amostra igual a:

O mtodo da adio de padro tem por vantagem a compensao de efeitos de matriz, que causam interferncias nos resultados, pois a matriz da amostra permanece quase inalterada aps cada adio, a nica diferena a concentrao do analito, sendo assim, esse mtodo til para anlises de amostras nas quais a probabilidade de efeitos de matriz alta [1]. A anlise quantitativa em espectrofotometria realizada atravs da medida da absorbncia, a qual se relaciona linearmente com a concentrao dentro de uma faixa de concentrao, seguindo a lei de Beer. Esta mesma lei diz que deve haver uma relao linear entre a concentrao e a absorbncia. Esta linearidade vale dentro de certos limites, pois a partir de certa concentrao deixa de haver proporcionalidade entre concentrao e absorbncia [7]. A presena de possveis erros deve ser considerada, pois estes erros podem contribuir significativamente na alterao dos resultados obtidos. O erro cometido durante a realizao da prtica foi de origem sistemtica pessoal. Os erros sistemticos so erros que nas mesmas circunstncias distorcem todas as medies sempre num dado sentido (ou para mais ou para menos) em relao ao seu verdadeiro valor. As suas causas residem em deficincias [6]: de instrumentos de medio e reagentes erros instrumentais; do mtodo usado erros de mtodo; da atuao do prprio operador erros pessoais. 6. Concluso Atravs dos dados coletados, plotagem de grficos e de clculos, foi definida a concentrao da amostra desconhecida pelos mtodos de padronizao externa e interna e por adio de padro. O mtodo da adio de padro se mostrou mais eficaz no clculo da concentrao, por as medidas serem feitas na mesma amostra, e por ter os efeitos de matriz minimizados.

Os erros existentes, mas considerveis nos resultados, devem-se a erros sistemticos pessoais gerando resultados diferentes dos esperados. 7. Referncias Bibliogrficas [1] SKOOG, D.A.; HOLLER, F.J.; NIEMAN, T.A. Princpios de Anlise
Instrumental. 5a Ed. Bookman, 2002.

[2] http://www.ebah.com.br/metodo-de-adicao-de-padrao-doc-a56622.html. Acesso em 24/03/2011. [3] http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0100-0422004000500017&script=sci_arttext. Acesso em 24/03/2011. [4] HARRIS, C.D. Anlise Qumica Quantitativa. 6 edio, Rio de Janeiro: Editora LTC, 2005. 876 p. [5] SKOOG, D.A.; WEST, D.M.; HOLLER, F.J.; CROUCH, S.R. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edio, So Paulo: Thomson, 2007. 999 p. [6] http://pointer.esalq.usp.br/departamentos/leb/aulas/lce5702/PE_erros.pdf. Acesso em 27/03/2011. [7] http://www.ebah.com.br/curva-de-calibracao-doc-a87176.html. Acesso em 29/03/2011.