UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

CURSO: Laboratorio de Microbiologa GRUPO: B* PROFESOR: J. Juscamaita INTEGRANTES: Nez Burga, Alisson Pinto Pareja, Andrea Rodrguez Mendoza, Kevin Yachachin Tunque, Renzo

2011
INTRODUCCIN

Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria (Pascual, 1999). Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias (Granados, 1997). En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas de agarsangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias (Granados, 1997). Teniendo en cuenta lo mencionado anteriormente, basamos nuestro informe en los siguientes objetivos: Observar las diferentes reacciones de la cepa dada en clase, en cada medio para su posterior determinacin. Determinar que compuestos esta metabolizando la bacteria de acuerdo a las variaciones que ocasione en cada medio. REVISION LITERARIA

AGAR KLIGLER

Definicin Este medio de cultivo es empleado para la diferenciacin de enterobacterias (Gram negativos), en base a la fermentacin de la dextrosa y la lactosa as como a su capacidad de producir sulfuro de hidrgeno. Fundamento En el medio de cultivo, la peptona de carne y la triptena, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe
3+

, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y

producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificante (Granados, 1997).

Cuadro 1: Composicin de agar Kliger Frmula (en gramos por litro) Peptona de carne 13.0 Cloruro de sodio 5.0 Lactosa 10.0 Tripteina 10.0 Glucosa 1.0 Citrato de hierro y amonio 0.5 Tiosulfato de sodio 0.3 Rojo de fenol 0.025 Agar 15.0 Fuente: Granados, 1997

AGAR CITRATO DE SIMMONS

Definicin

El Agar Citrato de Simmons es un medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias en base a su capacidad de utilizar el citrato. Este medio es recomendado para el estudio de enterobacterias a partir de muestras clnicas, de agua y alimentos. Fundamento En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa (Granados, 1997). Cuadro 2: Composicin de agar Citrato de Simmons Frmula (en gramos por litro) Citrato de sodio 2.0 Cloruro de sodio Fosfato dipotsico Fosfato monoamnico Sulfato de magnesio Azul de bromotimol Agar Fuente: Granados, 1997 5.0 1.0 1.0 0.2 0.08 15.0

AGAR LISINA Definicin El Agar de Hierro y Lisina es un medio utilizado para la diferenciacin de microorganismos entricos en base a su capacidad para desaminar o descarboxilar la lisina y de producir sulfuro de hidrgeno. Este medio tambin es conocido como LIA.

Fundamento En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas descarboxilasa y desaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El prpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8. Por descarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La descarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesaria que la glucosa sea previamente fermentada. Los microorganismos que no producen lisina descarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro (Granados, 1997). Cuadro 3: Composicin de agar Lisina Frmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Prpura de bromocresol Agar Fuente: Granados, 1997 CALDO INDOL 5.0 3.0 1.0 10.0 0.5 0.04 0.02 15.0

Definicin El indol es un compuesto que contiene nitrgeno que puede ser formado de la degradacin del aminocido por ciertas bacterias que utilizan la triptofanasa. Fundamento

En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la triptena aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. Adems la triptena y el L-triptfano aportan el sustrato para la enzima triptofanasa y triptfano deaminasa. El almidn es la fuente de glucosa, hidrato de carbono fermentable, el piruvato de sodio presente permite reparar clulas injuriadas y el citrato de hierro y amonio, permite la deteccin de la enzima triptfano deaminasa (Granados, 1997).

Cuadro 4: Composicin de Caldo Indol Frmula (en gramos por litro) Almidn 1.0 Extracto de levadura 6.0 Peptona de carne 6.0 Triptena 14.0 L-triptofano 1.0 Piruvato de sodio 1.0 Citrato de hierro y amonio 0.02 Mezcla cromognica 0.2 Agar 15.0 Fuente: Granados, 1997

CALDO REA

Definicin El caldo rea pone de manifiesto la actividad de la enzima ureasa, para degradar la urea en dos molculas de amoniaco manifestndose con una coloracin grosella intenso. Fundamento En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de

carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar a un grosella intenso. En este caso existe alcalinizacin del medio por aumento del pH por el carbonato de amonio (Granados, 1997).

Cuadro 5: Composicin de Caldo de rea Frmula (en gramos por litro) Triptena 1.0 Glucosa 1.0 Cloruro de sodio 5.0 Fosfato monopotsico 2.0 Rojo de fenol 0.012 Agar 15.0 Fuente: Granados, 1997

CALDO NITRATO Definicin Va a poner de manifiesto la capacidad del microorganismo de transformar los Nitratos en Nitritos, de esta manera se puede conocer si la bacteria puede obtener oxgeno de los Nitratos para luego obtener Nitritos (Granados, 1997).

MATERIALES Y METODOS Materiales

Medios de cultivos: Agar Kligler, agar citrato de Simmons, agar Lisina, caldo nitrato, caldo Indol, caldo de Urea. Figura 1: Agar Kligler, Agar Citrato, Agar Lisina, Caldo Nitrato, Caldo Indol

Fuente: Elaboracin propia Asa y Aguja de Klle Mechero

- Cultivo microbiano de 18-24 horas (Cepa 30)

Figura 2: Cultivo microbiano

Fuente: www.egogenesis.com

Mtodos Degradacin de Carbohidratos

a) Fermentacin de glucosa y lactosa: Para ste anlisis se utiliza el agar Kligler, el cual est
inclinado o en forma de pico de flauta. Su color es rojo-naranja intenso. Procedimiento

1. Se flame la aguja de klle con el mechero y luego se cogi la cepa de E. coli. Se sigui
el protocolo y se extrajo la muestra. Figura 3: Extraccin de la Cepa

Fuente: Elaboracin propia

2. Por el mtodo de picadura profunda se sembr la cepa hasta la mitad del agar. Luego se
flame de nuevo la aguja y con el alicate se le dio forma de asa. Con el asa se extrajo muestra de la cepa segn el protocolo y se realiz una siembra por estra en la parte superior del agar. Figura 4: Agar Kligler

Fuente: Elaboracin propia

3. Finalmente se dej incubar a 37 por 18 24 horas. b)

Asimilacin del citrato: Para ste anlisis se utiliza el agar Citrato de Simmons, el cual est inclinado o en forma de pico de flauta. Su color es verde. Este agar es usado como nica fuente de carbono para ciertos bacilos Gram (-). Si la cepa se desarrolla en este medio entones es citrato +, esto aumenta el pH y vira el indicador azul de bromotinol de verde a azul. Procedimiento 1. Se flame la aguja de klle con el mechero y se extrajo la muestra segn el protocolo. Figura 5: Extraccin de la Cepa

Fuente: Elaboracin propia 2. Se sembr en la superficie del agar. Figura 6: Agar Citrato de Simmons

Fuente: Elaboracin propia

3.

Se dej incubar a 37 C por 24 horas.

Degradacin de Aminocidos

a)

Descarboxilacin de la Lisina: Para ste anlisis se utiliza el agar Lisina, el cual

esta inclinado o en forma de pico de flauta. Su color es morado. Procedimiento

1. Se flame el asa de klle con el mechero y luego se cogi la cepa de E. coli. Se sigui el
protocolo y se extrajo la muestra. Figura 7: Extraccin de la Cepa

Fuente: Elaboracin propia

2.

Se sembr en la superficie del agar. Figura 8: Agar Lisina

Fuente: Elaboracin propia

3. Se dej incubar a 37 C por 24 horas.

Interpretacin Durante las primeras horas el medio se torna amarillo por fermentacin de la glucosa contenida en el medio y produciendo cido. Posteriormente, al ocurrir la descarboxilacin del aminocido, el medio se torna alcalino y el indicador vira al rojo prpura.

b)

Degradacin del triptfano: Para ste anlisis se utiliza el caldo Indol. Su color es La degradacin del triptfano da como resultado un

amarillo tenue y es transparente.

compuesto nitrogenado llamado Indol que solo ciertas bacterias pueden producir. La enzima que lo degrada se llama triptofanasa y da como productos indol, cido pirvico y amoniaco. Procedimiento

1. Se flame el asa de klle con el mechero y luego se cogi la cepa . Se sigui el protocolo
y se extrajo la muestra. Figura 9: Extraccin de la Cepa

Fuente: Elaboracin propia

2. Se inocul la muestra en el caldo.

Figura 10: Caldo Indol

Fuente: Elaboracin propia

3. Se dej incubar a 37 C por 24 horas. 4. Luego de la incubacin se agreg el reactivo de Kovacs al tubo de ensayo.

Degradacin de la rea Procedimiento

1. Se flame el asa de klle con el mechero y luego se cogi la cepa . Se sigui el protocolo
y se extrajo la muestra. Figura 11: Extraccin de la Cepa

Fuente: Elaboracin propia

2. Se inocul la muestra en el caldo.

Figura 12: Caldo rea

Fuente: Elaboracin propia

3.

Se deja incubar a 37 C por 24 horas.

Interpretacin La presencia de color prpura indica la degradacin de la rea por la ureasa.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Degradacin de carbohidratos

Agar:

Cuadro 6: Fermentacin de glucosa y lactosa Kligler

Indicador: Color: Ruptura del medio: Ennegrecimiento del medio: Observaciones:

Rojo de fenol Rojo, Amarillo Positivo Negativo Se observa fermentacin de lactosa, ya que ha virado el color del indicador a amarillo siembra. S hay presencia de fermentacin de glucosa, adems de gas se ya observa que hay en la parte superior y superficial del agar donde se hizo la

Figura 13: Muestra en Agar Kligler

produccin

rompimiento del agar.

Fuente: Elaboracin propia

Cuadro 7: Asimilacin de citrato Agar: Indicador: Color: Citrato de Simmons Azul de bromo timol Verde

Observaciones:

La prueba da negativo debido que no hay viraje de color del indicador, lo que indica que el microorganismo no ha utilizado el citrato como fuente de carbono y no ha ocasionado un incremento del pH del agar (pH=7.6) por ello mantuvo su color inicial de verde.

Figura 14: Muestra en Citrato de Simmons

Fuente: Elaboracin propia

Degradacin de aminocidos

Justificacin

Por Descarboxilacin de la lisina se ha producido la amina cadaverina, que ha alcalinizado el medio y esto ha producido el viraje del indicador al color rojo purpura. La descarboxilacin de la lisina tiene lugar en medio cido, por lo que ha sido necesaria que la glucosa sea previamente fermentada, tornndose durante las primeras horas amarillo.

Cuadro 8: Descarboxilacin de la lisina Caldo: Indicador: Color: Observaciones: Lisina Prpura de bromocresol Prpura

Cuando se pierde el grupo carboxilo de un aminocido y permanece el grupo amino (bsico), se alcaliniza el medio y aumenta el pH a 6.9, haciendo que el indicador se torne rojo prpura. Esto ocurri en la prueba y se demostr que el microorganismo es capaz de descarboxilar la lisina.

Figura 15: Muestra en lisina

Fuente: Elaboracin propia

Cuadro 9: Degradacin del triptfano Caldo: Reactivo: Formacin de anillo rojo: Observaciones: Indol Kovacs Negativo

No se form ningn anillo rojo por lo cual decimos que el indicador no ha reconocido la presencia de indol. Entonces, se concluye que el microorganismo no posee triptofanasa y no degrada el triptfano, a partir del cual debera producirse el indol. Lo que contradice a la bibliografa que dice que debera salir (+)

Figura 16: Muestra en Caldo Triptfano

Fuente: Elaboracin propia

Degradacin de la urea

Cuadro 10: Degradacin de la rea Caldo: Color: Ureasa: Observaciones: rea No vara Negativo

No se ha evidenciado el viraje de color del indicador rojo fenol a rojo grosella intenso, lo que nos indica que el microorganismo no produjo ureasa para degradar a la urea.

Figura 17: Muestra en rea

Fuente: Elaboracin propia

Cuadro 11: Resumen de resultados

Microorganismo E. Coli Glucosa Agar Kligler Lactosa H2S Gas Asimilacin del citrato Descarboxilacin de la lisina Degradacin del triptfano Degradacin de la rea (+) (+) (-) (+) (-) (+) (-)* (-)

*Segn la teora, debera salir (+). Fuente: Elaboracin propia

DISCUSIONES

Segn Romero (2007) la Escherichia Coli es un bacilo gramnegativo, con una sola cadena espiral de ADN, mvil, aerobio y aerobio facultativo, con flagelos pertricos. Va a tener ciertos efectos y caractersticas al reaccionar con los siguientes medios de cultivo:

Cuadro 12: Efectos y caractersticas del Escherichia Coli al reaccionar con diferentes medios de cultivo

Fuente: Romero, 2007.

Segn Granados y Villaverde (1997), la fermentacin de la glucosa (+) y lactosa (+): zona profunda amarillo (reaccin cida), zona superficial de la reaccin (reaccin alcalina). Entonces podra pertenecer a Escherichia Coli.

El resultado citrato (-), segn Granados y Villaverde (1997), indica con medio Simmons que no aparece cambio de color ni crecimiento; esto no ocurri en la prctica y segn Beeton et al. (1959) se trata de la bacteria Escherichia Coli sp.

Segn Granados y Villaverde (1997), el resultado Indol (+) se manifiesta con la aparicin de un anillo color rojo en la superficie del medio luego de aadir el reactivo de Kovacs. Esto no ocurri en la prctica realizada, lo que conlleva a un error del experimento. O tambin, a una mala adicin del Reactivo de Kovaks (no fue lo suficiente).

La descarboxilacin de la lisina, suele realizarse segn Granados y Villaverde (1997) en caldo Lisina, el resultado da (+) si el medio cambia a rojo prpura, evidenciando que se trata de Escherichia Coli sp.

La prueba de degradacin de la urea detecta la presencia de la enzima ureasa en los microorganismos. En la prctica el resultado dio (-), corroborando con la bibliografa que da (-) (Guerrant, 2002).

CONCLUSIONES

Agar lisina en este medio se permite evidenciar la descarboxilacin del aminocido lisina en la diamina cadaverina, como tambin la desaminacin de la lisina en un alfa cetocido. Estas 2 reacciones se ponen de manifiesto por el viraje del indicador prpura de bromocresol. La formacin de H2S se pone de manifiesto por la presencia del tiosulfato sdico, que dar formacin al sulfato frrico. Tambin puede verificarse la formacin de gas a partir de la degradacin de la glucosa (Alania, 2010).

Agar Simmons este medio nos permite comprobar la capacidad de la bacteria de utilizar el citrato como fuente exclusiva de carbono. La degradacin del citrato conlleva a la alcalinizacin del medio y el viraje del indicador azul de bromotimol de verde a azul prusia.

Agar kligler este medio se emplea para la identificacin de bacilos gram () basada en la fermentacin de la lactosa y la glucosa y en la produccin de H2S. Si el tubo no muestra ningn cambio es porque la bacteria no consume ni lactosa ni glucosa (Alania, 2010).

Caldo urea en este medio se observa la capacidad de la bacteria de degradar la rea por medio de la enzima ureasa formando amoniaco y carbonato de amonio, que alcalinizan el medio por lo cual el rojo de fenol vira a un rojo cereza (Alania, 2010). Bacterias rea + rpida: Proteus y Providencia Bacterias rea + retardada: Klebsiella, Citrobacter y Enterobacter. Bacterias rea negativa: Escherichia coli, Salmonella, Shigella

Caldo triptfano en este medio la motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de la lnea de inoculacin. La produccin de H2S se reconoce por el ennegrecimiento de la zona de crecimiento o del medio debido a la presencia del tiosulfato sdico. Para la demostracin del indol se usa el reactivo de Kovacs, que manifiesta la degradacin del triptfano por la enzima triptofanasa en indol, que se combina con el aldehdo presente en el reactivo de Kovacs, para producir un color rojo (Alania, 2010).

RECOMENDACIONES

El cultivo se debe observar a las 24 horas. Se debe tener cuidado con los factores de crecimiento de microorganismos. Todos los materiales que se usan en el cultivo deben estar esterilizados. En la inoculacin se debe hacer cerca al mechero para evitar la presencia de otro microorganismo que altere el experimento.

CUESTIONARIO

1. Nombre algunos cidos producidos por bacterias. Mencione el gnero principal que producen cada uno de estos cidos. Los cidos orgnicos se usan por lo general como acidulantes y son uno de los ingredientes ms verstiles en los alimentos y bebidas, debido a sus solubilidad, higroscopicidad, propiedades tampn (buffer) y de quelacin (Moresi y Parente, 1999). Los cidos lctico, ctrico, glucnico y propinico estn presentes en forma natural y son producidos por fermentacin. El cido ctrico tiene el ms amplio rango de aplicacin y junto con el cido actico, da razn del 75% de uso como acidulante. El cido ctrico es producido por varios hongos, levaduras y bacterias por fermentacin de la glucosa a travs de la gliclisis (Food Technology, 2000). Aunque se conoce una amplia variedad de bacterias que producen cido ctrico a partir de varios substratos, se ha enfocado muy poca atencin hacia su uso industrial. Tales bacterias incluyen Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Brevibacterium sp. Y Cornyebacterium sp.

El cido actico es producido mediante la fermentacin de varios sustratos, como solucin de almidn, soluciones de azcar, productos alimenticios alcohlicos como vino o sidra, con bacterias de Acetobacter y Gluconobacter (GENMIC, 2000).

Ejemplos de la fermentacin actica: Europa Occidental: La cidra y vinagre de manzana y el vinagre de vino, kambucha frica: vinagre de vino de palmera Filipinas: vinagre de agua de coco Las bacterias cido-lcticas constituyen un vasto conjunto de microorganismos benignos, dotados de propiedades similares, que fabrican cido lctico como producto final del proceso de fermentacin. Se encuentran en grandes cantidades en la naturaleza, as como en nuestro aparato digestivo. Aunque se las conoce sobre todo por su labor de fermentacin de productos lcteos, se emplean asimismo para encurtir vegetales en el horneado, en la panificacin del vino, y para curar pescado, carne y embutidos (EUFIC, 1999). La accin de estas bacterias desencadena un proceso microbiano por el cual la lactosa (el azcar de la leche) se transforma en cido lctico. A medida que el cido se acumula, la estructura de las

protenas de la leche va modificndose (van cuajando), y lo mismo ocurre con la textura del producto. Existen otras variables, como la temperatura y la composicin de la leche, que influyen en las cualidades particulares de los distintos productos resultantes (EUFIC, 1999). El cido lctico es tambin el que confiere a la leche fermentada ese sabor ligeramente acidulado. Los elementos derivados de las bacterias cido-lcticas producen a menudo otros sabores o aromas caractersticos. El acetaldehdo, por ejemplo, da al yogurt su aroma caracterstico, mientras que el diacetilo confiere un sabor de mantequilla a la leche fermentada. Pueden aadirse asimismo al cultivo de microorganismos, como las levaduras, a fin de obtener sabores particulares. El alcohol y el dixido de carbono producidos por la levadura, por ejemplo, dan al kefir, el koumiss y el leben (variedades de yogurt lquido) una frescura y una esponjosidad caractersticas. Entre otras tcnicas empleadas cabe mencionar las que consisten en eliminar el suero o aadir sabores, que permiten crear una variada gama de productos (EUFIC, 1999). En lo que concierne al yogurt, su elaboracin deriva de la simbiosis entre dos bacterias, la Streptococcus thermophilus y la Lactobacillus bulgaricus, que se caracterizan porque cada una estimula el desarrollo de la otra. Esta interaccin reduce considerablemente el tiempo de fermentacin y el producto resultante tiene peculiaridades que lo distinguen de los fermentados mediante una sola cepa de bacteria (EUFIC, 1999). Bacterias que produce el cido lctico son: Leuconostoc mesenteroides, Pediococcus cerevisiae, Estreptococo lactis y Bifidobacterium bifidus (EUFIC, 1999). Las bacterias propinicas son bacterias que producen el cido propinico, cido biolgico natural que es efectivo y selectivo de fa flora bfida, por eso, esta bacteria va a estimular especialmente el incremento de las bacterias bfidas que de forma natural estn en el coln (Beerens, 1990). El cido propinico es un elemento altamente beneficioso para el equilibrio intestinal, pero no servira de nada ingerirlo mediante el consumo de uno de los escasos vegetales que lo contienen ya que no llegara al colon en el estado requerido. Para que sea beneficioso para el equilibrio intestinal, el cido propinico debe ser sintetizado en el mismo colon y slo las bacterias pueden hacerlo as (Beerens, 1990). El cido propinico es el precursor biolgico natural de la"flora azul" endgena de cada ser humano. Aportar fermentos a efecto bifidgeno endgeno como las bacterias propinicas es ayudar a la flora a reequilibrarse saludablemente y a funcionar por si mismo (Beerens, 1990). Propionibacterium Schermani

Las bacterias propinicas se caracterizan por su capacidad de producir cido propinico, y por este motivo son muy utilizadas en el sector quesero (Beerens, 1990).

El Propionibacterium schermani puede producir vitamina B12 y acumular prolina en el medio donde crece. Esta subespecie se caracteriza adems por la capacidad de fermentar la lactosa. Por este motivo se recomienda su administracin a los sujetos que presentan intolerancia hacia la lactosa (Beerens, 1990). A Louis Pasteur (1822-1895) estn asociados importantsimos descubrimientos en el campo de la Microbiologa. Pasteur demostr la naturaleza microbiana de la fermentacin alcohlica, lctica y butrica, descubriendo un nuevo tipo de respiracin (anaerobia) en algunos microbios (alimentacionynutricion.org, 2005). Las bacterias del cido butrico se han utilizado, durante muchos aos, para la produccin de los disolventes industriales acetona y butanol. Aunque estos pueden prepararse por sntesis qumica, la produccin microbiana sigue siendo competitiva con los mtodos qumicos de sntesis (alimentacionynutricion.org, 2005). Las bacterias butricas son bacterias (diacetlicas) formadoras de cidos y aromas, de la nata, entre las que se encuentran Lactococcus lactis subsp. lactis, Lactococcus lactis subsp. cremoris, Lactococcus lactis subsp. diacetylactis y Lactococcus lactis subsp. cremoris bv. Citrovorum(alimentacionynutricion.org, 2005).

2. Algunos microorganismos usan carbohidratos sin formar niveles de cido detectables.

En tales casos, cmo podra determinar si el carbohidrato ha sido utilizado?

Al no haber ningn tipo de cido formado se tendra que recurrir a otros tipos de pruebas, quizs para determinar otros tipos de productos que se pudieron formar de acuerdo a los microorganismos que se estudian o al tipo de cultivo que se utilizan, adems tambin se podra evaluar los cambios que sufre o las caractersticas que muestra.

3. Por qu las amilasas, gelatinasas, caseinasas y lipasas son clasificadas como

enzimas hidrolticas?

Las enzimas hidrolticas aceleran las reacciones en las que una sustancia se rompe en componentes ms simples por reaccin con molculas de agua (Fernndez, 2002). La amilasa es principalmente un componente del jugo y de la saliva pancreticos, necesitado para la interrupcin de los carbohidratos de larga cadena (tales como almidn) en unidades ms pequeas. La amilasa tambin se sintetiza en la fruta de muchas plantas durante la maduracin, hacindolas llegar a ser ms dulces (Fernndez, 2002). La amilasa, o ms propiamente dicho, las amilasas, por que existe ms de una isoforma, son enzimas hidrolasas, que catalizan la hidrlisis de ciertos polisacridos, concretamente aminopectina, amilosa, glucgeno y sus productos parcialmente hidrolizados (Fernndez, 2002).

La gelatina, una protena del colgeno animal, se incorpora a diferentes medios de cultivo para determinar la capacidad de un microorganismo de producir enzimas proteolticas (proteinasas), detectables por digestin o licuefaccin de la gelatina. Las enzimas capaces de producir gelatinosis se denominan gelatinasas. La gelatina es hidrolizada por la gelatinasa en sus aminocidos constitutivos, con prdida de sus caractersticas gelificantes, asimismo la caseinasa se encarga de la hidrlisis de la casena (Mac Faddin, 2003).

La lipasa es una enzima secretada por el pncreas para descomponer los triglicridos en cidos grasos; como en el caso de amilasa, la lipasa aparece en el torrente sanguneo cuando hay dao de las clulas acinares pancreticas, dado que solo se produce en el pncreas (Correa, 2002).

4. Las enzimas que hidrolizan la casena y gelatina rompen el mismo enlace qumico.
Cul es?

Segn Pareja (2009), el enlace que se rompe durante la hidrlisis es el enlace glucosdico.

5. Cul es el nombre de la amina formada por la descarboxilacin de la lisina?

La amina formada es la cadaverina, la cual se origina por descarboxilacin de la lisina por la lisina descarboxilasa (Landete, 2005).

BIBLIOGRAFA

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