REPLICAO VIRAL

A funo do genoma viral : 1. Alterar funo/estrutura da clula hospedeira 2. Replicar o genoma viral 3. Promover a formao de partculas virais

CICLO LTICO ADSORO

Contato inicial entre clula e vrus. Primeiro fraca e reversvel, progredindo em seguida para irreversvel. Uma em cada 10 colises levam a unio complementar entre um stio da clula (receptor) e uma protena viral (anti-receptor). Vrus e clulas tm cargas negativas e se repelem. A adsoro ocorre por conta da influncia do ph e de foras eletrostticas (presena de ons). O vrus apresenta fibras ou espculas proticas na superfcie que mediam a ligao entre clulas e vrus. Se elas forem digeridas enzimaticamente, o vrus perde a capacidade de adsoro. Ex: glicoprotena (hemaglutinina) do influenza e do HIV. Nos vrus no-envelopados a funo de anti-receptor exercida pelas protenas do capsdeo, que formam depresses e alas (mudanas na arquitetura). A mudana na estrutura do capsdeo atravs de cido, por exemplo, causa a perda da capacidade ligao s clulas. Os stios receptores nas clulas so molculas de superfcie protenas, polissacardeos ou lipdeos que tem outras funes na clula normal (como os receptores de acetilcolina, que servem como receptores para o vrus da raiva; os receptores de complemento, que recebem o Epstein-Barr; antgenos de linfcitos CD4 recebem o HIV, etc). A ligao vrus-clula especfica e a infectividade geralmente depende da capacidade de o genoma viral penetrar atravs da membrana celular. Os receptores celulares mudam com a idade. Alguns vrus no-relacionados tem receptores celulares em comum. Alguns vrus, alm do receptor primrio, dependem da interao de um co-receptor pra que haja infeco. O coreceptor pode se ligar aos vrions nativos ou s formas alteradas produzidas pela ligao inicial ao receptor primrio. Nas bactrias, o stio receptor pode estar no flagelo, pili ou estruturas da parede. Em vrus de plantas, transmitidos principalmente macanicamente por vetores, no h necessidade de adsoro (paredes celulares quebradas). Mesmo que haja adsoro, a infeco no est assegurada o vrion pode deixar a superfcie celular. Se houver ligao mais forte ela irreversvel: ligao em stios mltiplos, por receptores adicionais mobilizados de outros locais da membrana.

PENETRAO
Entrada na clula de parte ou todo o vrion + liberao do material genmico viral. So 4 mecanismos de penetrao: 1. INJEO DO CIDO NUCLICO: ligao do vrus ao receptor, uma das protenas do capsdeo liberada expondo resduos hidrofbicos do interior do vrus, que interagem com a membrana gerando o aparecimento de um poro, pelo qual o RNA viral introduzido no citoplasma. 2. ENDOCITOSE: mediada por receptores estruturas proticas grandes como vrions entram na clula. Ocorre semelhantemente fagocitose. Vrus englobados pela membrana plasmtica, ficando no interior de vesculas que posteriormente se fundem com endossomos de contedo cido, o que facilita a liberao do cido nuclico para o interior da clula.

3. FUSO DO ENVELOPE VIRAL: ocorre com vrus envelopados fuso do envelope com a membrana celular, liberando o nucleocapsdeo pra dentro da clula. Participam protenas de fuso. Pode haver tambm uma combinao de endocitose com essa fuso: primeiro os vrus so endocitados e depois seu envelope se funde com a membrana do vacolo, liberando o nucleocapsdeo. 4. TRANSLOCAO: partcula viral inteira translocada atravs da membrana plasmtica. Raro. Aps esse processo, ocorre o desnudamento (remoo total ou parcial do capsdeo), que ocorre de forma diferente pra cada tipo de vrus. A maioria dos RNAvrus so replicados no citoplasma, sem exigir atividades nucleares. A maioria dos DNAvirus e os vrus de RNA retrovrus e ortomixovrus precisam de acesso ao ncleo pra haver replicao. s vezes apenas o cido nuclico participa da replicao, e s vezes protenas (como polimerases vrion-associadas) tambm esto envolvidas. Pode haver casos (reovirus) nos quais precisa uma digesto proteoltica do capsdeo (ocorre nos lisossomos) pra que a polimerase viral seja ativada.

SNTESE DOS COMPONENTES VIRAIS

Replicao do cido nuclico viral e produo de capsdeos para esse cido nuclico. Antes dessa sntese comear, h um perodo de latncia onde ocorrem arranjos necessrios. As partculas virais so degradadas pra que comece a transcrio do cido nuclico viral. Os vrus so agrupados em 6 partes: 1. Classe I dsDNA vrus (papoviridae, adenoviridae, herpesviridae). Multiplicao no ncleo celular usando enzimas transcricionais. Outro grupo (poxviridae) se multiplica no citoplasma usando uma transcriptase viral presente na partcula, na forma de protena estrutural. A maioria dos bacterifagos pertencem a esta classe. 2. Classe II ssDNA vrus (parvovirus, inoviridae, microviridae). DNA com polaridade positiva, a mesma do m-RNA. Ao penetrar no ncleo, j sintetiza-se a fita complementar, transformando o genoma em dsDNA, que finalmente transcrito. 3. Classe III dsRNA (birnavirus). A fita negativa DNA serve como molde para a sntese de m-RNA atravs de uma enzima introduzida pelo vrus (RNA polimerase - RNA dependente), protena estrutural do vrus. 4. Classe IV ssRNA+ (picornavirus, togavirus, flavivirus, coronavirus). Tem mesma polaridade do m-RNA. Seu genoma funciona como m-RNA, se ligando aos ribossomos e j sendo traduzido pra protenas. 5. Classe V ssRNA- (orthomyxoviridar, paramyxoviridae, arenaviridae, filoviridae). RNA complementar ao m-RNA. 6. Classe VI famlia Retroviridae (retrovrus). O RNA viral transcrito em DNA pela transcriptase reversa. O DNA introduzido no genoma celular por uma integrase viral e funciona como molde para produzir m-RNA. Os cidos nuclicos virais codificam pra muitas protenas, mas as bsicas so: uma polimerase pra replicao do cido nuclico e uma protena do capsdeo. As protenas so codificadas em uma ordem. As primeiras so as no estruturais (early proteins), que atuam na prpria transcrio e replicao e inteferem na sntese de macromolculas da clula. Depois vem as estruturais (late proteins) que formao o capsdeo. Os poliovrus usam um tipo de traduo nica: o cido nuclico inteiro traduzido, produzindo uma cadeia nica de polipeptdeos que em seguida digerida em pontos estratgicos, formando enzimas e protenas estruturais. A replicao do genoma comea logo aps sua traduo.

MATURAO
Ou montagem. Unio das protenas e do cido nuclico virais, formando partculas virais maduras. No ocorre apenas por pontes covalentes. A unio do capsdeo e cido nuclico ocorre (nucleocapsdeo) e depois circundado pelo envelope. Protenas da matriz atuam pra que haja alinhamento do nucleocapsdeo abaixo das regies da membrana plasmtica midificadas pelo vrus.

LIBERAO
H limites para o acmulo de vrus numa clula infectada, j que esta pode vir a morrer ou deixar de fornecer os fatores de multiplicao viral. A partcula infecciosa deve deixar a clula e penetrar numa clula no infectada. Essa liberao ocorre ou por lise da clula ou pelo acmulo das partculas virais em vesculas e cisternas ligadas ao exterior por tbulos por onde os vrus so liberados. Os envelopados adquirem o envelope atravs do brotamento pela membrana celular. Alguns dos vrus que se multiplicam no ncleo tem o envelope formado por membrana nuclear (brotamento tambm).

CICLO LISOGNICO DE BACTERIFAGOS (fagos temperados com DNA de fita dupla)

Produo de componentes desligada indefinidamente (lisogenia). A adsoro e penetrao ocorrem normalmente, seguidas pela liberao do cido nuclico. Este se integra ao genoma celular (passando a chamar-se profago) e s duplicado quando o cido nuclico da clula duplicado. A maioria dos genes do profago inativa. Pode ocorrer uma induo espontnea: genoma viral liberado do bacteriano, dando incio ao ciclo ltico.

INFECO LATENTE
Integrao do genoma viral ao celular sem a produo de partculas virais infecciosas. Ocorre com papovavrus, adenovrus, herpesvrus, hepadnavrus DNA de fita dupla. O genoma viral integrado ao celular chama-se provrus. Este se replica quando a clula replica e pode ser transcrito e produzir partculas virais sem precisar da exciso do genoma. H um controle molecular pra que o provrus permanea integrado. Existem tambm infeces latentes sem integrao do genoma viral (herpesvrus genoma viral mantido na forma de epissoma, circularizado, semelhante aos plasmdeos bacterianos, no ligados ao genoma celular).

Nomenclatura e classificao dos vrus

Os critrios para a classificao viral so:hospedeiro, morfologia da partcula viral e tipo de cido nuclico. Tambm considera-se o tamanho, caractersticas fsico-qumicas, protenas virais, sintomatologia, antigenicidade, etc. Para a classificao a nvel de espcie, considera-se a identidade na sequncia de nucleotdeos, hospedeiros naturais, tropismo celular e tecidual, patogenicidade e citopatologia, modo de transmisso, propriedades fsico-qumicas do vrion e propriedades antignicas da protena viral. As ordens tem terminao virales, as famlias viridae, subfamlias virinae, gneros vrus e espcie o nome do vrus em ingls (no segue a nomenclatura em latim empregada pra outros organismos).

Cultivo de vrus
J que os vrus s replicam no interior das clulas, o seu isolamento para a pesquisa depende de hospedeiros apropriados. Para baterifagos, usa-se meios lquidos ou slidos com bactrias. Para o cultivo de vrus de vertebrados, usa-se a inoculao em animais de laboratrio, em ovos embrionados e em culturas celulares.

Animais de laboratrio
Antes era a nica tcnica disponvel. Hoje, em diagnstico viral, apenas utilizada pra o estudo da oncognese, isolamento do vrus da raiva, arbovrus e vrus Coxsackie.

Inoculao em ovos embrionados

Ovo de galinha, que apresenta vrios tipos de tecido em ambiente estril. til no diagnstico de infeces virais, na produo de vacinas, na manuteno do vrus em condies laboratoriais e etc. Hoje em dia quase no se utiliza mais essa tcnica.

Culturas celulares
Obteno de culturas em monocamada, preparadas pelo tratamento do tecido original com enzimas proteolticas e agentes quelantes, retirando o clcio e magnsio necessrios para a ligao intercelular. As clulas dispersas so suspensas em um meio nutritivo e multiplicam-se, formando uma monocamada de fcil manipulao. A deteco do crescimento viral feia pela observao do efeito citoptico e pela produo de corpsculos de incluso.

Giulia Arajo Freitas