Rol de la rodopsina en el proceso de fototransduccin

Pinilla T. Ana M.1

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Escuela de qumica, Universidad Industrial de Santander, Trabajo de investigacin independiente para la asignatura de Bioqumica, Colombia. Universidad Industrial de Santander, Facultad de Ciencias, Escuela de Qumica, Bucaramanga, Santander, Colombia. Trabajo de investigacin personal para la asignatura de Bioqumica (24725) Fecha de entrega: 1 de Octubre de 2012

Palabras Clave: Rodopsina, 11-cis retinal, transducina, Receptor acoplado a protenas G

Resumen
El proceso de fototransduccin esta asociado con una cascada reacciones en la que intervienen un receptor acoplado a protenas G, denominado rodopsina y una proteina G denominada transducina. Este proceso se da mayoritariamente en los clulas fotorreceptoras denominadas bastones, ms especficamente en el segmento exterior de la clula fotorreceptora. La fotorreaccin inicia cuando la luz incide sobre la rodopsina y causa la isomerizacin de su cromforo 11-cis-retinal, y partir de este hecho ocurren un cascada de reacciones en las cuales las cinco primeras reacciones estn asociadas con excitacin del receptor y los cuatro pasos restantes estn asociados con la recuperacin y adaptacin despus de la iluminacin.

Introduccin
La fototransduccin es un proceso por el cual un fotn de luz es capturado por un pigmento visual de una molcula, lo cual genera una respuesta elctrica de la clula fotorreceptora. La fototransduccin que ocurre en los bastones que son las clulas fotorreceptoras responsables de la visin nocturna y alta definicin, es una de las rutas de biosealizacin asociadas con protenas G ms estudiadas y de gran importancia para los seres vivos. En esta ruta la protena G, especfica del fotorreceptor, la transducina, sirve de mediador entre el pigmento visual, rodopsina, y la enzima efectora cGMP fosfodiesterasa.[1] Esta revisin se enfocar en describir las clulas fotorreceptoras denominadas bastones en donde ocurre el proceso de fototransduccn; describir el receptor acoplado a protenas G denominado rodopsina;

describir el proceso de isomerizacin del cromforo 11-cis-retinal; y finalmente describir la cascada de reacciones que ocurre ante la activacin del cromforo.

Celulas fotorreceptoras: bastones

En la retina del ojo se encuentran dos tipos de celulas fotorreceptoras: conos y bastones. Las primeras son las responsables de la capacidad del ojo para diferenciar los colores, mientras que las segundas son responsables de la visin nocturna y en alta definicin. En esta revisin solo nos centraremos en los bastones. Los bastones son neuronas altamente diferenciadas que son responsables de la deteccin de fotones (Figura 1). La parte especializada de los bastones es el segmento externo (ROS por sus siglas en ingles), el cual contiene rodopsina y protenas auxiliares, que se encargan de convertir y amplificar la seal de la luz. El componente mas importante (Ms del 90%) de las membranas de la bicapa de los discos que conforman los bastones es el receptor acoplado a protenas G, rodopsina. Aproximadamente el 50% del rea de la membrana de los discos es ocupada por rodopsina. El espacio restante es llenado con fosfolpidos y colesterol.[2]

Figura 1. Diagrama de la estructura de los bastones. La protena ms importante de las membranas de

los discos pertenecientes al segmento externo de los bastones, es la rodopsina. [2]

La sntesis de las siete transmembranas de la apoproteina de la rodopsina, denominada opsina, empieza en el segmento interno de los bastones, donde est sufre su proceso de maduracin en el retculo endoplasmatico (ER por sus siglas en ingles) y en las membranas del aparato de Golgi, para posteriormente ser transportado vectorialmente al segmento externo de los bastones. La regin Cterminal de la protena es esencial para la interaccin con la maquinaria de transporte que enva la carga protenas de membrana asociadas en las membranas de las vesculas de ROS. [2]

Estructura de la rodopsina
La rodopsina esta conformada por una protena incolora denominada opsina y un cromoforo denominado 11-cis-retinal, el cual le imparte color a la rodopsina. El cromforo es un ismero geomtrico de la vitamina A en su forma aldehdo, y esta acoplado a la opsina por medio de una base protonada de Schiff en el residuo de Lys296, localizado en el dominio transmembrana de la protena. [2]

Figura 2. Estructura cristalina de la rodopsina. Las hlices transmembrana H2 (naranja) y las H3

(rojas) son las ms apretadas estables y que por lo tanto no sufren cambios apreciables ante la activacin de la rodopsina. Las hlices H5 (azul oscuro) y H6 (Cyan) son las ms pobremente empaquetadas y sufren grandes desplazamientos en el momento de la activacin. El cromforo 11-cisretinal esta covalente unido dentro del conjunto de hlices transmembrana en el sitio extracelular del receptor. CL, bucle citoplasmtico; CT, C- terminal; EL, bucle extracelular; NT, N terminal. [3]

Existe una gran familia de receptores acoplados a protenas G a la cual pertenece la rodopsina denominada clase A. Muchos de los residuos aminoacidicos que posee este receptor son comunes en otras familias de receptores a protenas G, por lo que se dice que se conservan. A continuacin se presenta una descripcin de los residuos que son conservados. [3] Adicionalmente a los sitios de enlace del retinal, existen cuatro regiones en la rodopsina que consisten microdominios funcionales que pueden operar como activadores de los cambios conformaciones dentro del receptor. En el sitio extracelular hay dos microdominios bien caracterizados. Uno de ellos consiste en un cluster de residuos aromticos que rodean el retinal. La fenilalanina en la posicin 6.52 es considerada como un sensor de ligandos. El ligando interacciones con la Phe6.52 induciendo a un cambio en la conformacin de la cadena lateral de Cys6.47, Trp6.48 y Pro6.50. El anillo -ionona del cromforo retinal es localizado en la regin donde el anillo aromatico de la fenilalanina es producido en los amino receptores y parece que juega el mismo rol como sensor de ligandos. Este movimiento del anillo de -ionona es acoplado con la rotacin de Trp2656.48. El segundo microdominio en el lado extracelular de la rodopsina consiste en una red de residuos con enlaces hidrogeno centrados en el par His2115.38- Glu1223.37. Los enlaces hidrogeno en esta red causan la isomerizacin del cromforo retinal y la activacin del receptor.[3] En el sitio intracelular de la rodopsina, existen dos microdominios asociados con la conservacin de motivos estructurales, El primer motivo es el correspondiente a la secuencia the Glu1343.49-Arg1353.50Tyr1363.51 en la rodopsina. Los puentes salinos entre Arg1353.50 en H3 and Glu2476.30 en H6, son referidos como una cerradura ionica, la cual se puede romper en el momento de activacin del receptor. El segundo motivo conservado es el correspondiente a la secuencia en H7. Tyr3067.53 este motivo rota hacia Arg1353.50 en el sitio activo del receptor y contribuye al rompimiento de la cerradura ionica.[3] El lado citoplasmtico de la rodopsina esta formado por un terminal C (CT) y tres bucles citoplasmticos (CL1, CL2, y CL3). El terminal C emerge de H7 como una corta hlice anfipatica extendida de Lys311H8 a Leu321H8. La regin involucrada con los finales de los terminales C de las hlices H1 y H7 a travs de la hlice H8 es altamente conservada, lo que sugiere un rol en la estructura del receptor o en la funcin. [3] En contraste con estructura de la superficie extracelular, la terminal C y los bucles citoplasmticos son ms mviles. La terminal C contiene sitios fosforilados que reconocen arrestina. Para la rodopsina, los mayores sitios de fosforilacin son Ser334CT, Ser338CT, y Ser343CT. En la estructura cristalina, la cola de la terminal C interactua con la helice H8 y con CL1 en la region de estas serinas, la cual es bloqueada ante su exposicin a la rodopsina quinasa. [3].La activacin de la rodopsina puede cambiar la conformacin de la cola y de esa forma facilitar la fosforilacin. En la figura 2. y en la figura 3, es posible apreciar lo anteriormente descrito.

Figura 3. Representacin en dos dimensiones de la secuencia de rodopsina. El receptor tiene siete

hlices transmebrana (H1-H7) y una hlice anfiptica (H8) que esta situada en la superficie citoplasmtica de la membrana. Los aminocidos son mostrados con cdigos de una sola letra. CL, bucle citoplasmtico; CT, terminal C; EL, bucle extracelular; NT, N terminal.[3]

Isomerizacin del cromforo 11-cis-retinal: un paso clave en el proceso de fototransduccin

El cromforo fotorreactivo de todos los receptores visuales de los vertebrados es el ismero 11-cis del retinal. Ante la presencia de luz este cromforo sufre un proceso de isomerizacin transformndose en el ismero todo-trans-retinal. En la rodopsina, el retinal esta unido a un residuo de Lys2967.43 a travs de un enlace de una base de Schiff protonada. La carga positiva creada por la protonacin de la base de Schiff incrementa la deslocalizacin a lo largo de la conjugacin de las cadenas de retinoides y causa un corrimiento de la banda de absorcin de un rango de longitud de onda corta al espectro visible. La

interaccin entre un residuo de Glu1133.28 y la base de Schiff es esencial no solo para regular la longitud de onda, sino tambin para mantener al receptor en la conformacin inactiva. Como ya se haba mencionado, la absorcin de la luz por parte del cromforo retinal induce a la isomerizacin de la conformacin cis a la conformacin trans a travs del doble enlace C11-C12 del retinal[3]

Figura 4. Fotoisomerizacin de la rodopsina. A partir de la absorcion de la luz, el 11-cis-retinal

isomeriza a todo-trans-retinal[3]

Los residuos aminoacidicos que se encuentra alrededor del cromoforo 11-cis-retinal se pueden observar en la figura 5. .

Figura 5. Residuos aminoacdicos presentes en la vecindad del cromforo. El ismero 11-cis-retinal

se encuentra de color morado. [2]

Cascada de reacciones desencadenada a partir de la activacin de la rodopsina

Los principales pasos de la cascada de reacciones de las protenas G son los siguientes: Fotoisomerizacin: El proceso de visin empieza cuando el cromforo retinal perteneciente a la rodopsina, es isomerizado debido a la captura de un foton. En cuestin de milisegundos la rodopsina sufre una serie de transiciones intramoleculares que conducen a un estado conformacional llamado metarodopsina II, que es capaz de activar la protena G especifica del fotorreptor denominada transducina.[1] Activacion de la transducina: La metarodopsina interactua con enlace GDP, formando transducina trimerica. La metarrodopsina activa la transducina por medio de un rpido intercambio de GDP a GTP en Gt ; el cual es seguido de una rpida disociacin de la transducina de la metarodopsina.[1]

Activacion de la fosfodiesterasa: En este paso Gt GTP, estimula la actividad de su enzima efectora cGMP fosfodiesteresa tambin denominada PDE. Este enzima es un heterotetramero que contiene dos subunidades catalticas idnticas o casi idnticas y dos subunidades reguladoras idnticas , las cuales juegan el papel de inhibidores de la actividad de la PDE. La actividad de PDE resulta del enlace de Gt con la subunidad , de este modo se remueve el inhibidor, limitando a que PDE este sometido a la imposicin del sitio cataltico de la subunidad o de la PDE.[1] Hidrolisis del GMP cclico y el cierre del canal cGMP : La activacin de PDE causa la reduccin de la concentracin citoplasmtica de cGMP, el segundo mensajero del proceso de fototransduccin, y esto causa el cierre de los canales catinicos selectivos de cGMP localizados en la membrana plasmtica. El cierre de estos canales reduce la corriente interior que normalmente es transportada por medio de los iones Na+ y Ca+ durante la oscuridad, resultando que la membrana se hiperpolarice diminuyendo la liberacin del transmisor sinptico glutamato en el terminal del fotorreceptor.[1]

Figura 6. Ciclo de activacin e inactivacin de la protena G en el proceso de fototransduccin.[1] Figura 7. Hiperpolarizacin de los bastones inducida por la luz.[5]

A continuacin se muestran una figura en que se describe claramente cada paso de la cascada de reacciones.

Figura 8. Consecuencias moleculares de la absorcin de un fotn por parte de la rodopsina en el

segmento externo del bastn. Los pasos 1 al 5 describen el proceso de excitacin y los pasos del 6 al 9 describen el proceso de recuperacin y adaptacin despus de la iluminacin.[5]

Conclusion
La rodopsina juega un rol importante en el proceso de fototransduccin ya que este receptor acoplado a proteinas G, contiene el cromforo 11-cis-retinal que ante la presencia de luz se isomeriza a todo-transretinal. Dicho proceso de isomerizacin es el abrebocas para el comienzo de la cascada de reacciones que permiten el proceso de visin.

Referencias [1] Arshavsky VY, Lamb TD, Pugh EN. (2002) .G proteins and phototransduction. Annu Rev
Physiol;64:153187 [2] Palczewski, K. (2006). G protein-coupled receptor rhodopsin. Annu. Rev. Biochem. 75, 743-767. [3] Smith, S. O. (2010). Structure and activation of the visual pigment rhodopsin. Annu. Rev.Biophys. 39, 309328 [4] Okada, T., Ernst, O. P., Palczewski, K., and Hofmann, K. P. (2001).Activation of rhodopsin: new insights from structural and biochemical studies, Trends Biochem. Sci. 26, 318-324. [5] Nelson, D. L. & Cox, M. M. Lehninger Principles of Biochemistry, 5th ed. New York: Freeman, 2008.P.457-459

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