Criterios de validacin en mtodos analticos instrumentales para industria farmacutica

Rosso, A.; lvarez, P.

Centro de Investigacin y Desarrollo en Qumica y Petroqumica (CEQUIPE)

OBJETIVOS La produccin de frmacos incluye el uso de muchas tcnicas analticas distintas. Existe un destacable desarrollo de criterios establecidos para ser usados en validaciones en lo referente a mediciones que utilizan las tcnicas cromatogrficas. Sin embargo el desarrollo de un nuevo producto involucra, la mayora de las veces, el uso de otras tcnicas de medicin distintas a la citada para cuyos casos se dificulta obtener criterios de referencia. El objetivo de esta comunicacin es presentar algunas consideraciones que pueden ser utilizadas para definir el apto para el propsito en validaciones de mtodos analticos instrumentales. MATERIALES Y MTODOS Clasificacin de tipos de mtodos analticos para frmacos de la USP 24 (farmaco[1] pea de los Estados Unidos) segn: Ensayos tipo I: Ensayo para cuantificacin de componente mayoritario en productos farmacuticos terminado. Ensayos tipo II: Ensayo para determinacin de impurezas y compuestos de degradacin en producto farmacutico terminado.(incluyendo tanto ensayos cuantitativos como ensayo de lmite). Ensayo Tipo III Ensayos para la determinacin de caractersticas de performance de un producto farmacutico. Ensayos Tipo IV Ensayos de identificacin de producto farmacutico.

En ella se describen qu parmetros son recomendables validar en funcin del tipo de ensayo: exactitud, precisin, especificidad, lmites de deteccin y cuantificacin, rango y linealidad. RESULTADOS Se presentan consideraciones referidas a dos parmetros de validacin que frecuentemente llevan a confusiones en mtodos analticos: la precisin y el lmite de deteccin de mtodos, al definir su aptitud frente a una validacin. Precisin: La forma ms comn de medicin en los laboratorios involucra el uso de distintos equipos y distintos analistas para obtener resultados de un mismo mtodo. Por ello la evaluacin de la precisin del mtodo es mejor que sea validada en trminos de su precisin intermedia, es decir como la reproducibilidad intralaboratorio (distintos analistas, das, equipos, etc.). Si bien presentar dispersiones mayores (en cada nivel de concentracin) que si se valida en trminos de repetibilidad, reflejar mejor la capacidad de medida que puede ofrecer el mtodo puesto a punto. A partir de un grupo importante de ensayos colaborativos organizados por AOAC (Association of Official Analytical Chemists) [2] durante varios aos Hortwitz dedujo esta ecuacin emprrica:

CV (%) = 2 (1 0.5 log C )

donde: C es la concentracin del analito (1) Esta expresin muestra el aumento del CV (coeficiente de variacin) a medida que disminuye la concentracin del analito en estudio. Ver Tabla I.

4 Jornadas de Desarrollo e Innovacin, Noviembre 2002

Tabla I. Mximos coeficientes de variacin porcentuales esperables en funcin de la concentracin del analito a medir Coeficiente de Variacin CV % 2 2.8 4 5.7 8 11.3 16

% analito 100 10 1 0.1 0.01 0.001 0.0001

Proporcin de del analito 1 10

-1

CONCLUSIONES Estas consideraciones aqu presentadas pueden ser tiles para definir si los resultados estadsticos resultantes de un proceso de validacin satisfacen los requisitos para poder definir a la tcnica desarrollada como apta. Sin embargo la clave de un estudio de validacin sigue residiendo en poder definir correcta y objetivamente esos requisitos de aptitud en conjunto con el cliente, que es quin aplica sus procesos y conoce sus especificaciones. Sin ellos el proceso de validacin proveer datos que no permitirn decidir estadsticamente en que casos el mtodo aplicado es apto y para que casos deja de serlo. Por ltimo, en los casos en que el cliente no conozca las especificaciones a cumplir, se deber asesorar al mismo basndose en especificaciones de mtodos en matrices similares o en base a la experiencia profesional previa en trabajos similares por parte del equipo de validacin. REFERENCIAS
[1] USP 24 The United States Pharmacopeia -NF19 The National Formulary, Chapter<1225> Validation of Compendial Methods, Enero 2000. ISBN 1-889788-03-1. [2] Hortwitz W. "Evaluation of Analytical Methods used for Regulation of Food and Drugs" Anal. Chem. 54(1):67A. 1982 [3] EURACHEM Guide "The Fitness for Purpose of Analytical Methods - A laboratory Guide to Method Validation and Related Topics"First English Edition 1.0, Diciembre 1998.ISBN 0-948926-120.

10-2 10-3 10-4 10 10

-5 -6

Estos valores deben ser tomados en forma orientativa, ya que no todos los mtodos pueden ajustarse a ellos y sin embargo no por ello dejar de demostrar aptitud para un propsito definido. Lmite de Deteccin (mtodos cualitativos): Una aproximacin en estos casos es evaluar el nivel de concentracin donde se pierde la identificacin positiva de una muestra blanco fortificada con el analito a validar. Se analizan 10 rplicas a cada nivel de concentracin decreciente hasta encontrar el intervalo de concentracin en que la relacin positivos:negativos sea al menos de 1:9 . Otras aproximaciones grficas pueden ser utilizadas. Lmite de Deteccin (mtodos cuantitativos): Existen criterios definidos por USP para este parmetro, por ejemplo calcularlo a partir de la relacin seal:ruido o a partir de la curva de calibracin. En este ltimo caso, se utiliza la pendiente de la curva de calibracin y la desviacin estndar de un blanco. Sin embargo no siempre este criterio ser aplicable en una validacin, por ejemplo, cuando el blanco genera una seal significativa. En estos casos es ms til el criterio recomendado por [3] EURACHEM que establece como lmite de deteccin el promedio de una serie de blancos ms 3 veces su desviacin estndar.

Para mayor informacin contactarse con: Alfredo Rosso alfredo@inti.gov.ar

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