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Daty Dasy - Farmcia

TCNICA PARA COLORAO DE LMINAS DE SANGUE ESFREGAO SANGUNEO CORADO COM WRIGHT Roteiro: - Coletar sangue total com EDTA e confeccionar lminas para futura colorao wright; - Caracterizar a qualidade de uma boa distenso sangunea; - Realizar a colorao de Wright.

Fundamentao Terica dos corantes: Os corantes hematolgicos, em geral, baseiam-se na mistura de Romanowsky: azul de metileno (corante bsico) + eosina (corante cido), permitindo a colorao simultnea do ncleo e citoplasma das clulas. Enquanto o corante bsico confere cor azul violcea aos cidos nuclicos, nucleoprotenas, grnulos basfilos e fracamente os grnulos dos nuetrfilos, a eosina confere cor vermelha ou laranja hemoglobina a aos grnulos eosinfilos. Tradicionalmente, o citoplasma corado de azul e os grnulos de prpuras so chamados basfilos, enquanto que os grnulos violeta ou prpura-rosados, azurfilos. Por outro lado, clulas predominantemente rosas so chamadas acidfilas e componentes corados de laranja, eosinfilos. A manuteno do pH ideal diretamente proporcional qualidade da colorao: - pH da gua > 7,0; lmina mais azulada - pH da gua < 7,0; lmina mais alaranjada

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FASES DA COLORAO Fixao: a preparao a ser corada dever ser previamente fixada. O fixador rotineiro mais usado em hematologia o metanol, que deve ser aplicado sobre a lmina por 01 a 03 minutos. O corante, preparado em soluo alcolica, quando aplicado sobre a lmina (nesse perodo de tempo) realiza esta etapa que a de fixao. A colorao obtm-se adicionando-se gua de colorao (gua tamponada, pH=7,0 ou gua destilada, recentemente fervida) sobre o corante, ionizam-se os sais contidos na soluo. A lavagem feita aps a colorao, as lminas so lavadas sob jato de gua corrente e em seguida secas ao ar.

NOMENCLATURA USUAL Quando uma estrutura se cora, revelando a mesma cor do corante, diz-se que uma colorao ortocromtica; quando a estrutura toma uma cor diferente daquela do corante, diz-se que uma colorao metacromtica; As estruturas celulares que tem afinidade pelo azul de metileno so chamadas basfilas, corado-se em azul; as que tem afinidade pelos azures so chamadas azurfilas, corando-se em prpura (metacromasia); as que tem afinidade pela eosina so chamadas acidfilas, corando-se em rosa e as que tem afinidade pela mistura complexa so chamadas neutrfilas, corando-se em salmo. NOTA: COLORAO PANPTICA CORANTE OU PROCESSO DE COLORAO QUE CORA AS ESTRUTURAS MICROSCPICAS DE VRIAS CORES. Romanowsky corante neutro primitivo. Materiais e Reagentes: - Lminas de vidro - suporte de colorao - corante wright - lcool metilico Procedimento para preparo do corante: - Pesar 3g do corante wright - Colocar o wright em 1 litro de lcool metlico, verificar bem se o material est bem tampado - Sacudir bem para garantir uma correta homoneizao - Colocar na estufa 37C por 24 horas - Filtrar o corante utilizando gazes esterilizadas e filtro de vidro ou plstico Procedimento para corar os esfregaes de sangue: - Colocar as lminas no suporte de colorao - Colocar por dois minutos o corante sob o esfregao na lmina (a depender pode variar entre 1 a 2 minutos- testar) - Verter gua destilada em toda superfcie da lmina deixando por mais 2 minutos - Lavar a lmina em gua corrente - Limpar a lmina do lado contrrio ao esfregao, com gaze e com cuidado para no quebr-la - deixar a lmina secar naturalmente - observar no microscpio com as objetivas de 40X e de 100X (imerso) Ref.: Prof Ledilce Atade, Prof Manuel Jr.; Hemato ufvjm.

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