Resumo de microbiologia Diagnostica Bom..a 1 era pra citar 3 patgenos no trato gastrointestinal superior.

2: falar detalhadamente como faria uma boa cultura de orofaringe..falar todo o procedimento

Resumo de microbiologia Diagnostica

1 Fundamentos laboratoriais do diagnostico microbiolgico

3: era sobre urocultura e tinha um texto que ela descrevia o mtodo..e ai ela perguntava se estava certo ou errado e se estivesse errado tinha que justificar.. 4: era igual a tres mas era coprocultura. 5: falar equais os tipos de bacteremia e explicar 6: desenhar o rugai..colocar onde ficava cada prova e escolher uma das provas para explicar 7: pedia explos de cocos gram positivos...bacilo gram positivo..dipoclocos gram negativos..cocos gram negativos nao fermentadores (algo assim) 8: era verdadeiro e falso..a espeito de hemocultura e CRV..CVR>.sei la..haahha essa eu nao fazia ideia.. 9: era um teste de hemocultura

O diagnostico microbiolgico : - Auxilia no diagnostico e tratamento das doenas infecciosas, avalia e monitora a teraputica antimicrobiana, ajuda a controlar infeces hospitalares (determinando as medidas de controle das infeces). - Determina o perfil de sensibilidade e avalia o surgimento de resistncia antimicrobiana. O medico deve: solicitar o exame qdo indicado, na requisio deve conter os dados que possam auxiliar o laboratrio, interpretar corretamente os resultados para instituir a teraputica mais adequada, e sempre que necessrio comunicar-se com o laboratrio. O laboratrio deve: coletar e transportar o material de forma adequada, identificar as amostras, selecionar as tcnicas mais adequadas para cada caso, emitir os laudos, auxiliar o medico na interpretao dos exames. O laboratrio de microbiologia deve se estruturar adequadamente para isolamento, identificao e perfil de sensibilidade, avaliar a qualidade do material clinico coleta e ter critrios para rejeio das amostras.

Procedimentos iniciais em microbiologia clinica

Princpios a semeadura primaria adequada uma das mais importantes e fundamentais etapas da rotina na microbiologia. Qdo a coleta realizada em outro lugar (hospitais e clinicas) se deve observar data e horrio da coleta, natureza do material clinico, sitio anatmico da coleta. A escolha dos meios de cultura mais apropriados, temperatura, atmosfera e tempo de incubao garantem o sucesso do diagnostico.

Resumo de microbiologia Diagnostica Qualquer material pode ser processado para cultura: Urina, Fezes, Escarro, Lavado brnquico, Lquor, Esperma, Fragmento de tecido, Lquidos orgnicos , Secrees em geral.

Resumo de microbiologia Diagnostica transporte, impossibilitando assim a multiplicao bacteriana durante o acondicionamento da amostra no meio, independente da temperatura.

COLETA E TRANSPORTE - os materiais devem ser coletados e enviados ao laboratrio em meios de transporte e/ou frascos adequados para cada tipo de material, de acordo com o exame solicitado. Alguns exemplos so: - Frascos de coleta com boca larga e tampa de rosca para coleta de fezes, urina ou escarro. - Swab com meio Stuart ou AMIES para Isolamento de bactrias aerbias e anaerbias facultativas

Recebimento da amostra Verificar identificao Verificar o volume de amostra x exames solicitados Verificar se amostra foi coletada em meio de transporte, swab e/ou frasco apropriado Verificar se a amostra adequada para o exame solicitado

- Swab com Meio de Stuart ou AMIES com carvo ativado para isolamento de bactrias aerbias e anaerbias facultativas, preferencialmente para isolamento de gonococos, hemfilos e pneumococos. - Meio Cary Blair conservante de fezes para isolamento de enteropatgenos - Meio TSA em tubo para o envio de cepas de microrganismos para exames complementares ou para confirmao da identificao laboratorial.

RECOMENDA-SE QUE TODO O PROCESSAMENTO INICIAL DE AMOSTRAS CLNICAS SEJAM REALIZADOS EM CABINE DE SEGURANA BIOLGICA O ideal semear imediatamente ou at 2h aps coleta aps o recebimento da amostra.

Tcnicas microscpicas
A microscopia a tcnica mais comum utilizada para deteco de microrganismos diretamente de amostra clinicas e para a melhor caracterizao morfotintorial dos isolados em cultura. Colorao pelo mtodo de gram - metodologia utilizada para classificar as bactrias com base na morfologia e na reao de colorao pelo mtodo de gram. As bactrias podem ser gram positivas ou negativas de acordo com a diferena na composio da parede bacteriana. As bactrias gram positivas possuem uma parede espessa de peptideoglicano e grandes quantidades de acido teicoico, o qual retem o corante inicial (cristal violeta), no sendo afetadas pela descolorao com lcool-acetona. Com isso as clulas aparecem azul escuro. As bactrias gram negativas possuem parede celular constituda de uma camada delgada (fina) de peptdeoglicano que permite a descolorao do cristal violeta com lcool-acetona e posterior colorao com o corante de fundo, safranina ou fucsina.

Resultado Os meios de transporte so inertes, isto , preservam a viabilidade dos microrganismos nas amostras e evitam a proliferao bacteriana, mantendo assim a proporo e a quantidade dos diversos microrganismos. Esses meios frequentemente contem Agar semi-solido que auxilia na preservao contra a dessecao dos microrganismos. Alguns contem carvo ativado ou outra substancia com a finalidade de adsorver e remover agentes txicos como cidos graxos. O meio de transporte preconizado por Aimes uma modificao do meio Stuart, no qual o glicerofosfato de sdio foi substitudo por um fosfato inorgnico. A presena de glicerofosfato no meio Stuart possibilitava que espcies poucos exigentes se multiplicassem (microrganismos contaminantes) alterando a proporo dos microorganismos presentes, dificultando a recuperao dos microrganismos mais fastidiosos. O fosfato inorgnico elimina o eventual crescimento de contaminantes. No h fonte de carbono nem de energia nos meios de Gram negativo Gram positivo

Cepa Escherichia coli Staphylococcus aureus

Resultado esperado Bacilos corados em rosa Cocos corados em azul escuro ou violeta

Cultura (isolamento e identificao)

Os meios de cultura so preparaes slidas, semi-slidas ou lquidas, simples ou complexas que se empregam no laboratrio para cultivar micro-organismos, constituindo ambientes artificiais que se assemelham tanto quanto possvel s condies naturais.

Resumo de microbiologia Diagnostica Selecionar o meio de cultura adequado Controle de qualidade do meio de cultura no uso Aparncia, validade e ausncia de contaminao Identificar os meios com informaes de recuperao da amostra origem No ocultar o nome nem a validade dos meios usados

Resumo de microbiologia Diagnostica

Amostra em Swab esfregao e cultura eluir swab em salina e utilizar para semear em esgotamento. Amostra de aspirados e exudatos em seringa transferir para tubo estril, homogenizar semear por esgotamento, fazer esfregao. Amostra de escarro selecionar a poro mais purulenta ou sanguinolenta, preparar o esfregao pela colorao de gram, semear por esgotamento. Amostra de lquidos orgnicos centrifugar, remover o sobrenadante e semear o sedimento, preparar lamina. Amostra de fragmentos de biopsia de tecidos transferir a amostra para placa estril, fragmenta-la com bisturi semear por esgotamento. Amostra de urina Jato mdio homogenizar a amostra e semear com a ala, fazer esfregao. Primeiro jato centrifugar, retirar o sobrenadante, semear o sedimento, preparar a lamina para demarcao. Amostras sseas remover tecidos moles, transferir para o meio thioglicolato (THIO) que um caldo. Amostra de fezes semear em pequenas pores em meios apropriados por esgotamento. Transferir 4 a 5 pores para caldos enriquecidos.

Isolamentos Tcnicas de semeadura

Semeadura quantitativa em estrias com ala calibrada com ala calibrada e flambada, faz o inoculo inicial traando uma linha central, em seguida so traadas estrias verticalmente a esta linha central em zig-zag na superfcie do meio.

Resumo de microbiologia Diagnostica

Resumo de microbiologia Diagnostica IDENTIFICAO

Semeadura por esgotamento descarregar o material na rea 1 (podendo passar o prprio swab ou se for liquido tocar com a ala flambada no material e espalhar na rea 1), com a mesma ala tocar na rea 1 e fazer estrias (rea 2), em seguida tocar na rea 2 e fazer estrias na rea 3 de maneira bem ampla para se ter um bom isolamento bacteriano.

MACROSCOPIA E MICROSCOPIA DAS COLNIAS IDENTIFICAO BIOQUMICA IDENTIFICAO SOROLGICA MTODOS MOLECULARES

Pag 58 do livro escanear

Semi-quantitativa

Cultura Qualitativa

Resumo de microbiologia Diagnostica

9 verifica-se Sensibilidade a novobiocina verifica a sensibilidade ao antibitico

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Provas bioqumicas Identificao laboratorial de Streptococcus

Caractersticas: so cocos gram positivos, que podem se apresentar isolados, aos pares ou em cachos. Catalase verifica a produo da enzima que cataliza a reao de transformao do perxido de hidrognio em gua e oxignio gasoso. Deve se colocar uma gota Deve-se de H2O2 3% na lamina + 1 colonia. Se houver formao de bolhas o teste positivo.

Deve-se preparar uma suspensao na escala 0,5 de M.F. com um swab, se semear em placa de Agar sangue e acrescentar um disco de novobiocina. gar Incubar a 35-37C por 18-24h em aerobiose. Medir o halo. 24h

Resultado:

- Se o halo for >16mm sensvel - Se o halo for <16mm resistente -> S. saprophyticus

Catalase DNAse verifica a produo da e enzima que degrada DNA ou RNA. Deve-se semear uma colnia em spot em se uma placa com DNA. Incubar a 35 - 37 por 24h em aerobiose. Revelar com HCL 1N. + + + +

Coagulase + -

Sensibilidade a novobiocina sensvel sensvel sensvel Resistente

resultado staphylococcus S. aureus S. epidermides S. haemophylos S. saprophyticus

Obs.: Teste de DNAse positivo para s. aureus formao de halo

Coagulase h duas formas ligada e livre A forma livre secretada extracelularmente e catalisa a converso de fibrinognio em fibrina solvel, promovendo aglutinao dos estafilococos. Colocar um inoculo denso em um tubo contendo plasma de coelho. Incubar por 4h a 37C em aerobiose. Resultado positivo formao . de coagulo, resultado negativo incubar por mais 18 ubar 18-24h a temperatura ambiente (pq na estufa pd haver produo de hemolisinas que dissolvem o coagulo). A forma ligada (clumping factor) esta na parede bacteriana e transforma fibrinognio em fibrina insolvel diretamente.

Colocar uma gota de plasma de coelho + 1 suspenso densa. Observar aglutinao em 10seg. aps esse tempo falso e +.

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Identificao laboratorial Streptococcus

Caractersticas : So cocos gram +. Dispostos aos pares, catalase , possuem algumas necessidades nutricionais: 3537C, 5 a 10% de CO2.

Hidrlise de hipurato de sdio capacidade da bactria de hidrolisar o hipurato de sodio em glicina e acido benzoico.

Revelao glicina add reativo de ninhidrina se + cor azul escuro/roxo

Apresentam hemlise em Agar sangue de carneiro (AS): Alfa hemlise- lise parcial das hemcias meio de cultura fica esverdeado Beta hemlise- lise completa das hemcias meio de cultura com halo transparente em torno da colnia. Gama hemlise ausncia de hemlise meio de cultura sem alterao de cor.

Revelao de acido benzoico add cloreto frrico se + formao de um precipitado abundante.

TESTE BIOQUIMICOS:

Prova de bile-esculina identificao de bactrias capazes de crescer em meio contendo 40% de bile e hidrolizar a esculina em esculetina.

Teste de CAMP faz a identificao presuntiva de estreptococos do grupo beta hemoliticos (S. agalactiae).

A esculetina reage com os ons frricos presentes no meio e forma um precipitado escuro (enterococcus faecalis)

Utiliza-se uma cepa de S.aureus produtora de beta hemolisina, faz um risco no meio da placa. Pega-se a bactria a ser testada e faz se um risco horizontal sem encosta no risco vertical de S. aureus. Alguma bactrias produzem uma prot extracelular (fator camp) que age em sinergismo com a beta hemolisina gerando uma hemolise em forma de seta.

Prova de tolerncia ao sal ou crescimento em NaCl 6,5% - o microrganismo semeado em caldo NaCl 6,5% e incubado por 18-24h. se houver cres 24h. crescimento teste positivo.

Prova PYR (pirrolidonil arilamidase) identifica microrganismos que fazem hidrolise do pyr

Prova de Sensibilidade optoquina diferencia S. pneumoniae de outros estreptococcus do grupo viridans. Realizado em AS mede-se o halo de inibio halo >14mm sensvel S. pneumoniae Halo < 14mm resistente outros provas de identificao

Resultado

Estreptococos do grupo A e enterococcus. Em caso +, a cor do meio fica vermelha/Pink

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Resumo de microbiologia Diagnostica Pag 88 e 89 do livro escanear

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TABELA 5.3

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TABELA 5.4

Resumo de microbiologia Diagnostica

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ENTEROCOCCUS

Identificao de enterobacterias
As caractersticas iniciais que uma bactria pertence a famlia Enterobacteriaceae a presena de hemlise e colnias de tamanho varivel. So bacilos ou cocobacilos gram negativos e so anaerbios facultativos. Caldos para enriquecimento: selenito (inibe coliformes e algumas cepas de shigella) e tetrationato (inibe gram + e coliformes).

Os micro-organismos do genero Enterococcus so cocos Gram- e apresentam necessidades nutricionais variveis e o crescimento pode requerer meios complexos, contendo soro ou sangue. A temperatura tima de crescimento e de 35C, porem, a maioria das amostras tolera temperaturas que variam de 10oC a 45oC. Os enterococos sao distribudos em ambientes diversos. Nos seres humanos fazem parte da microbiota do trato gastrintestinal, da cavidade oral e do trato geniturinario. Estes microorganismos podem tolerar temperaturas equivalentes a 60oC por ate 30 minutos e so capazes de crescer em meios contendo cloreto de sodio a 6,5% . E. faecalis e capaz de colonizar os sistemas de canais radiculares, utilizando- se provavelmente dos substratos oriundos dos fluidos dos tecidos conjuntivos subjacentes (osso alveolar e ligamento periodontal). Dentre os fatores de virulncia destacam-se as enzimas lticas, citolisinas, substancias de agregao, feromonios e acido lipoteicoico. E. faecalis tambem pode interferir com a ativao dos linfcitos e outros grupos celulares, contribuindo para o insucesso da teraputica endodontica. Alem da sua habilidade para invadir e permanecer no interior dos tbulos dentinarios apresenta elevada resistncia aos curativos de demora utilizados entre sesses, inclusive aqueles a base de hidrxido de clcio. Foi descrito que as cepas de E. faecalis possuem uma bomba de prtons capaz de proteger o citoplasma bacteriano do elevado pH conferido pelos produtos contendo hidrxido de clcio. A espcie tambm e capaz de formar

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biofilmes onde as clulas bacterianas formam estruturas multicelulares coesas de difcil remoo pelo sistema imunolgico, alem de dificultar a atividade dos agentes antimicrobianos. Tais propriedades conferem aos E. faecalis grande poder agressivo aos tecidos perirradiculares e maior resistncia ao controle das infeces endodontias. (Artigo disponvel em -> http://revista.aborj.org.br/index.php/rbo/article/viewFile/245/212)

Identificao de enterococcus

Morfologia bacilos ou cocos Propriedades tintoriais de gram Gram negativos Caracterstica morfolgica da colnia em Agar o Hemlise varivel o Colnias de tamanho varivel, podendo se dispersar no meio

EMB (Eosina Metileno Blue) - um meio de cultura diferencial que inibe o crescimento de bactrias Gram positivas e indica se a bactria fermentadora ou no de lactose. Bactrias fermentadoras de lactose apresentam-se em colnias com o centro preto. Colnias de Escherichia coli so facilmente identificveis por apresentarem colorao verde metlico no meio EMB.

Meios de cultura
Meio no seletivo Ricos Agar sangue de carneiro (E. coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus spp, serratia marcescens) Meio seletivo e diferencial

o
o MC (Mac conkey) composto de lactose, sais biliares e cristal violeta, indicadores de pH (vermelho neutro) impede o crescimento de bactrias gram positivas (E. coli, citrobacter SP, serratia marcescens). SS (salmonella-shigella) Altamente seletivo Salmonella e Shigella, Lactose nico acar, [ ] de sais biliares e citrato de sdio inibem G+ e coliformes, Indicador de pH vermelho neutro, Tiossulfato de sdio/citrato frrico deteco H2S.

VB Verde Brilhante - Meio seletivo/diferencial isolamento de Salmonella (exceto Salmonella Typhi), Lac e sac CH, [ ] de verde brilhante inibe G+ e alguns G(-), inclusive Shigella e Salmonella enterica Typhi , Indicador de pH vermelho de fenol, Salmonella - pink

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o
Caldos para enriquecimento o o Selenito - o selenito de sdio inibe coliformes e pode inibir algumas cepas de Shigella Tetrationato - sais biliares inibem G+, tetrationato (formado aps adio de soluo de iodo) inibe coliformes

Prova bioqumica de TSI (Trplice Acar Ferro) para verificar se a bactria uma fermentadora de glicose

Como diferenciar as Enterobacteriaceae ?

Metabolismo fermentativo/oxidativo Teste de oxidase Prova da citocromo-oxidase - Este sistema enzimtico est relacionado com os citocromos da cadeia respiratria de alguns microrganismos. A prova consiste em colocar uma gota do reagente incolor tetrametil p-fenileno de amina, recm preparado e protegido da luz, em um papel de filtro. Em seguida, vrias colnias do microrganismo em estudo so espalhadas sobre a rea do papel de filtro contendo o reagente, utilizando uma ala de platina ou um basto de vidro. A prova considerada positiva quando na mistura do reagente com a massa bacteriana desenvolve-se a cor prpura em at 1 minuto. Na reao negativa no h desenvolvimento de cor prpura. As enterobactrias so oxidase negativas e podem ser diferenciadas de outros bacilos Gram negativos. A prova pode ser feita tambm em culturas em meios slidos, adicionando-se o reagente oxalato de p-aminodimetilanilina. A reao inicia-se com o desenvolvimento de cor rsea, marrom e finalmente uma colorao negra na superfcie das colnias indicativa da produo de citocromo-oxidase, representando um teste positivo. O teste negativo se no ocorrer alterao da cor ou houver o desenvolvimento de uma cor rsea plida.

E. coli

Pseudomonas

TSI - Meio nutricionalmente rico com inibidores que permite o crescimento da maioria das espcies bacterianas, s no cresce as mais exigentes e anaerbios. O TSI s pode ser realizada com amostras j isoladas em placas com meio seletivo para bacilos gram negativos entricos. O indicador de pH vermelho de fenol (pH cido indicador fica amarelo; pH alcalino o indicador fica vermelho).Um ponto importante a proporo entre os aucares sendo que esse meio apresenta a proporo de Glicose : Lactose : Sacarose 1:10:10 (g/L), h tambm tiossulfato de sdio, sulfato ferroso e peptona.

Sorotipagem (caracterizao antignica)

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Fermentao dos Aucares

VM (Vermelho de Metila) Teste que avalia se as bactrias que fermentam a glicose pela via cida mista, com isso h a produo de vrios pela cidos (cido frmico, ltico, actico) que faz com que o pH do meio fique abaixo de 4,4 que o limite de viragem do indicador de pH. O indicador de pH o vermelho de metila que em pH abaixo de 4,4 vermelho e acima de 6 amarelo. Produo de H2S Se a bactria produzir a enzima tiossulfato redutase ela ira degradar o tiossulfato d e sdio presente no meio de produzindo H2S, este reage com o sulfato ferroso formando um precipitado preto de sulfeto ferroso. Para que esta reao ocorra necessrio que o meio esteja cido, assim se a base do tubo estiver negra deve ser lida como que a bactria fermentadora de glicose. tria

Produo de Gs H bactrias que degradam o cido frmico proveniente da fermentao da glicose produzindo H2 ;CO2 devido a ao da enzima formiase. A produo de gs evidenciada pela formao de bolhas e ou o meio pode rachar. Se houver muita produo de gs com o deslocamento do meio pode o seer indicativo de Klebsiela e Enterobacter. Para prosseguir com as outras provas Bioqumicas devemos usar as colnias de bactrias que cresceram na parte superior do TSI. Entretanto devemos ter certeza que no TSI s tem uma Entretanto espcie, isso obtido a partir de meios seletivos e caldos nutritivos. Indol O indol produzido a partir do trptofano existente no meio de cultura sob a ao da triptofanase, h tambm a produo de cido pirvico e amnia. O indol pode ser detectado pela formao de um anel rosa pink na parte superior do tubo aps a adio p-dimetilaminobenzaldedo (reativo de kovacs). dimetilaminobenzaldedo

VP (Voges Proskauer) H bactrias que utilizam a fermentao butilenogliclica, fermentam a glicose produzindo acetil acetil-metil- carbinol (acetona), butilenoglicol e pequenas quantidades de cidos.Quando adicionado KOH e na presena de O2 atmosfrico a acetona convertida em diacetila a adicio de alfa naftol nesta reao cataliza a produo de um alfa-naftol anel vermelho.

Resumo de microbiologia Diagnostica

25 Urease

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H bactrias que possuem a enzima urease que garante a capacidade de degradar a uria presente no meio liberando amnia, CO2 e H2O. A amnia reage formando carbonato de amnia que alcaliniza o meio.O indicador de pH o vermelho de fenol que em meio alcalino toma a colorao pink.

Citrato Este teste determina se a bactria capaz de o citrato de sdio como nica fonte de carbono para o seu metabolismo e crescimento. Deve ser utilizado o meio Citrato de Simmons, composto por citrato de sdio, fosfato de amnia e por azul de bromo fenol.Com o uso de citrato h a produo de hidrxido de amnia que eleva o pH fazendo que a reao se torne azul.

Fenilalanina Desaminase (FAD)

H bactrias que produzem enzimas que desaminam a fenilalanina presente no meio, originando o cido fenilpirvico, que reage com o cloreto frrico adicionado ao meio, desenvolvendo cor verde.Essa prova presuntiva desenvolvendo para Proteus, Morganela, Providencia.

Resumo de microbiologia Diagnostica

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Resumo de microbiologia Diagnostica motilidade negativa s observaremos a picada. Fica mais fcil de observar a motilidade pondo os tubos contra um folha de papel pautada, se conseguirmos observar as linhas atravs do tubo motilidade negativa.

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Lisina descarboxilase(LDC)

H algumas bactrias que possuem a lisina descarboxilase que descorboxila a lisina produzindo a cadaverina mais CO2, essa descaroboxilizao alcaliniza o meio.O meio contm o indicador azul de bromocresol, que em pH alcalino izao apresenta-se em cor roxo e em meio cido a cor amarela. A reao se processa em anaerobiose deve cobrir o se deve-se meio com leo mineral ou cera de carnba.

Mio (Motilidade, Indol e ornitina)

Se a bactria produz a enzima ornitina descarboxilase, ela ser capaz de descarboxilar a ornitina produzindo gs carbnico e putrecina, isso eleva o pH do meio. O indicador de pH usado o prpura de bromocresol que e, condies alcalinas se torna roxo. til para diferenciar entre Klebsiella (negaivo) e Enterobacter (positivo). lcalinas

A produo de Indol pode ser detectado colocando um papel filtro ou algodo umedecido com reativo de indol, na aula prtica o indol foi feito separado para que ficasse de forma mais didtica. ara A motilidade observada atravs do aspecto do meio, isso decorre do fato que o meio semi semi-slido e permite o crescimento bacteriano por todo o tubo. Se a motilidade positiva o aspecto do meio ser turvo enquanto que

Resumo de microbiologia Diagnostica

29 2 grupos importantes:

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Se a bacteria for indol + e citrato - pensar em E. coli Se houver a presena de mto gs e citrato +, com lisina e ureia + e colnia mucoide: +indol klebisella oxygoca - indol klebisella pneumoniae E. cloaceae lisina neg e indol neg E. aerogenes lisina posi e indol neg E. aglomerans lisina neg e indol posit, motilidade neg

Enterobactrias

BGN-F = Fermentadoras de glicose BGN-NF = No-Fermentadores de glicose Maior importncia clnica - Pseudomonas aeruginosa (Bacilo Gram-negativo aerbio, mvel, no-esporulado, Com 1 a 3 flagelos polares, Desenvolve-se bem em diversos meios de cultura e em diversas temperaturas (temp. tima: 37oC), Produz pigmentos solveis: piocianina (azul-esverdeado) e fluorescena (amareloesverdeado), Altamente patognica: resistncia a diversos antimicrobianos provas bioqumicas Oxidase negativos, hidrlise de esculina positiva e catalase positiva) Vrios gneros Acinetobacter SP (Utiliza vrias tipos de fontes de carbono em seu metabolismo expandindo seu habitat, Bacilo ou cocobacilo - Infeces: pneumonias, meningites, endocardites, infeces de pele e feridas e ITU), Burkholderia, Stenotrophomonas.

Serratia lisina posit, sacarose neg, motilidade neg Se a bactria for sem gs ou com pouca produo, lisina posit, sacarose neg e motilidade neg shigella Meio inalterado pseudmonas aeroginosa (indulto escuro) ou alcaligenes faecalis (induto esbranquiado).

Consideraes gerais Aerbios, No esporognicos, No utilizam a via fermentativa, Crescem na superfcie dos meios de cultura, Nomenclatura constantemente alterada. Metabolismo - Metabolismo fermentativo e oxidativo.

Bacilos Gram-Negativos No Fermentadores

Fatores de virulncia Adesinas (pili e cpsula), cpsula de alginato (confere proteo bactria, cepas mucides biofilmes, alginato: atividade contra aminoglicosdeos), Produo de proteases e enzimas proteolticas - inativam citocinas. Produo de leucocidina: citotoxina que atua na membrana celular dos leuccitos Produo de hemolisinas: contribui para invaso tecidual atravs de efeitos citotxicos secreo de pigmentos por P. aeruginosa como a piocianina: destruindo o epitlio respiratrio Lipopolissacardeos (endotoxina) Exotoxina A: potente inibidor de sntese proteica (necrose) Exoenzima S: protena de membrana celular com efeitos citotxicos e de adeso

Pg 93 figura 5.5

Mecanismos de Resistncia -lactamase Melato--lactamase Cefalosporinase Efluxo do antimicrobiano Alterao de protenas da membrana externa

Resumo de microbiologia Diagnostica Identificao Laboratorial Enzima Oxidase Motilidade Cocobacilos ou Bacilos Gram-negativos No utilizam CBI na ausncia de O2 Aerbios estritos Caractersticas que nos fazem suspeitar que estamos frente a um BGN NF - Falta de evidncia de fermentao da glicose, Crescimento pobre ou ausncia de crescimento em MC.

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Produo de pigmentos Meio de Tech & Flo contm peptonas especiais e [ ] de Mg2+ e sulfato aumentada aumentar a produo de pigmentos Bacto peptona (Tech) piocianina (azul turquesa luz visvel, sem fluorescncia sob UV) Peptona-3-proteose (Flo) pioverdina (amarela luz oteose visvel, com fluorescncia sob UV)

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Teste de OF Oxidao-Fermentao BGN-NF X enterobactrias (BGN-F) Diversos acares Tubo aberto (com oxignio) Tubo fechado (sem oxignio) Base OF (Hugh & Leifson) [ ] peptonas diminuda [ ] CBI aumentada [ ] gar diminuda Azul de bromotimol - p/ deteco de cidos
Descarboxilao de AA Caldo Moeller Pequena quantidade de substrato + inculo denso Reao positiva: intensificao da cor prpura ficao

Crescimento - Meios seletivos Agar Cetrimida (Pseudomonas sp.) BCSA (Burkolderia cepacia selective agar) Antibiticos para inibir crescimento de outras bactrias

Crescimento em MC a 42oC Identificar espcies de Acinetobacter

Prova de oxidase e motilidade

Resumo de microbiologia Diagnostica Diagnostico bacteriolgico das infeces da C.S. Bacteremia (presena de bactrias no sangue) pode ser: - Transitoria microrganismos da microbiota na C.S. - intermitente bactrias de um foco de infeco primrio vai para a C.S - Continua acesso direto a c.s - Escape aps 1 a 2 dias do inicio da antibioticoterapia supostamente adequada.

33 Diagnostico - Presena de drenagem purulenta no sitio vascular - Sinais flogisticos locais: dor, calor, eritema.

Resumo de microbiologia Diagnostica

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Hemocultura numero de frascos coletados devera ser considerado de acordo com a condio clinica do paciente. Duas a trs amostras de diferentes locais em intervalo de 30 min. o Cultura de cateter venoso central (CVC)- suspeita de colonizao presena de secreo purulenta - CVC curta permanncia (>15UFC) retirar a ponta (semi quantitativa) + hemocultura (qualitativa) = verificar se a hemo e a CVC de ponta for + tem o msm microrganismo. - CVC longa permanncia no remover, cultura da secreo peri cateter + hemocultura.

Septicemia complexa reao inflamatria sistmica a uma infeco, uma condio toxica sepse (LPS), o sangue se apresenta com cels fagociticas e a multiplicao dos microrganismos maior que a remoo pelos fagcitos.

Doenas do sistema vascular Tipos de infeco Intravascular o Endocardites anormalidade no endocrdio pela presena de microrganismos no sangue (coletar 3 amostras, puno venosa de diferentes lugares, em intervalos de 15 a 30 min). o Bacteremia associada ao uso de cateter intravenoso rotas de infeco superfcie externa do cateter. Infeces da C.S. podem ser: o Infecoes primarias do acesso vascular (por uso de cateter, tubos subcutneos ) complicaes infeco da C.S, focos metastticos em outros rgos. o Cateter vascular corpo estranho processo inflamatrio, infeco por pqnos inoculos (que pode ser contaminao do cateter, do canho, das solues ou hematognica foco infeccioso a distancia). o Fatores do hospedeiro idade, imunossupresso, seleo da microflora com antibiticos, gravidade da doena de base e etc. o Fatores relacionados ao acesso vascular durao do cateterismo, habilidade de introduzir o cateter, forma de insero, trocas e etc.

Hemocultura +

CVC No cultivado + > 15 UFC + >15UFC

Fazer Cultivar CVC Investigar outros focos No tratar observar evoluo (colonizao) Tratamento para bacteremia

Coleta da amostra - antissepsia local, volume da amostra, anticoagulograma, meio de cultura. - preparo do sitio de coleta lavar com sabo, enxaguar em gua estril, aplicar iodo e secar, aplicar lcool e secar. - Coleta seringa e agulha sistema fechado diretamente do cateter

Meios de cultura utilizados caldo rico (TSB, BHI) incubar a 35C.

Resultados S. aureus, S. pneumoniae, p. aeroginosa, c. albicans e enterobacterias.

Infeces extravasculares multiplicao localizada microrganismos que so drenados para os vasos linfticos e caem na C.S.