El proceso a travs del cual la energa de la glucosa u otra molculas combustibles es capturada por la clula en la forma de ATP se conoce

con el nombre de respiracin celular. Se pueden distinguir dos tipos de respiracin en la materia viviente: anaerbica y aerbica. La respiracin aerbica incluye la ruptura de la glucosa a travs de una serie de reacciones en las cuales finalmente interviene el elemento oxgeno. El oxgeno no reacciona directamente con las molculas de glucosa en las clulas vivientes. Sin embargo es una parte importante en la reaccin total de ruptura. Con excepcin de ciertos microorganismos como son algunos tipos de bacterias, la respiracin aerbica ocurre en clulas de todos los animales y plantas. La siguiente es una ecuacin general para la respiracin aerbica: MOLECULA DE COMBUSTIBLE + 02 ------~ FRAGMENTOS DE COMBUSTIBLE + H2O + ENERGIA.

Los fragmentos de combustible de la respiracin aerbica son generalmente anhdrido carbnico. La respiracin anaerbica ocurre en ausencia de oxgeno y es tpica de muchos microorganismos. Sin embargo, las clulas de organismos superiores son tambin capaces de llevar a cabo respiracin anaerbica, cuando la cantidad de oxgeno es limitada. Las clulas musculares en el hombre, por ejemplo, efectan respiracin anaerbica durante los perodos de ejercicio extenuante. E1 patrn de respiracin anaerbica se da en la siguiente ecuacin :

MOLECULA DE COMBUSTIBLE ------~ FRAGMENTOS DE COMBUSTIBLE + ENERGIA.

Los fragmentos de combustible de la respiracin anaerbica son C02 y ya cido lctico (C3H603) o alcohol etlico (C2HSOH), dependiendo del tipo clula en las cuales ocurre el proceso. Los principios qumicos sobre los cuales operan las respiraciones anaerbica y aerbica son similares. Ambos procesos son exergnicos y por lo tanto ruedan cuesta abajo; ambos tienen lugar en una serie de reacciones qumicas que realizan por pasos; ambos envuelven reacciones de oxidacin y

reacciones reduccin. La oxidacin comprende la eliminacin de electrones de un tomo de una molcula, mientras que la reduccin comprende su adicin a un tomo a una molcula. En las clulas vivientes, la energa se gana separando electrones dos a la vez, de molculas de combustible como la glucosa. El proceso clave de liberacin de energa tanto en la respiracin aerbica como anaerbica, es el transporte de electrones desde la molcula de combustibles a un aceptor de electrones. La molcula de combustible se oxida; el aceptor reduce. A medida que los electrones se transfieren caen desde niveles de energa ms altos a niveles de energa ms bajos. La energa que pierden al caer se incorpora a los enlaces fosfato de alta energa. Este proceso, de gran importancia, est diagramado en la Fig. 1-1.

Fig. 1-1. Diagrama general que muestra el principio relacionado con las oxidaciones biolgicas y el almacenamiento de energa en la forma de ATP. Las estructuras circulares marcadas de 1 a 4, representan molculas especficas transportadoras de electrones. Los electrones disminuyen en los niveles de energa potencial a 1 medida que pasan de una molcula transportadora a otra. Esta disminucin ocurre dentro de las nubes de electrones de cada molcula transportadora y est indicada por las distancias a, b y c. Los descensos en niveles energa dentro de cada transferencia resulta en la liberacin de pequeas cantidades de energa. Esta energa es capturada para la formacin de ATP. En todas las clulas vivientes, la energa de las molculas de combustible se captura a travs del proceso de transferencia de electrones. El mecanismo liberador de energa es la cada en los niveles de energa potencial de los electrones. Una mayor compresin de la complejidad y eficiencia de los sistemas moleculares se puede obtener al examinar detalladamente los procesos de respiracin anaerbica y aerbica. E1 estado inicial, llamado gluclisis, o

fermentacin, es el mismo para ambos tipos de respiracin. El segundo estado, conocido como ciclo del cido ctrico de Krebs es caracterstico de la respiracin aerbica.

Gluclisis: La primera fase de la degradacin de un combustible celular ordinario como la glucosa se debe a una va metablica llamada gluclisis (tambin conocida como va de EmbdenMeyefiof en honor de sus descubridores). Un hecho interesante es que la gluclisis siendo globalmente un proceso oxidativo, no hay intervencin de oxgeno molecular. Por tanto, se trata de un proceso anaerbico que quiz satisfizo las necesidades de las clulas mucho antes de que la atmsfera terrestre tuviera oxgeno molecular. A partir de ello, hoy se puede afirmar que sta molcula combustible bsica es tan til para la respiracin aerbica como para la respiracin anaerbica. Por otra parte, este monmero, una vez introducido en una clula, puede: a- generar energa (ATP), b- suministrar monmeros para las reacciones biosinttica, por ejemplo: formacin de ac grasos de cadena larga , o c- ser precursor de polmeros con capacidad de ser almacenados tanto en individuos vegetales, animales y procariontes. Los principales fenmenos que caracterizan a la gluclisis se encuentran resumidos en el siguiente Fig. 1.2 y son:

Fig. 1.2 Etapa I: Fosforilacin de la glucosa Etapa II: Isomerizacin de la fructosa Etapa III: Fosforilacin de la fructosa Etapa IV: Ruptura de la fructosa Etapa V: Oxidacin y formacin de enlace fosfato de alta energa Etapa VI: Generacin de ATP

Etapa VII y VIII: Reordenamiento molecular Etapa IX: Generacin de ATP

Ahora, para dilucidar el por qu de cada una de las etapas se debe tener en cuenta que:

La velocidad para regular el pasaje de una molcula de glucosa a dos molculas de cido pirvico, est controlado por la clula para cumplir con las funcione necesarias. En las vas metablicas, las enzimas que catalizan reacciones esencialmente irreversibles son posibles puntos de control. Las tres enzimas catalticas y reguladoras que presentan caracteres de control son: hexoquinasa, fosfofrutoquinasa y piruvato quinasa.

Etapas y enzimas: Primera Etapa: Fosforilacin de la glucosa Para separar electrones de la glucosa, la molcula debe ser activada. Generalmente, sta es una molcula estable y debe impulsarse para que sobrepase la barrera de energa. La activacin se lleva a cabo cuando la clula gasta un grupo de fosfato de un ATP transfirindolo a la molcula glucosa. Esto hace que dicha molcula por un lado sea enmascarada, evitando su salida de la clula (por algn sistema de transporte a travs de la membrana plasmtica) y por otro dejndola altamente inestable. La enzima que cataliza la fosforilacin de la glucosa es la hexoquinasa, la cual se comporta como Mg dependiente y se inhibe por exceso de glucosa 6-P.

Por qu? la hexoquinasa no es cuello de botella. En el hgado se sigue fosforilndo a glucosa 6-P, a pesar de estar en exceso, gracias a una glucoquinasa que se activa cuando la concentracin de glucosa es alta, derivando a la glucosa 6-P para la sntesis de glucgeno (esta enzima le confiere al cerebro y a los msculos la glucosa cuando sta no abunda demasiado)o bien oxidarse en la va de las pentosas para generar NAPH.

Segunda Etapa: Esta etapa se produce la isomerizacin de la molcula glucosa 6-P a travs de una enzima llamada fosfoglucoisomerasa, la transformacin da como producto otra molcula fructosa 6-P. En esta reaccin no se requiere cofactor.

Tercer Etapa: La activacin de la fructosa 6-P se lleva a cabo cuando la clula gasta por segunda vez un grupos de fosfato de un ATP transfirindolo a la molcula. Esto hace que dicha molcula permanezca altamente inestable. La enzima que cataliza la fosforilacin de la fructosa 6-P, es la fosfofrutoquinasa (PFK), produciendo una molcula de fructosa 1-6 bi-P. Como en la gran mayora de la quinasas esta enzima es Mg dependiente. La PFK es una enzima de carcter alostrico, muy importante en los mamferos. Se inhibe por altas concentracin de ATP o elevada carga de protones (H+) en el medio (Fig. 1.3).

Vel. De reaccin [ATP] bajo

[ATP] alto

[fructosa 6-P] Fig. 1.3 Esto ltimo evita la excesiva formacin de lactato y una cada brusca del pH

sanguneo (acidosis). Tambin es inhibido por el citrato, el cual potencia el efecto inhibitorio del ATP.

La mayor actividad enzimtica se da cuando la relacin ATP/ADP disminuye.

En esta etapa existen otros reguladores de la velocidad a travs de un controlador enzimtico: La 2-fosfofrutoquinasa (2PFK).

Cuando la fructosa 6 fosfato comienza a acumularse, por la inhibicin alostrica producida en la enzima PFK, una enzima alternativa la 2fosfofrutoquinasa (2PFK).produce altas concentraciones de un compuesto qumico llamado fructosa 2,6 bifosfato, la que, a su vez, dependiendo del contenido de glucosa en la clula, tendr dos opciones a seguir; si la concentracin de glucosa es alta desarrollar una activacin alostrica sobre PFK, disminuyendo el efecto alostrico del ATP. Esto significa que aumenta la fructosa 1,6 bifosfato, restablecindose la actividad glucoltica. Por el contrario si la concentracin de glucosa es baja, la 2PFK, esta se transforma en fructosa 1-6 bifosfatasa, que hidroliza a la fructosa 2-6 bifosfato transformndola nuevamente en fructosa 6 fosfato. A este tipo de proceso se lo denomina estimulacin hacia adelante (fig.1.4).

Hidrlisis F.6-P

F.1-6 bi Fosfatasa sin

2 PFK con

PFK ATP activacin Alosterica

Glucosa

F.2-6 bi-P

F. 1-6 bi-P

Fig. 1.4 Enzimas en Tanden o estimuladores hacia delante

Cuarta Etapa: En esta etapa se obtiene dos triosas, por la escisin de la hexosa formada en la etapa anterior. Esta reaccin es catalizada por la enzima aldolasa que produce dos compuestos ismeros: uno es la dihidroxiacetona (PDHA) y el otro es un gliceraldehido (PGAL). El 96 al 98 % de los ismeros presenta caractersticas de cetona; los restantes tienen caractersticas de aldehdo. La triosa cetnica es convertida en su ismero, el PGAL, por la enzima isomerasa. Esta reaccin es muy rpida y reversible.

Quinta Etapa: Hasta aqu no se ha obtenido energa de la oxidacin de la glucosa. Por el contrario, se han gastado molculas de ATP. Llegamos ahora a una serie de pasos que van a recolectar parte de la energa contenida en el , fosfogliceraldehdo. Como mencionamos anteriormente, las oxidaciones se pueden definir como la prdida de protones o electrones por parte de una molcula, o directamente como la salida de tomos de hidrgeno de un compuesto. En uno de los pasos claves de la gluclisis, el fosfogliceraldehdo es oxidado por la enzima deshidrogenasa y su correspondiente coenzima, el NAD+, que se reduce a NADH. La energa que se libera durante esta oxidacin, es utilizada para atrapar un grupo fosfato del citoplasma circundante, y fijarlo como un fosfato de alta energa. Se forma as el 1,3- cido difosforoglicrico. En esta etapa se puede mencionar otras vas de regulacin como ser, la

disponibilidad de la coenzima NAD+ , la cual juega un papel muy importante en la oxidacin del fosforogliceraldehdo. Esta es la primera reaccin de oxidorreduccin en la cual se logra captar energa disponible para la clula y formar un enlace fosfato de alta energa y una molcula de NADH. De esta manera, la presencia o ausencia de NAD+ determina que dicha etapa como otras a lo largo de la respiracin celular se produzcan o no. Otra regulacin depende de la presencia de fsforo inorgnico en el citoplasma. Por ejemplo, en ciertas condiciones edficas particulares, en las que el ion fosfato es muy difcil de ser captado por las plantas, ste puede llegar a actuar como factor limitante del proceso glucoltico. Recordemos la importancia que tiene este elemento en la formacin de la molcula de ATP.

Sexta Etapa: En este paso se produce la transferencia de un grupo fosfato del 1,3- cido bifosforoglicrico al ADP, con lo que se consigue la primera ganancia real de ATP del proceso de gluclisis. As se forma ATP y una triosa con un slo grupo fosfato, el cido 3-fosfoglicrico. Esta reaccin es catalizada por una enzima llamada fosfoglicerato quinasa. Sptima y Octava Etapa: La etapa se caracteriza por un reordenamiento de los tomos de la triosa, de manera que su fosfato pasa a una posicin que representa -para la molcula- un enlace de alta energa. La reaccin est catalizada por dos enzimas la mutasa y la enolasa. La mutasa es una enzima que cataliza un cambio intramolecular de un grupo qumico como el fosforilo. La enolasa cataliza la formacin de fosfoenolpiruvato. Es una reaccin de deshidratacin que eleva el potencial de transferencia del grupo fosforilo.

Novena Etapa: Una vez logrado el reordenamiento en la etapa anterior, el fosfato de alta energa es transferido, como en la sexta etapa, a una molcula de ADP que se transforma en ATP obtenindose, adems cido pirvico. Esta reaccin es catalizada por la piruvato quinasa. Esta enzima es de carcter alostrico, muy importante en los mamferos. Existe tres tipos de piruvato quinasa llamadas genricamente isoenzimas (tienen la misma organizacin estructural y el mismo mecanismo cataltico,

pero difieren en su regulacin): la forma L (en el hgado), la forma M (en los msculos y cerebro) y la forma A en los dems tejidos. La isozima L, se inhibe por altas concentracin de ATP y alanina y se activa por la fructosa-1,6 bi P y presencia ADP.

El beneficio neto, en trminos de energa, partiendo de la glucosa, es 2 ATP. Pero se debe tener en cuenta que la clula ya sea vegetal o animal, no necesariamente puede partir de dicha hexosa sino que lo pude hacer desde el polmetro de ella como ser el almidn o glucgeno. Estas arquitecturas ramificadas, pueden ser degradadas por la accin complementarias de dos enzimas que liberan los monmeros, unindolos a fosfatos inorgnicos para originar la glucosa 1- - fosfato. Este compuesto es sumamente lbil y se transforma, por accin de la enzima mutasa en glucosa-6-fosfato.

Fig. 1.5 Luego el proceso continua por la va glucoltica normal, pero con una diferencia sustancial, el producto final de energa son 3ATP (Fig. 1.5).

La secuencia de reacciones, que se da en el citoplasma, desde la glucosa hasta el cido pirvico es igual en todos los organismos y en todas las clulas. Sin embargo, el destino del piruvato obtenido en la gluclisis es variable; depende de la presencia o ausencia de oxgeno molecular, y del tipo de metabolismo del organismo de que se trate. Los caminos a seguir son: 123Fermentacin Respiracin anaerobia Respiracin aerbica

1- Fermentacin: En condiciones anaerbicas, los caminos posibles son varios: se puede producir fermentacin alcohlica, lctica, butrica o succnica, entre otras. Desarrollaremos las dos primeras vas mencionadas, por tratarse de las ms comunes en la naturaleza, aunque las otras no son menos importantes.

La fermentacin al igual que la gluclisis se da en citoplasma celular. En casi todas las plantas, hongos y algunas bacterias, el cido pirvico puede reaccionar con el hidrgeno y formar alcohol etlico. En cambio, en los animales y en otras bacterias, el piruvato formado en la gluclisis es utilizado para formar cido lctico. Es importante destacar que en ninguno de los dos procesos hay ganancia de energa. Surge entonces la siguiente pregunta: Por qu se producen estos procesos luego de la formacin del piruvcxto, si en ellos no hay ganancia de ATP? Reflexionemos... La respuesta a este interrogante es central para comprender de qu manera se interrelacionan las diferentes vas metablicas. Sabemos que la gluclisis produce cido pirvico como producto final. Durante el nico paso oxidativo de esta va, en que el fosforogliceraldehdo se convierte en eido difosforoglicrico, un NAD+ es reducido a NADH. Para que la gluclisis pueda continuar ese NAD+ debe ser regenerado continuamente por oxidacin del NADH.

a)

Alcohlica:

Se cataliza a travs de dos enzimas una descarboxilasa y luego una alcohol deshidrogenasa (la cual es Zn dependiente).

Glucosa + 2 Pi + 2 ADP + 2 H+ -- 2 etanol + 2 CO2 + 2 ATP + 2 H2O

2 cidos pirvicos + 2 NADH ----- 2 alcohol etlico + 2 CO2 + 2 NAD+

b)

Lctica: La lactato deshidrogenasa cataliza la formacin de c. lctico.

Glucosa + 2 Pi + 2 ADP

-----

2 lactato + 2 ATP + 2 H2O

2 cidos pirvicos + 2 NADH

-- 2 cido lctico + 2 NAD+

En los organismos animales superiores, solamente las clulas musculares pueden sobrevivir un corto tiempo con baja concentracin de oxgeno, ya que sustituyen la respiracin aerbica, por la va fermentativa lctica. Como consecuencia de este proceso, se acumula en ellas cido lctico, produciendo fatiga muscular que se manifiesta en forma de calambres. El cido lctico acumulado acidifica la sangre, estimulando la respiracin e, indirectamente, provoca un incremento en la frecuencia respiratoria. De este se favorece el aporte de oxgeno a las clulas y se puede retomar la va aerbica. Al cabo de un tiempo relativarnente corto, el cido lctico acumulado comienza a oxidarse para convertirse nuevamente en glucosa, por otra va llamada ciclo de Cori.

Ciclo de Cori: Durante la contraccin muscular en condiciones anaerobias, el lactato es un callejn sin salida en el metabolismo.

Glucosa

Glucosa

Gluconeognesis

Glucolisis

6-P Piruvato Sangre

2-P Piruvato

Lactato Baja proporcin NADH/NAD Hgado

Lactato Alta proporcin NADH/NAD Msculo

c)

Respiracin Aerbica (propio de la mitocondria):

Descarboxilacin oxidativa del piruvato catalizada por el complejo enzimatico piruvato deshidrogenasa. Se produce en la matriz mitocondrial.

Piruvato + CoA + NAD ---- acetil -CoA + CO2 + NADH

Enzimas del complejo:

Piruvato deshidrogenas (a)

Dihidripoil-transacetilasa (b) Dihidrolipoil- deshidrogenasa

El complejo enzimtico trabaja a un pH 7 a 8.

Las enzimas del complejo se asocian espontneamente (autoensamblaje). La gran proximidad de las enzimas que conforman el complejo enzimtico, aumenta la velocidad de reaccin total y reducen las reacciones colaterales.

Regulacin del complejo Piruvato deshidrogenasa: En los animales la reaccin qumica desde piruvato hasta Acetil-CoA es irreversible. Un aumento de acetil-CoA o de NADH inhiben el complejo enzimtico (el Acetil-CoA a la enzima b y el NADH a la enzima c). Y se activa por el NAD y por el CoA. Con un aumento de GTP, el complejo reduce su actividad. En cambio si se activa, en presencia de AMP. La ltima regulacin se logra por una fosforilacin reversible:

C.E. se inactiva cuando:

El ATP fosforila a travs de una quinasa un residuo de serina de la enzima a. Esta fosforilacin se favorece cuando el NADH, el aceti-CoA o el ATP se encuentran en altas proporciones. En cambio se inhibe por alta porcentaje de piruvato.

C.E. se activa nuevamente: cuando una fosfatasa especfica hidroliza el grupo fosforilo. Esto se favorece aun ms con altas [Ca] o alto contenido de insulina en sangre.

Ciclo de Krebs (fig.1):

Se produce en la matriz mitocondrial.

Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + H2O 2 CO2 + 3 NADH +FADH2 +GTP + 2H+ + CoA

Primer etapa: Se produce una condensacin y una hidrlisis, catalizada por una sintasa. La reaccin es unidireccional.

Segunda etapa: La reaccin que se produce es una deshidratacin y una hidratacin, que se cataliza por una isomerasa (aconitasa), y prepara ala molcula para la siguiente etapa.

Tercera etapa: La reaccin es de oxido-reduccin, siendo catalizada por una deshidrogenasa, en presencia de una coenzima NAD. Se produce liberacin de CO2.