Didtico Material Didtico de apoio disciplina BVE 270 Prof. Fbio M. da Matta Prof.

. Marcelo Ehlers Loureiro Participao na editorao e processamento de imagens: Marcelo Francisco Pompelli, Leonardo Carnevalli Dias

1) FIXAO SIMBITICA DO NITROGNIO A fixao de nitrognio corresponde anualmente no globo terrestre a uma fixao total de 190 x 106 toneladas de N. Ela pode ocorrer por vrios processos, como j vimos no Ciclo do Nitrognio: Fixao luminosa: esta reponsvel por cerca de 8% do nitrognio fixado, e converte o vapor de gua e o oxignio em radicais hidroxil (OH-)tomos livres de hidrognio e oxignio, os quais reagem com o nitrognio molecular (N2) para formar cido ntrico (HNO3). Este cido, presente na atmosfera ento incorporado ao solo atravs da chuva. Reaes fotoqumicas: essas reaes ocorrem entre o xido ntrico (NO) e o oznio (O3), produzindo tambm o xido ntrico que incorporado ao solo da mesma maneira. Aproximadamente 2% do nitrognio fixado ocorre dessa forma . Fixao biolgica de nitrognio: Organismos como bactrias e algas verde-azuis (cianobactrias) fixam N2 em NH4, correspondendo este processo a cerca de 90% da fixao de nitrognio.

A fixao do nitrognio atmosfrico pode ocorrer de vrias formas (reveja o tem ciclo do nitrognio abordado anteriormente). Contudo a fixao biolgica contribui para a maioria da fixao do N2 atmosfrico. A fixao biolgica restringe-se a alguns tipos de bactrias e algas. A maioria dos organismos fixadores de nitrognio so organismos de vida livre no solo. Um pequeno nmero deles forma associaes simbiticas com as plantas, fornecendo as plantas carboidratos para esses microorganismos, os quais so "trocados" por compostos nitrogenados fornecidos por este.

Os tipos mais comuns de simbiose ocorrem entre as plantas da famlia Leguminosae e as bactrias do gnero Azorhizobium, Bradyrhizobium, Photorhizobium, Rhizobium e Sinorhizobium. Essas bactrias so chamadas coletivamente de rizbios. Outro tipo de simbiose envolve principalmente espcies lenhosas de plantas com as bactrias do gnero Frankia, Gunnera, pteridfitas aquticas como Azolla em associao cianobactrias (Nostoc e Anabaena).

Figura 17 - Fases da formao da simbiose entre a planta e o rizbio. 1 A planta libera ilicitores da expresso do gene Nod; 2 A bactria libera o fator Nod; 3 As razes das plantas demonstram fluxo de ons, expressam a protena nodulina, e a partir do nicio da interao inicia a morfognese do ndulo. 1.2) A fixao de nitrognio requer condies anaerbicas Devido ao oxigenio poder inativar irreversivelmente a nitrogenase, enzima chave da fixao do nitrognio, a fixao nesses organismos deve ocorrer em um meio com reduzidas concentraes desse gs. Nas cianobactrias, condies anaerbicas so criadas em clulas especializadas denominadas de heterocistos.. Essas clulas tem parede celular espssa, e se diferenciam somente quando essas cianobbactrias esto sendo crescidas em meio com baixas concentraes de NH4. Cianobactrias que no possuem a capacidade de formar heterocistos fixam nitrognio somente em condies anaerbicas, como em solos alagados. As bactrias de vida livre que so capazes de fixar o nitrognio pode ser classificadas em aerbicas, facultativas ou anaerbicas.

- Aerbicas: mantm baixos nveis de oxignio atravs do alto nvel respiratrio (Azotobacter), ou separam temporalmente a a fotossntese (liberao de O2; dia) da fixao (noite; Gloeothece sp.). - Facultativos: crescem tanto sob condies aerbicas como anaerbicas, fixando nitrognio geralmente sob condies anaerbicas. -anerbicos: por crescerem em ambiente anaerbico, sua nitrogenase no necesita de proteo contra o oxignio. A fixao simbitica do nitrognio ocorre dentro de estruturas especiais da planta denominada de ndulos. Contudo nem toda fixao simbitica envolve a diferenciao de ndulos, como por exemplo nas monocotiledneas, onde permanecem as bactrias fixadoras envolta das razes na zona de elongao ou pelfera da raiz. Por exemplo, em cana-de-aucar, a bactria Acetobacter diazotrophicus vive no caule da cana de aucar e pode garantir a independncia de adubao nitrogenada por essa planta 1.3) A fixao simbitica do nitrognio em plantas leguminosas As bactrias produtoras de ndulos em leguminosas pertencem famlia Rhizobiaceae, dela fazendo parte os gneros Rhizobium (espcies de crescimento rpido) a Bradyrhizobium (espcies de crescimento lento). A simbiose entre cada bactria especfica a somente uma esp[ecie de planta hospedeira ou a um grupo limitado de espcies. A formao de ndulos principalmente encontrada em plantas leguminosas, e seu processo de formao pode ser resumidamente dividido nas fases abaixo descritas (ver tambm fig. 18), vrias das quais podem coexistir para um mesmo determinado momento da diferenciao de um ndulo: 1) Liberao de flavonides pelas razes da planta 2) Quimotaxia do rizbio em direo superfcie das razes 3) Proliferao do rizbio na rizosfera e induo da diferenciao do primrdio do ndulo 4) Aderncia do rizbio s razes 5) Diferenciao do meristema secundrio do ndulo (conexo vascular) 6) Encurvamento do plo radicular e formao da via de infeco 7) Mltipla infeco das clulas do ndulo e crescimento do ndulo 8) Crescimento do ndulo, diferenciao dos bacteriides, e comeo da fixao simbitica de N

Figura 18 - Esquema mostrando as fases da infeco da raiz de uma planta pelo rizbio. O processo de infeco pelo microorganismo e o processo de formao do ndulo podem ocorrer simultaneamente na formao do ndulo. Durante a infeco, os rizbios ligados aos pelos das razes liberam os fatores Nod que induzem o encurvamento do pelo da raiz. O encurvamento aprisiona o rizbio em um pequeno compartimento formado pelo pelo da raiz (fig. 19). A parede da clula do pelo nessa regio degradada, o que ocorre tambm em resposta ao fator de nodulao, permitindo o acesso da bactria ao lado externo da membrana plasmtica. A prxima fase a formao da via de infeco, a qual um tbulo formado pela invaginao da membrana da clula do pelo, formada pela contnua coalescncia de vesculas derivadas do Aparelho de Golgi. Ao mesmo tempo em que a via de infeco formada, comea a haver uma diviso pronunciada de algumas clulas do crtex perto do pelo

infectado, a qual esto originando um primrdio do ndulo (obtenha mais informaes no endereo www.plantphys.net, no tpico 12.1).

Figura 19 - Formao do simbiossoma pelo englobamento do rizbio pela membrana plasmtica da clula hospedeira. A via de infeco contendo um grande nmero de clulas de rizbio cresce ento em direo ao primrdio do ndulo. Quando essa via alcana essas clulas, ela funde-se com a membrana da clula do primrdio, e as clulas dos rizbios so englobados por uma invaginao da clula hospedeira. Ao mesmo tempo sobre a via de infeco contnuas ramificaes, repetindo-se esse processo vrias vezes de forma que vrias clulas obtenham o rizbio. Dentro da vescula formada pela clula hospedeira do ndulo, continua o rizbio a multiplicar-se at que seja um sinal produzido pela planta, quando ento ocorre a interrupo da multiplicao celular e comea a diferenciao da bactria em bacteriide. O bacteriide uma forma modificada de bactria, a qual sofre profundas mudanas no padro de expresso gnica e no seu metabolismo, perdendo tambm a sua capacidade de multiplicar-se, podendo ou no alterar a sua forma (fig. 20). Vescula formada pela invaginao dos bacteriides so considerados como organelas endosimbiticas, cuja membrana denominada de membrana peribacteriide. Essa organela denominada de simbiossoma.

Figura 20 = Esquema das principais diferenas entre a bactria e o bacteriide de diferentes espcies de rizbio. O ndulo como um orgo independente desenvolve um sistema vascular prprio, o qual responsvel pela troca entre os nutrientes formados pela bactria pelos nutrientes formados pela planta. O ndulo tambm possui um camada de clulas com a funo de exlcuir o O2 da interior do ndulo (fig 21). Um importante aspecto da estrutura de um ndulo fixador de nitrognio a regulao da sua permeabilidade ao oxignio. Essa regulao ocorre de tal forma que a concentrao deste gs suficiente para manter a respirao, mas insuficiente para evitar a inativao e degradao da nitrogenase, a qual ocorre rapidamente do oxignio. A permeabilidade controlada pela camada de clulas mais externa do ndulo. Essa permeabilidade aumenta durante o dia e diminui sob dfice hdrico ou presena de nitrato. Pouco conhecido sobre o mecanismo controlando e regulando essas alteraes de permeabilidade. Alm dessa reduzida permeabilidade, h uma importante contribuio da elevada respirao observada nos bacteriides, a qual reduz o oxignio presente favorecendo a proteo da nitrogenase.

Figura 21 - Estrutura geral da estrutura de um ndulo apresentando a localizao dos bacteriides e da barreira de excluso do oxignio

Os ndulos possuem uma protena heme denominada de leghemoglobina, a qual presente em altas concentraes no citoplasma das clulas centrais dos ndulos (podem constituir at 40% da protena total de um ndulo), e conferem a tpica colorao rosada a esse orgo. A leghemoglobina possui uma afinidade notvel pelo oxignio (Km de 0.01 uM), a qual uma afinidade 10 vezes superior ao oxignio do que aquela apresentada pelo hemoglobina responsvel pelo transporte do oxignio nos animais. Inicialmente a funo atribuda era a de impedir o efeito negativo do oxignio na nitrogenase, contudo hoje seu papel definido principalmente como a responsvel pelo transporte do oxignio ao bacteriide para suportar sua respirao. Cada clula de um ndulo pode conter milhares de bacterides, podendo o ndulo conter mais de 1 bilho de bacteriides. H uma elevada variao quanto morfologia, nmero a posio.dos ndulos. A forma do ndulo depende da planta, podendo ser esfrica, cilndrica, multilobada ou cora-lide. O tamanho tambm relacionado espcie da planta e efetividade da simbiose. A posio na raiz principal a/ou junto ao colo da planta, indica uma formao precoce a efetiva, ao contrrio de formao nas razes secundrias que indica uma infeco tardia a/ou estirpes pouco competitivas ou pouco efetivas. O crescimento do ndulo ocorre at atingir o tamanho mximo, em funo da espcie. Em solos com poucas clulas do rizbio, os poucos ndulos formados tendem a, crescer ao mximo, pela exigncia da planta em nitrognio. Ao atingir o florescimento ou o final do ciclo da planta, os ndulos senescem e o pigmento da hemoglobina (vermelha) muda de cor para verde ou castanho. Esta mudana corresponde ao final do perodo de fixao de nitrognio, o qual precedido pela fase de reduo da fotossntese da planta, na qual ocorre uma sinalizao induzindo a senescncia do ndulo por um mecanismo ainda no compreendido (fig. 22). Em condies de estresse ambiental, por exemplo, os ndulos podem senescer precocemente. Em algumas espcies arbreas ocorrem ndulos indeterminados ou perenes, cujo crescimento contnuo a anual. Ao contrrio das outras hiperplasias provocadas nos vegetais por insetos, nematides ou Agrobacterium tumefaciens, os ndulos tm estrutura perfeitamente organizada: a) camada de clulas corticais mais ou menos espessa, que envolve todo o ndulo; b) rea meristemtica, de crescimento apical, ou circundando quase todo o ndulo; e c) rea fixadora, central ou apical, constituda de clulas de tamanho vrias vezes maior que o normal, contendo os bacterides.

Figura 22 - Perfil da fixao de nitrognio durante o desenvolvimento de uma planta leguminosa de ciclo anual e sua relao com o seu perfil fotossinttico. 1.4) O estabelecimento da simbiose requer uma troca de sinais entre a planta e a bactria

A colonizao da rizosfera das plantas por microorganismos fixadores de nitrognio bastante comum. A rizosfera representa um stio ecolgico favorvel fixao biolgica de nitrognio, no s por apresentar disponibilidade de substratos de carbono devido aos exsudatos radiculares, mas tambm por manter baixas taxas de oxignio devido respirao das razes. A simbiose entre legume e o rizbio no obrigatria. Tanto a planta como o microorganismo simbionte pode viver de forma independente um do outro. Contudo, sob limitao de nitrognio no solo, os simbiontes trocam sinais e estabelecem a simbiose. A sinalizao, a subsequente infeco da planta pelo microorganismo, e o desenvolvimento do ndulo fixador de nitrognio envolve a ao de genes especficos em ambos os simbiontes. Os genes das plantas especificamente expressos nos ndulos so denominados de nodulinas (genes Nod), enquanto os genes das bactrias so denominados de genes de nodulao (genes nod). Muitas das nodulinas esto envolvidas na metabolizao de nitrognio e carbono, no tranporte de compostos atravs da membrana simbionte e no estabelecimento de um ambiente pobre em oxignio, o qual necessrio para a atividade da nitrogenase. Outras nodulinas podem codificar para protenas da parede celular, importantes para o processo de infeco, podendo ainda participar em outros aspectos da infeco, transduo de sinais e diferenciao dos ndulos (fig. 23).

Os genes nod podem ser divididos como genes nod comuns a todos os rizbios (nodA, nodB, e nodC) e genes nod que determinam a especificidade de hospedeiro (nodP, nodQ, nodH) e genes nod que determinam a amplitude de hospedeiros (nodF, nodE e nodL). De todos esses genes, somente o

Figura 23 - Esquema geral mostrando o local de sntese de nodulinas e algumas de suas funes. A primeira fase no estabelecimento da relao simbitica a migrao da bactria em direo ao hospedeiro, e esta uma resposta quimiosttica que ocorre em resposta a secreo pela planta de compostos falvonides ou derivados de aminocidos (tab. 1). Estes compostos so percebidos pela bactria, resultando na ativao do fator transcripcional codificado pelo gene nodD, resultando ento na transcrio de outros genes nod (fig. 24) . Os genes nod iro induzir a produo de fatores de nodulao. Esses fatores correspondem a uma famlia de substncias (fig. 25) que contm quitina (polmero de nglucosamina) e cidos graxos. Os genes nodA, nodB e nodC, codificam para os fatores nodA, nodB e nodC, os quais codificam para enzimas que iro codificar para esses compostos. Os gens nod que conferem a especificiadade de hospedeiro, variam entre diferentes espcies ou raas de rizbios, e codificam enzimas que modificam o cido graxo ou adicionam radicais laterais especficos a estrutura bsica de um fator de nodulao.

Substncias produzidas pelos hospedeiros que induzem a expresso dos genes Nod em bactrias fixadoras de N Flavonides indutores Categoria Estrutura genrica Nome e Estrutura especfica hospedeiro Luteonina, Flanonas Alfafa

Chalcona

4,4-dihidroximetoxichalcona, Alfafa Daldezena, soja, feijo-decorda

Isoflavona

Flavona

Naringerina, ervilha

Tabela 1 - Estrutura geral e especfica de alguns compostos secretados pelas razes que induzem a quimiotaxia e a expresso dos genes nod em rizbio

Figura 24 = Esquema mostrando a induo dos genes nod atravs do fator transcricional NodD em resposta a diversos sinais.

Figura 25 = Estrutura genrica de fatores de nodulao produzidas pela bactria que sero percebidos pela planta e induziro a nodulao. A presena de vrios radicais laterais a cadeia central de acetil-glucosamina determina a especificidade de hospedeiro. Cada espcie de planta que estabelece essa simbiose responde especificamente a um fator de nodulao especfico, e reconhecido por um receptor especfico. Os receptores dos fatores de nodulao pertencem a uma grande famlia de protenas denominada de lectinas

(protenas que ligam a acares), e esto presentes nas membranas plasmticas das clulas das razes dessas plantas. 1.5) O complexo enzimtico nitrogenase fixa o N2 Este complexo responsvel pela fixao do N2 atmosfrico em NH3, Ele esta presente em todas as bactrias fixadoras de nitrognio, e cataliza a reao apresentada na fig. 26.

Figura 26 - Esquema da estrutura da nitrogenase e de sua reao de fixao do nitrognio atmosfrico. A reao necessita de 8 e, dos quais somente 6 so incorporados amnia, sendo os dois restantes envolvidos na gerao de hidrognio molecular. O complexo nitrogenase pode ser dividida em duas partes: Protena Fe: composta de dusa subunidades proteicas, contendo cada uma um
2-

grupo ferro-enxofre (4Fe-4S ), o qual participa na reao de xido-reduo de formao de amnia. Essa protena irreversivelmente inativada pelo O2, sendo aps a protena rapidamente degradada (meia vida de protena redu-se a 30-45 segundos). Protena MoFe: composta de 4 subunidades proteicas, cada uma delas contendo dois grupos Mo-Fe-S. Essa protena tambm inativada pelo oxignio, o qual tambm reduz sua meia-vida para 10 minutos. O doador de eltrons para a reduo do N2 a ferredoxina, a qual doa seus eltrons para a protena Fe, a qual ainda necessita hidrolizar o ATP para conseguir reduzir a protena

MoFe. Esta ltima reduz ento o N2, entre outros aceptores naturais ou artificais, como o acetileno (utilizado como substrato para medir a atividade enzimtica dessa enzima), N2O e azida, entre outros. A fonte de eltrons para produzir ferredoxina reduzida em ndulos de razes pode advir atravs da ao da enzima piruvato-ferredoxina oxidoredutase, a qual pode transferir eltrons tanto do piruvato como do -cetoglutarato ferredoxina. A mesma reao da nitrogenase pode ser produzida por um processo qumico, o qual utilizado para a sntese do fertilizante uria, e que necessita de grande quantidade de
o

energia (temperaturas de 400 C e alta presso; processo de Haber-Bosch), a qual necessria para quebrar a tripla ligao qumica na molcula de N2. Para a planta simbionte, o nitrognio recebido atravs da fixao tambm significa um alto gasto de energia. Estima-se que para cada grama de nitrognio fixado, necessrio o consumo de 12-17bgramas de carbono.
+

Sob condies naturais, quantidades substanciais de ons H so consumidas na reao da nitrogenase, gerando tambm quantidade substanciais do gs H2, e esta reao pode competir por eltrons com a reao de reduo do N2 pela nitrogenase. Em rizbio, 30 a 60% da energia suprida a nitrogenase pode ser perdida como H2, diminuido a eficincia energtica da fixao de nitrognio. Alguns rizbios, contudo, possuem a enzima hidrogenase, a qual degrada o H2 formado, doando os eltros produtos dessa reao nitrogenase, melhorando a eficincia da fixao de nitrognio. Os microrganismos fixadores de nitrognio desenvolveram um sistema complexo de controle para o processo de fixao biolgica de nitrognio. Quando h disponibilidade de
+ -

nitrognio (por exemplo, NH4 , N03 , aminocidos, etc), a biossntese da nitrogenase reprimida. A nitrogenase sintetizada apenas quando no h outra fonte de nitrognio disponvel. 1.6) Os ndulos exportam amidas e uredeos

Os legumes fixadores de nitrognio podem ser divididos em exportadores de amida (asparagina e glutamina) ou exportadores de uredeos. Normalmente legumes exportadores de amida so leguminosas de clima temperado, como a ervilha, o trevo, alfafa e lentilha, enquanto que os exportadores de uredeos correspondem a legumes de origem tropical (soja, feijo, amendoim, feijo de corda).

Figura 27 - Estrutura qumica dos principais uredeos sintetizados em ndulos de plantas. A amnia produzida pelos bacteriides precisa ser rapidamente assimilada de forma a no causar toxidade. Inicialmente ela transportada pela membrana peribacteriide para a clula hospedeira e rapidamente utilizada pela GS (glutamina sintase), a qual possui uma alta afinidade pela amnia, reagindo rapidamente, evitando ento o acmulo e a conseqente potencial toxidade desta molcula. A glutamina pode ento ser transportada aos leucoplastos da clula hospedeira e transportada em xantina, e posteriormente em cido rico, o qual ento transportado para as clulas no infectadas e transformado em uredeos, os quais so ento transportados via xilema (fig 28). A sntese dos diferentes uredeos podem ocorer em diferentes compartimentos celulares. Enquanto a alantona sintetizada no peroxissoma, o cido alantico sintetizado no retculo endoplasmtico. Alternativamente, a glutamina pode ser transformada ou no em asparagina, sendo ento ambos transportados para a parte area da planta via o xilema (fig. 28).

Figura 28 - Esquema geral comparativo da assimilao de nitrognio entre plantas que nodulam ou no. 1.7) A planta hospedeira fornece carbono para os bacteriides na forma de cidos dicarboxlicos

O fotoassimilato transportado at o ndulo na forma de sacarose, via floema. Nas clulas do ndulo a sacarose transformada em cidos orgnicos. A sacarose transformada em PEP via a rota glicoltica, e a enzima PEPC o transforma em oxalacetato o qual ento transformado em malato s custas de NADH (fig. 32). A membrana peribacteriide do simbiossoma somente transporta cidos dicarboxlicos, como o malato. O malato serve ento como substrato respiratrio, necessrio para produzir o ATP necessrio a atividade da nitrogenase. O alto nvel respiratrio, necessrio para suprir o alto consumo de ATP na fixao de nitrognio tambm ajuda a proteger a nitrogenase.O custo total do funcionamento dos ndulos chega a consumir entre 13 a 28% da energia presente nos produtos fotossintetizados pela planta. Apesar do maior custo energtico envolvido no processo de

fixao biolgica de nitrognio nas leguminosas em relao assimilao do nitrognio mineral (a reduo de nitrato consome tambm muita energia. A assimilao do nitrato quando ocorre nas folhas utiliza no prprio cloroplasto o poder redutor (NADPH) produzido durante a fotossntese. Isso significa tambm menor custo energtico, visto que a sntese de sacarose, seu transporte, e sua transformao em malato necesitarem de gasto extra de energia. A fixao simbitica de nitrognio ento inibida na presena de nveis adequados de nitrognio do solo em virtude de seu maior consumo energtico.

Figura 29 = Esquema geral da sntese de uredeos em ndulos apresentando a compartimentalizao das diferentes reaes enzimticas entre as diferentes clulas ou compartimentos celulares que o compe.

Figura 30 = Esquema do fornecimento de energia pela clula do ndulo ao bacteriide. 2) OUTRAS FORMAS DE FIXAO DE NITROGNIO Em plantas no leguminosas pode haver a fixao biolgica do nitrognio pelo actinomiceto Frankia, este ltimo formando ndulos denominados de actinorrizas. O termo actinomiceto identifica microrganismos classificados como bactrias, apesar de apresentarem similaridades com fungos, pois produzem filamentos finos a ramificados de miclio no solo .

Cerca de 200 espcies de plantas no leguminosas, distribudas em 20 gneros e 8 ordens, podem ser noduladas por Frankia. O ndulo de plantas actinorrzicas uma estrutura perene formada por repetidas ramificaes das razes laterais a que termina em um ndulo lobular. 0 sistema de estabelecimento da simbiose segue o mesmo processo inicial de infeco observado para o rizbio em leguminosas arbreas. A infeco primria ocorre quando da entrada do microrganismo dentro do pelo radicular com o desenvolvimento intercelular de uma fina hifa do actinomiceto; o processo continua com as clulas do crtex da raiz sofrendo divises celulares, antes de serem infectadas pela hifa. Com a maioria das clulas do crtex infectadas, forma-se um ramalhete de hifas com vesculas nas extremidades.A presena de micorrizas em razes de rvores auxilia no processo de fixao biolgica do nitrognio. Ndulos foliares tm sido descritos em espcies de plantas arbustivas a lenhosas. Representantes destas plantas pertencem aos gneros Ardisia (famlia Myrsinaceae), Pauetta e Psychotria (famlia Rubiaceae). A bactria mantida sobre a planta, por secrees da brotao da parte area da planta, sendo essas secrees constitudas por uma mucilagem composta de carboidratos e protenas. Posteriormente, a bactria invade a cmara subestomtica, presentes na superfcie das folhas. Com o desenvolvimento e a proliferao da camada da epiderme, ao redor do poro, as bactrias so empurradas para o interior da lmina foliar a encapsuladas, formando um pequeno ndulo interno. 2.1) Benefcios econmicos da fixao de nitrognio Nas plantas leguminosas cultivadas, a fixao simbitica de nitrognio consegue oferecer a planta o nitrognio necessrio para a sua maior produtividade, dispensando o uso de fertilizantes qumicos fornecedores de nitrognio. O nvel de fixao do N2 na simbiose rizbio-legume varia com a bactria, a planta a as condies ambientais. Leguminosas forrageiras possuem um alto nvel de fixao de (tabela 5). Nas plantas forrageiras a fixao total depende tambm da durao do ciclo da planta e do nmero de cortes ou intensidade do pastejo. Dentre os fatores do solo que condicionam o nvel de fixao de nitrognio, podemos citar as caractersticas das populaes de rizbio especfico existentes no solo e o teor de nitrognio mineral do mesmo. Maior nvel de fixao ocorre em solos pobres em N, e os efeitos da inoculao so maiores quando o rizbio nativo inespecfico ou est em baixo nmero.

O rizbio pode viver saprofiticamente sem fixar N2 no solo, sendo uma bactria tpica de rizosfera. Nestas condies, utiliza as fontes de energia, N e nutrientes da soluo do solo. As estirpes variam quanto rapidez relativa em dominar os stios de nodulao, quando em presena de outras estirpes. Seja em ambiente estril, seja no solo, a proporo de ndulos formados por uma das estirpes em uma mistura depende tambm da proporo relativa de cada uma no inculo. Essa propriedade denominada competitividade. Entretanto, o termo competitividade inadequado, pois o que se avalia a proporo de estirpes formadoras de ndulos e no a real populao daquela estirpe junto s razes.Na rizosfera, o rizbio interage com os demais microrganismos, alm de competir com outras estirpes pelos stios de infeco. A sobrevivncia do rizbio no solo afetada por fatores edafoclimticos a biolgicos. Algumas rvores fora da famlia das Leguminosas possuem associao com o rizbio. Uma delas a Parasponia, um gnero da famlia Ulmaceae, ordem Urticales, a qual anteriormente era denominada de Trema. Esta rvore apresenta hbitos de planta pioneira, claramente demonstrados pelo crescimento e colonizao de solos originados de atividade vulcnica a solos virgens de montanhas A bactria associada no parece ser especfica ao gnero Parasponia, pois forma ndulos com espcies leguminosas, tais como Vigna unguiculata a Macroptilium atropurpureum, e com outros gneros de plantas no leguminosas como as plantas da famlia Zygophyllaceae. Esta famlia ocorre principalmente em regies tropicais a subtropicais, consistindo de vegetao xerfita e haloftica lenhosa perene. As espcies descritas pertencem aos gneros Zygophilhum, Tribulus a Fagonia. Zygophilhum A estrutura interna dos ndulos de Parasponia possui certas particularidades, como uma zona apical meristemtica que produz contnuo elongamento dos ndulos. Os ndulos tornamse coralides, de forma similar aos de Alnus-FranhiaA importncia econmica de Parasponia est em seu use para: sombreamento de culturas agrcolas como caf, cacau a ch; produo de madeira para moures de cerca a fibras para celulose e papel. Para Zygophilhum, Trbulus a Fagonia seu principal potencial de uso a revegetao de reas desrticas, fixao de dunes a plantio consorciado com culturas agrcolas em regies semi-rida.