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TECHNIQUES GNRALE : CONDITION DE TRAVAIL EN ASEPSIE

D I F F I C U L T : XXX
Matriel :

paillasse quipe d'un bec Bunsen, eau de Javel, papier d'aluminium, autoclave ou cocotte-minute avec panier ou four a micro-ondes, alcools a 90 et 10; plateau contenant les divers instruments a utiliser (tubes de culture, ciseaux, pinces, etc.) selon la manipulation projete. PROTOCOLE GNRAL DE TRAVAIL EN ASEPSIE

Nettoyer la paillasse l'alcool a 70 ou a l'eau de Javel frachement prpare a partir d'un berlingot du commerce (250 mL d'eau de Javel dans 750 mL d'eau distille). Allumer le bec Bunsen a porte de main sans que sa flamme dpasse 8 a 10 cm. Placer dans la zone strile, dlimite par un cercle d'une vingtaine de centi-metres de rayon autour du bec Bunsen, le matriel a utiliser (instruments, flacons, etc.). Le matriel mtallique pourra tre strilis par flambage l'alcool 90. Les tubes et les flacons utiliss pour raliser des cultures seront passs l'autoclave 120 C pendant une demiheure ou striliss dans le panier d'une cocotte-minute contenant un demi-litre d'eau. Dans ce cas, laisser tourner la soupape pendant une demi-heure partir de sa mise en rotation. On peut aussi les striliser au four a micro-ondes, munis d'un bouchon en coton card pendant quelques minutes a 650 W (ne pas striliser d'objets mtalliques ou de papier d'aluminium au four a micro-ondes). Au cours de la strilisation l'autoclave ou la cocotte-minute, les flacons ou les tubes ne doivent jamais tre ferms hermtiquement. Envelopper les bouchons dans du papier d'aluminium et recouvrir les orifices des flacons obturs par du coton card avec du papier d'aluminium galement. Au micro-ondes, faire un simple bouchon avec du coton card. Pour l'incubation des cultures de micro-organismes, les botes de Ptri seront poses l'envers, c'est--dire avec le couvercle vers le bas pour viter la chute de leau de condensation sur les cultures. En rgle gnrale, la main gauche apporte le matriel la main droite qui tient l'instrument de prlvement ou d'ensemencement ou qui manipule scalpel ou ciseaux. Les tubes et les flacons, tenus obliquement seront dbouchs, ouverture vers la flamme, auront leur goulot pass la flamme avant et aprs chaque utilisation et le bouchon sera pass la flamme avant d'tre repos sur le flacon. Les instruments seront frquemment passs a la flamme aprs avoir t tremps dans un petit bcher contenant de l'alcool a 90 et seront maintenus dans le plateau situ dans la zone strile quand ils ne sont pas utiliss. Il est bon de prvoir un couvercle de bote de Ptri pour pouvoir teindre le flacon dalcool au cas ou il senflammerait. Avant toute manipulation, se laver soigneusement les mains en utilisant une brosse a ongles puis les passer a l'alcool a 70 et les laisser scher. Au cours des manipulations, viter de bouger et de parler pour ne pas projeter de microorganismes et ne pas porter les mains a la bouche. On peut galement porter un masque couvrant

le nez et la bouche, mais ce n'est pas strictement indispensable. Se laver soigneusement les mains aprs les manipulations.

La russite de toute manipulation de microbiologie ou de culture in vitro est conditionne par la parfaite asepsie du matriel et des milieux utiliss. Toute drogation aux rgles prcdentes a les plus grandes chances de se traduire par des contaminations des cultures rendues ainsi inutilisables. Il est donc absolument impratif de suivre ces rgles. Apres les manipulations, tout le matriel contamin devra tre dsinfect a l'eau de Javel avant d'tre lav ou jet s'il s'agit de matriel a usage unique. Ce dernier, bien qu'un peu plus cher, est trs pratique car vendu en conditionnement strile qui vite son passage a l'autoclave.

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