Mtodos de Estudio para el Diagnstico Bacteriolgico en Medicina Veterinaria

Procesamiento de muestras clnicas

Prof. Aurico Sousa F. Ctedra de Microbiologa e Inmunologa Departamento de Patologa Veterinaria Facultad de Ciencias Veterinarias - U.C.V.

"La muestra es el comienzo... Toda la informacin diagnstica del laboratorio depende de conocer que muestras clnicas se escogen y con que cuidado son tomadas y transportadas"

Cynthia A. Needham

PRINCIPIOS PARA EL DIAGNSTICO DE LAS INFECCIONES BACTERIANAS EN MEDICINA VETERINARIA

Coexistencia de Patgenos bacterianos y microorganismos inofensivos

Interior del husped o en su superficie.

Identificar patgenos bacterianos

Causa de las enfermedades infecciosas.

DESCUBRIR LA ETIOLOGA DE LA INFECCIN

Mdico Veterinario clnico
Obtener la muestra clnica adecuada.

Objetivo del laboratorio de bacteriologa clnica

Proporcionar al mdico veterinario la informacin sobre la

presencia o ausencia
de microorganismos procariotas que pueden estar implicados en el proceso patolgico infeccioso.

Para que utiliza el mdico veterinario esta informacin?

Establecer un diagnstico Indicar la prognosis y posibles complicaciones de la enfermedad Identificar el origen de la infeccin y riesgo de transmisin a humanos u otros animales Identificar producto especfico necesario para inmunizacin que ayude a prevenir la infeccin en otros animales Formular programas especficos de tratamientos

PROCEDIMIENTOS EMPLEADOS
1. Tinciones de muestras o biopsias de tejidos 2. Aislamiento e identificacin en cultivos 3. Deteccin de antgeno 4. Presencia de toxina microbiana 5. Deteccin de genes especficos del patgeno en muestras del paciente 6. Respuesta significativas de anticuerpo o de inmunidad mediada por clulas

Paciente
(Se sospecha enfermedad infecciosa)

Ruta Inmunolgica
Muestra de Sangre

Ruta Bacteriolgica
Sangre Heces Orina Biopsia de tejidos, etc. Prueba de anticuerpos (serologa, RIA, ELISA, etc.)
Molecular (bsqueda del genoma del patgeno)

Bacteriologa convencional
Cultivo en medio selectivo

Microbiologa no convencional

Aislamiento en cultivo puro

Inmunolgica (bsqueda del patgeno, de clulas microbianas, o de partculas virales)

Identificacin mediante: Pruebas que dependen del crecimiento Identificacin inmunolgica

Sensibilidad a los antibiticos (decisin sobre quimioterapia)

Esquema de Aislamiento e Identificacin Bacteriana

1.- Recoleccin de la muestra
Muestra de:______________________ Tcnica de recoleccin: Hisopado Aspirado Biopsia Necropsia Fecha:__________________________ Datos Clnicos____________________ Transporte al laboratorio:___________

3.- Aislamiento Primario Agar Sangre Bovina

Crecimiento: Caract. Colonias: Hemolisis: Pigmentos: Olor: Temperatura: 25C Atmsfera: Aerobiosis 37C Microaeroflia 42C Anaerobiosis

2.-

Examen macroscpico y microscpico de la muestra

Caractersticas Macroscpicas: ____________________________________ Caractersticas microscpicas

Agar Manitol Sal 37C 24-48 h

Crecimiento: Caract. colonias: Utilizacin de manitol Pigmentos: Otros

Coloracin de Gram Gram + Gram -

Morfologa: cocos bacilos cocobacilos pleomrficos espirilos Agrupacin: sencillo parejas cadenas racimos otros

Morfologa: cocos bacilos cocobacilos pleomrficos espirilos Agrupacin: sencillo parejas cadenas racimos otros

Agar MacConkey 37C 24-48 h

Crecimiento: Caract. colonias: Utilizacin de lactosa: Pigmentos: Otros:

4.- Obtencin de cultivos puros

A partir de:_______________ 6.- Caracterizacin serolgica y/o molecular

Agar inclinado BHI o nutritivo

7.- Estudio de la susceptibilidad o resistencia ante diferentes antimicrobianos Antibiograma

5.- Caracterizacin Morfolgica y Bioqumica

Coloracin de Gram
Gram + Gram -

Cocos catalasa (-) Streptococcus

Bacilos Corynebacterium spp Actinomyces pyogenes Rhodococcus equi Filamentosos Cocos Fusobacterium necrophorum Bacilos Pseudomona aeruginosa Pasteurella multocida Actinobacillus lignieresii

(+) Staphylococcus Micrococcus Filamentosos Actinomyces bovis Actinomyces viscosus Nocardia asteroides

OF-glucosa

(O+ , F-) Micrococcus

Coagulasa en lamina (v) Coagulasa en tubo (v)

(O+ , F+) Staphylococcus

LOS RESULTADOS DE LAS PRUEBAS DE LABORATORIO DEPENDEN DE:

Calidad de la muestra Tiempo y cuidado durante la recoleccin Habilidad de la tcnica y experiencia del personal de laboratorio

 Los mdicos veterinarios pueden realizar

Pruebas bacteriolgicas simples

Los procedimientos ms complejos deben dejarse al bacterilogo clnico

ANTE PROCESOS INFECCIOSOS LOS MDICOS VETERINARIOS DEBEN

1. Saber cundo y cmo tomar muestras 2. Que exmenes de laboratorio solicitar 3. Como interpretar los resultados

COMUNICACIN VETERINARIO LABORATORIO

Bacteriologa clnica
Gran nmero de agentes que causan enfermedades infecciosas

Tcnicas varan segn

Sndrome clnico Tipo de agente

Ninguna prueba permitir aislamiento y caracterizacin de todos los patgenos potenciales

Informacin clnica es muy importante

 Mdico veterinario diagnstico tentativo

No espera los resultados de laboratorio

Solicitud de pruebas
Informar al personal de laboratorio acerca de la condicin clnica y del diagnstico tentativo
Agente patolgico del que se sospeche

Informes preliminares del laboratorio

 Los recientes avances en las tcnicas diagnsticas han permitido que los servicios de bacteriologa clnica se conviertan en un complemento accesible econmicamente para la prctica veterinaria moderna

MUESTRAS CLNICAS
En la bacteriologa clnica se analiza, examina o estudia una muestra clnica, la cual representa una porcin o cantidad de material de origen animal, con el fin de determinar la presencia o ausencia de un microorganismo especfico.

RECOLECCIN DE MUESTRAS
No existe rea alguna de los anlisis clnicos como el del laboratorio bacteriolgico, en donde el origen y tipos de muestras sean tan diversas. La seleccin, recoleccin y transporte de las mismas tiene una influencia significativa sobre los resultados.

RECOLECCIN APROPIADA DE MUESTRAS

Las muestras deben:
Tomarse del sitio real de la infeccin Tomarse antes de la administracin de antibiticos Mnima contaminacin con tejidos, rganos o secreciones adyacentes Observar tiempos y sitios ptimos para toma de muestras Cantidad adecuada Dispositivos de recoleccin apropiados

 Obtenerse mediante una tcnica asptica Descontaminar la piel al obtener muestras mediante biopsias o puncin por aguja fina Transportarse al laboratorio sin contaminacin o cambios adicionales en las cifras relativas de bacterias Rotulado adecuado del recipiente Enviar mltiples muestras cuando hay lesiones en diversos sitios Diferenciar las muestras para Anatoma patolgica (formol)

DISPOSITIVOS PARA OBTENCIN Y TRANSPORTE

IMPORTANCIA DE LA FLORA MICROBIANA NORMAL

Correlacionar resultados de cultivo con signos clnicos Cuantificacin del Crecimiento
Crecimiento ligero, moderado o intenso

Familiarizarse con la flora normal de diferentes regiones corporales

Sitios corporales estriles Ausencia de patgenos especificados Esfuerzo dirigido a identificar patgenos en las muestras

LUGAR Piel, Odo

AEROBIOS Staphylococcus, Micrococcus, Difteroides, contaminantes transitorios de origen ambiental y fecal Micrococcus, Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus, coliformes, Proteus, Pasteurella, Actinobacillus, Haemophilus, Mycoplasma Sin residentes, solo contaminantes transitorios Reducido nmero de Streptococcus tipo alfa Streptococcus, Escherichia coli, Klebsiella, Enterobacter, Proteus y otros

ANAEROBIOS

Boca, Faringe

Bacteroides, Fusobacterium, Actinomyces, espiroquetas y otras

Trquea, Bronquios, Pulmones Estmago, Intestino delgado Intestino grueso

Lactobacillus

Clostridium, Fusobacterium, Bacteroides, Lactobacillus, espiroquetas

Vulva, Prepucio

Difteroides, Micrococcus, Staphylococcus y organismos fecales Puede haber ocasionalmente en estas reas un nmero reducido de bacterias sin importancia

Conjuntiva, Utero, Glndulas mamarias

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
Esquema de procesamiento flexible Variables a considerar
Origen anatmico Estado de la muestra
Esta en condiciones de ser procesada?
Fuerte contaminacin Deshidratacin Cantidad insuficiente Retraso excesivo en la recepcin Evidencias de mal manejo

Obtener una segunda muestra

Procesamiento mismo da de recoleccin Especie animal Historia clnica Solicitudes especiales del mdico veterinario

Resultados de examen directo

SANGRE

Intermitencia y baja magnitud de la mayora de las bacteremias Varias muestras

1ra. al iniciar la fiebre (Si es posible)

5 a 10 ml de sangre Concentracin de M.O. < 5/ml Recoleccin no asptica Relacin sangre y caldo de cultivo de 1:10 Tcnica Sulfonato sdico de polianetol (SSP)
Incubacin de hasta 7 das

Tcnica lisis centrifugacin

Disminuye tiempo Permite recuperar M.O. Intracelulares Recoleccin asptica

ORINA
Medio excelente para crecimiento microbiano Lavado riguroso de lo genitales externos
Remover organismos contaminantes

Contaminacin uretral vs. Infeccin >105 UFC/ml = bacteriuria significativa Tcnicas:

Cateterismo uretral (macho vs. Hembra)
Infecciones nosocomiales

Mitad de chorro Cistocentesis

Jeringa estril o recipiente

Procesar antes de las dos horas

Refrigerar hasta 8 horas

MATERIALES PURULENTOS DE LESIONES CERRADAS

Mdico veterinario realiza la puncin Sujecin del paciente Limpie cuidadosamente la zona afectada y su periferia con algodn empapado de alcohol yodado 3X Haga puncin del absceso y extraiga la cantidad necesaria del material mediante jeringa estril Mantener y preservar bien sellada la muestra en lugar libre de humedad y seco en la jeringa haciendo uso del tapn Envela al laboratorio inmediatamente
Por no tener medio de transporte.

Volumen de la muestra:
1 a 2 ml de aproximadamente

MATERIAL PURULENTO DE LESIONES ABIERTAS

Pueden ser fstulas y lceras entre otras Limpie la zona afectada con agua destilada estril Nunca use alcohol yodado
Lesiona los tejidos y afecta los resultados de los cultivos

Sujete al paciente Mediante un escobilln y de un sitio poco expuesto al ambiente, tome la muestra
Escobilln tubo tapa rosca con solucin salina estril
Debe tapar por completo la parte del escobilln que contiene la muestra algodn completamente Impregnado

SECRECIONES OTICAS
Conducto auditivo externo sin profundizar el tmpano.
Se obtiene con escobillones estriles con los cuales se toma la mayor cantidad posible de secrecin de ambos odos

SECRECIONES OCULARES:
CONJUNTIVAL, CORNEAL, ACUOSA O VITREA

Conjuntivitis escobilln estril sacos conjuntivales o ngulo lagrimal Ulceras cornales esptula estril raspado cuidadoso de lesin

SECRECIONES VAGINALES Y/O UTERINAS

Lavado estricto de genitales externos con agua y jabn
Secar con toallas desechables.

Desinfeccin con alcohol yodado y alcohol antisptico (3 veces cada uno). Espculo estril y escobilln estril el cual se introducir por todo el centro hasta llegar al crvix tratando de no tocar las paredes, La muestra se debe preservar y mantener en el medio de transporte adecuado. El volumen de la muestra debe se representativo.

LQUIDO CEFALORAQUDEO
Mdico veterinario Puncin lumbar Condiciones aspticas estrictas
Evitar contaminacin del canal raqudeo con bacterias Prevenir la contaminacin de la muestra.

Tubos estriles tapa rosca

Evitar perdida de lquido o contaminacin No utilizar tubos tapa de algodn Desinfectar rigurosamente el rea de puncin

Enviar de inmediato al laboratorio

No sobreviven con el almacenamiento prolongado o cambios bruscos de temperatura.

Volumen de 3 - 4 ml

LIQUIDO PERITONEAL, ASCITICO, SINOVIAL, PERICARDICO, PLEURAL Y TORACICO

Se realiza aspticamente con desinfeccin previa, jeringas y agujas estriles Remitir la mayor cantidad de lquido al laboratorio Grandes volmenes de lquido pleural y peritoneal heparina estril
Prevenir cogulos que atrapen MO La muestra debe ser enviada inmediatamente al laboratorio

El volumen de la muestra debe ser representativo,

Aproximadamente de 3-4 ml.

LECHE

- MASTITIS

Lavado de los pezones con agua y jabn Desinfeccin de cada pezn con alcohol yodado y antisptico Eliminar primeros chorros Se recolecta muestra de cada cuarto individual en tubos estriles que contengan el preservativo. Preservar y mantener refrigerada la muestra mientras llega al laboratorio. Se deben tomar aproximadamente 10 ml de cada pezn.

HECES
Manejo adecuado y transporte inmediato Muestra de preferencia 2 3 gramos de heces
Heces con moco y sangre presentan gran nmero de bacterias patgenas

Directamente del recto, previo lavado externo con agua y jabn Escobillones estriles esfnter anal rotacin Se toma una proporcin de 1 gramo de materia fecal por 10cc de medio de transporte Procesar de inmediato
Cambios de temperatura afectan viabilidad

No recoger muestra del suelo No supervivencia de Salmonellas por cambios de pH

BIOPSIAS QUIRRGICAS
Costosas y riesgosas Enviar porcin de tejido Las muestras de abscesos deben incluir pus y pared del mismo Mltiples muestras de diferentes sitios si la lesin es grande

ABORTOS
Remitir al laboratorio: Contenido abomasal en jeringa estril (5 ml). Contenido de cavidades (asctico o pleurtico). rganos: hgado, rin, bazo, timo, pulmn y placenta (refrigerados y sin congelar).

NECROPSIAS
Anticipar las muestras a tomar para evitar contaminacin Muestras del tubo digestivo se toman al final Lquidos corporales se colectan con inyectadoras estriles Las muestras de tejidos se deben colocar en recipientes estriles con cierre hermtico Para evitar contaminacin o desecacin
Sin fijarlas y sin conservador

Refrigerar si se retarda el envo al laboratorio

SECRECIONES RESPIRATORIAS
Hisopados intranasales Lavados traqueales Lavado endotraqueal Lavado Broncoalveolar Broncoscopa Aspiracin pulmonar por aguja fina

CULTIVO SIN CRECIMIENTO

Posible resultado negativo falso Errores en la obtencin de la muestra y el transporte
Desecacin Medio de transporte inapropiado Teraputica antimicrobiana previa infecciones Microorganismos caprichosos
Micoplasmas Anaerobios obligados Espiroquetas Rickettsias

Gracias por su atencin