VALIDACIN DEL PROCESO DE ESTERILIZACIN A VAPOR DE SOLUCIONES PARENTERALES DE GRAN VOLUMEN

Elena Trifonova Arkadievna, Martha Zoe Lemus Rodrguez

Empresa Laboratorio Farmacutico "Oriente"

Las condiciones especficas de aplicacin de un producto medicamentoso estril exigen el aseguramiento de su calidad al mximo. Por ello la validacin de procesos para productos estriles ha recibido ms atencin y consumido ms esfuerzos que cualquier otro aspecto de la produccin farmacutica durante los pasados 20 aos, y este nfasis continua hoy. En la tecnologa de soluciones parenterales el proceso de esterilizacin es la etapa de mayor importancia, y debido a su complejidad la validacin prospectiva de este proceso se convierte en obligacin de fabricante farmacutico. El presente trabajo expone los resultados del estudio de validacin del proceso de esterilizacin a vapor, empleado en la fabricacin de soluciones parenterales de gran volumen que se realiza en la Empresa Laboratorio Farmacutico "Oriente". Palabras claves: soluciones parenterales, esterilizacin.
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The specific conditions for the institution of a sterile medication require utmost quality security. That is why, over the last 2 decades up to the present day, the validation of the processes for sterile products has got much more attention and has taken more efforts than any other aspect of the pharmaceutic industry. Within the parenteral solutions technology the sterilization process is the stage of greatest importance. In addition, the prospective validation of this process becomes an obligation for the pharmaceutic manufacturer due to its complexity. In the present report, the outcomes of the validation study of the steam-sterilization process used in the manufacture of the parenteral solutions of great volume made by the "Oriente" Pharmaceutic Laboratory Enterprise are shown. Key words: parenteral solutions, sterilization.

Introduccin
En la tecnologa de soluciones parenterales la etapa de esterilizacin es determinante, ya que realizada incorrectamente no slo inutilizara el esfuerzo de todas las etapas anteriores del proceso, sino ocasionara graves perjuicios a la salud de los consumidores. Con fines de prevenir estos daos el fabricante farmacutico de productos sujetos a esterilizacin final debe prestar atencin especial a esta etapa del proceso productivo. Esterilizacin es el proceso destinado a producir el estado de esterilidad. El concepto tradicional de estado de esterilidad es la absoluta destruccin o eliminacin de los microorganismos viables. Con el mtodo de esterilizacin final de productos parenterales, en particular, empleando vapor a presin, la probabilidad de no ms de una unidad no estril por milln /1,2/ realmente se logra.

El proceso de esterilizacin depende de la eficacia del equipo y de las limitaciones que son propias de cada producto y es necesario un compromiso entre estos factores para llevar a cabo esterilizacin requerida, es decir, el proceso de esterilizacin es caracterstico de cada autoclave, envase y producto. El criterio de aceptacin para la esterilidad en las farmacopeas reconocidas /1,2/ est basado en un ensayo destructivo sobre una muestra seleccionada, demostrndose de este modo, que todas las unidades que forman parte del lote son estriles a base de probabilidad estadstica. Esta probabilidad depende del grado de exposicin del material, el tipo, la cantidad y la resistencia de los microorganismos presentes y el nivel alcanzado de destruccin en el proceso de esterilizacin. La comprensin de los procesos de letalidad y los extensos registros histricos realizados permitieron establecer los requisitos que ha

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de cumplir el fabricante farmacutico durante el proceso de esterilizacin. Las autoridades regulatorias /3/ prescriben las especificaciones para el equipamiento y el proceso. La complejidad del proceso de esterilizacin hace evidente la necesidad de un chequeo minucioso de todos los componentes involucrados en ste. De aqu puede deducirse que la introduccin por la Administracin de Drogas y Alimentos de Estados Unidos (FDA) desde hace 20 aos del concepto de validacin de procesos en la tecnologa de parenterales tuvo sus antecedentes en el proceso de esterilizacin. El objetivo de la validacin de los procesos de esterilizacin es garantizar la aplicacin del efecto letal preestablecido a todas las unidades sometidas a un determinado ciclo, asegurando que dicho efecto se aplique de modo constante a todas y cada una de las cargas de producto que se procesen. Esto permite, marcadamente, mejorar la calidad y reducir los defectos. Por tanto, el cuestionamiento de la efectividad del costo de validacin no procede para el caso de esterilizacin, ya que es evidente lo valioso de su contribucin a los usuarios de productos farmacuticos. El programa de validacin en sus principios generales es comn para cualquier proceso o equipo, y est dirigido a la recopilacin de los documentos que confirman la correspondencia entre el desenvolvimiento previsto y real de stos. Las consecuencias de este programa son la confeccin del monitoreo peridico para el proceso productivo y los planes de mantenimiento para el equipo /4/. En particular, la validacin del proceso de esterilizacin comprende la certificacin de las partes mecnicas y la calificacin de los instrumentos de medicin del equipo contra patrones de temperatura y presin de exactitud conocida; la seleccin de bioindicadores apropiados; el estudio de distribucin del calor en la cmara del esterilizador y la localizacin de los puntos de mayor riesgo, puntos fros, en vaco y con la carga especifica ; la determinacin de penetracin del calor dentro de la unidad en el punto fro; la determinacin de la magnitud del valor F o (efecto de tiempo/temperatura o equivalente total a tiempo neto a temperatura 121 C) y por ultimo, confirmacin de la reproducibilidad del proceso. /5/

En el presente trabajo se exponen los resultados de la validacin del proceso de esterilizacin de soluciones parenterales de gran volumen (SPGV) realizada en las autoclaves horizontales, a vapor saturado presurizado, que componen esta lnea de produccin en la Planta de Soluciones Parenterales de la Empresa Laboratorio Farmacutico "Oriente" .

Mtodos y materiales
Cada uno de los equipos instalados, de fabricacin italiana posee una cmara de doble puerta, construida de acero inoxidable y de forma rectangular con las esquinas redondeadas, cuyo volumen es de 10,73 m3 , siendo el largo de la cmara de 7,4 m y la capacidad de carga 2 560 frascos de 1 000 mL o 4 000 frascos de 500 mL , posicionados sobre 8 carros de 5 bandejas (niveles) cada uno. Est provisto de una camiseta para la circulacin de vapor , as como dispositivos de seguridad que impiden la apertura de las puertas cuando existe presin en la cmara. El aire es evacuado de la cmara mediante succin con una bomba de vaco. Posee trampas de vapor en las lneas de descarga de la cmara y la camiseta, y la entrada de vapor se realiza por la parte superior de la cmara, opuesta a la descarga. La temperatura y la presin son controladas automticamente, adems de poseer indicadores de presin y termmetro de mercurio en vidrio, as como registrador de temperatura en una carta grfica . En la fase de enfriamiento se mantiene la presin mediante inyeccin de aire comprimido filtrado por un filtro esterilizante. El agua usada para el enfriamiento es destilada y apirognica, o sea, estril prcticamente, y el equipo cuenta con controladores de nivel que impiden que la misma en ningn momento se ponga en contacto con los contenedores ubicados en el nivel ms bajo. Posee respiradero, as como vlvulas de drenaje para descarga de emergencia manual. /6, 7/ El ciclo de esterilizacin en este equipo (figura 1, curva punteada ) se realiza segn el programador cclico con que el mismo cuenta y est dividido en siete fases: vaco, precalentamiento del material, esterilizacin, preenfriamiento, enfriamiento con agua, descarga y fin de ciclo.

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Autoclave Pared del envase Temperatura C

Solucin

Calentamiento

Exposicin

Enfriamiento Tiempo

Fig. 1 Ciclo de esterilizacin.

El tiempo total es de 90 min aproximadamente, siendo lo ms significativo en el mismo la fase de esterilizacin, cuyo tiempo de duracin se determina a partir del tiempo en que el bulbo del termmetro manomtrico ubicado en el fondo de la cmara alcanza la temperatura prefijada segn los parmetros establecidos. Est demostrado que el calor hmedo a temperatura de 121 C aplicado durante 8 min produce el efecto de esterilidad /1,2,5/. La ventaja del empleo de vapor saturado para la esterilizacin de las soluciones acuosas en contenedores de vidrio consiste en su mayor capacidad trmica comparada con el calor seco, ya que en el punto de condensacin se libera una cantidad de energa igual al calor de vaporizacin. A la temperatura de 121 C son 542 caloras por cada gramo. En el caso de aire caliente es solamente 1 calora por gramo por cada grado centgrado de enfriamiento, o sea, que el vapor calienta mucho ms rpido que el aire caliente. El aire caliente a 121 C producir

el mismo efecto que produce el vapor a esta temperatura mediante 60 h de exposicin /5/. Es inconveniente la prolongacin innecesaria de un ciclo de esterilizacin, ya que esto resta productividad y posibilita interacciones indeseables entre producto y material de envase. La uniformidad en la distribucin del calor en la cmara de la autoclave depende fundamentalmente, del grado de evacuacin del aire de la misma, ya que por ser ste ms denso que el vapor resulta desplazado, en nuestro caso, hacia el fondo de la cmara. El aire atrapado dentro de la cmara forma bolsas y se calienta a la temperatura del vapor, pero no posee las mismas caractersticas de transferencia de calor de ste. Otros factores determinantes son el tamao y configuracin de la carga, que pueden dificultar la circulacin adecuada, obstaculizando el desplazamiento del aire /5,6/. El estudio de la distribucin y penetracin del calor se llev a cabo con el empleo de un termmetro registrador de 6 sondas

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o termorresistencias, marca ISI, fabricacin italiana, calibrado y verificado en su exactitud por el Laboratorio de Instrumentacin y Control del Instituto Superior Politcnico "Julio Antonio Mella" (ISPJAM), con un intervalo de tiempo entre mediciones de 1 min, lo que facilita el clculo del parmetro F o . Este estudio se realiz en dos etapas: en vaco y con los tamaos y configuraciones de la carga que contempla el plan de produccin de la empresa. Para el estudio de la distribucin de calor en la cmara se ubicaron en cada carro las sondas en puntos determinados al azar por la configuracin de un tringulo con el vrtice hacia arriba, de modo que el mayor nmero de puntos de medicin se ubic en la zona de mayor riesgo -fondo de la cmara-, y la misma se sonde en varios planos horizontales y verticales en toda su capacidad. Se realizaron tres rplicas de cada punto con la cmara vaca (sin contenedores) y con lotes de frascos por 500 mL, con el fin de identificar los puntos fros de la cmara. El estudio de penetracin de calor se realiz ubicando las sondas a tres niveles de cada tipo de frascos conteniendo la solucin ms viscosa para producir (dextrosa 30 %), replicndose tambin tres veces en cada punto de medicin. Identificado el punto ms fro del frasco de cada clase se pas a una segunda etapa de este estudio con la cmara cargada. Esta etapa consisti en ubicar las sondas en los puntos fros del interior de frascos conteniendo solucin y stos en los puntos fros de la cmara, localizados anteriormente. En esta etapa se evalu el efecto tiempo/temperatura, calculando el F o a base de mediciones de temperatura. Por ltimo, establecidos los parmetros de proceso (tiempo, temperatura y presin) se ubicaron los bioindicadores seleccionados en los puntos fros localizados en el estudio anterior, realizndose un nmero de corridas adecuado para obtener la confirmacin de la reproducibilidad de la data. El bioindicador empleado con la premisa de un llenado asptico y una mnima carga microbiana es el microorganismo de mayor resistencia trmica, el cual se elabora a base de la espora bacilo sterotermofilo (Bacillus stearothermofilus) .

La validacin del proceso de esterilizacin y su equipo correspondiente se acomete por un grupo de especialistas formado por: mecnico, tecnlogo, microbilogo, especialista en control automtico y fabricante.

Resultados y discusin
La construccin del equipo validado, modelo DLOV -PV de la firma italiana F. de LAMAS, est avalada por actas de pruebas hidrulicas, de soldadura y hermeticidad a presin. Durante la primera etapa del estudio acometido se verific el funcionamiento y concordancia del diseo del equipo con lo establecido en los lineamientos de Buenas Prcticas de Fabricacin (BPF) emitidas por la FDA, as como los medios de control con especial atencin al termmetro de mercurio, manmetro, registrador grfico de temperaturapresin- tiempo. Se confeccion adems, la lista de piezas de repuesto y la frecuencia de los mantenimientos. Mediante el sondeo de temperatura se determin la ubicacin de los puntos ms fros, hallados en el fondo de la cmara y los puntos ms calientes, encontrados en el tope y la variacin, que debe ser de no ms de 1,50 C /3/, con respecto a la temperatura programada entre los puntos sondeados, siendo la mxima diferencia detectada de 0,8 C como promedio en las corridas realizadas. Paralelamente se determin la correlacin presin/ temperatura de esterilizacin, establecindose 1,15 bar y 126 C como los parmetros ptimos para el proceso. Se confirm la diferencia entre ciclo de esterilizacin en vaco y con la cmara cargada, presentndose variaciones en el tiempo necesario para que la temperatura programada alcance su valor, figura 1, curvas discontinua y punteada, y no se detect diferencia significativa entre los dos niveles, mitad superior e inferior de la solucin de mayor viscosidad para procesar (dextrosa 30 %), en el estudio de penetracin realizado, as como se determin que la temperatura para mantener por el controlador automtico, considerando la termolabilidad del producto durante la fase de exposicin al calor es de 124 C.

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Tabla 1 El efecto tiempo/temperatura (valor F) calculado para los puntos ms fros hallados
Corrida 1 2 3 4 5 28,8 20,1 17,8 25,7 25,9 Puntos ms fros (fondo de la cmara) 31,4 32,3 23,1 26,0 26,9 19,9 28,3 19,0 27,4 25,9

Tabla 2 Frecuencia de valores F calculados

Rango <8 Localizacin Fondo 0 0 3 12 8-15 15-20 >20

Tabla 3 Resultados de monitoreo con bioindicadores

Tipo de carga 500 mL Respuesta de bioindicador Negativo Positivo 27 0 65 0 1 000 mL

El efecto tiempo / temperatura (valor F o ) se calcul sobre la base del sondeo de temperatura en los puntos ms fros con mediciones a intervalo de 1 min. La frmula empleada es F=t 10T-121/10 , donde: t : intervalo de tiempo entre mediciones; T: temperatura medida /5/. Las mediciones se realizaron a un tiempo de esterilizacin de 20 min en cinco corridas. La data obtenida se proces en computadora, arrojando los resultados que se presentan en la tabla 1, los que se clasificaron por su frecuencia en la tabla 2. Como se aprecia en esta tabla el F 0 alcanza el

tiempo programado de 20 min en doce de las quince mediciones realizadas, encontrndose , no obstante, las otras tres dentro del rango ms cercano de 15 a 20 min y ninguna es menor de 8 min, valor mnimo establecido /2, 3, 5, 9, 11/ para el factor de letalidad. Los resultados de las corridas con bioindicadores para ambos tipos de carga estn sumarizados en la tabla 3. Debe ser tomado en consideracin que los resultados obtenidos tambin dependen en gran medida de mantener baja carga microbiana en el producto para esterilizar durante todo el proceso de fabricacin, as como no dejar transcurrir ms de 8 h entre la adicin de principio activo y la entrada del ltimo carro al equipo

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esterilizador, o sea, cumplir los lineamientos de las BPF de parenterales al efecto.

equipo, de los parmetros de proceso o de configuracin y tamao de la carga para procesar.

Conclusiones
1. Sobre la base del estudio realizado y los resultados obtenidos en la validacin del proceso de esterilizacin durante la puesta en marcha de la Planta de Soluciones Parenterales de Gran Volumen se considera que el proceso de esterilizacin realizado en la autoclave DLOV-PV es confiable. 2. Ampliando el margen de seguridad para el proceso se establecieron los siguientes parmetros conjugados con la susceptibilidad de los productos por procesar para programar en los dispositivos de control del proceso de esterilizacin realizado en el equipo validado: TRP (controlador de temperatura y presin)124 C; el tiempo de exposicin- 30 min; la presin de vapor saturado- 1,15 bar y grado de evacuacin de aire de la cmara -0,8 bar. 3. Se estableci la frecuencia de monitoreo del proceso de esterilizacin con bioindicadores seleccionados del modo siguiente: en cada corrida del equipo, introducidos en los frascos situados en los puntos ms fros hallados, y semestralmente realizar el biosondeo de la cmara en su totalidad. 4. Realizar las verificaciones de los instrumentos de medicin y control cada tres meses contra un patrn de exactitud reconocida por el organismo autorizado. 5. Efectuar el estudio de validacin cada vez que se introduce un cambio, sea de diseo de

Bibliografa
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