MECANISMOS CAUSANTES DE INFERTILIDAD DURANTE LA MASTITIS BOVINA

Fernando Perea Ganchou Carlos Gonzlez Stagnaro

La fertilidad es el resultado de la interaccin de diversos factores biolgicos inherentes de la vaca (calidad del ovocito, intensidad y duracin del celo, microambiente del oviducto y tero, capacidad secretora del cuerpo lteo, etc.), de la capacidad fecundante del semen del toro y de las condiciones del medioambiente. Todos estos factores influencian mediante diferentes mecanismos, una sucesin de eventos fisiolgicos que resultan en la ovulacin, fecundacin, inicio de la gestacin, desarrollo del embrin y feto, y que concluyen con el parto y el nacimiento de un ternero sano (Perea & Gonzlez, 2010). La fertilidad es afectada por numerosos factores ambientales y genticos como el perodo al primer servicio postparto, el mes y la poca del ao en que ocurre la inseminacin, el predominio racial, las condiciones agroecolgicas, el nivel de produccin lctea, la presencia de enfermedades y la duracin del ciclo estrual, entre otros (Perea et al., 2005; Perea & Inskeep, 2008). La mastitis bovina, por otra parte, es una reaccin inflamatoria del tejido mamario cuyo principal agente etiolgico es de tipo bacteriano, aunque tambin puede ser resultado de la exposicin de la glndula a sustancias qumicas, lesiones trmicas y traumatismos. Desde el punto de vista infeccioso, la mastitis es la enfermedad ms importante que afecta los bovinos lecheros en todas las regiones del mundo. Su alta prevalencia genera prdidas econmicas millonarias debido a los gastos ocasionados por tratamientos intramamarios y parenterales, servicios veterinarios, eliminacin de vacas de alto valor gentico, descarte de leche, y por la reduccin de la calidad y del volumen de leche producido por la glndula (Hogeveen et al., 2011). Numerosas evidencias han demostrado que la infeccin bacteriana de la glndula mamaria disminuye la fertilidad, aumenta el perodo vaco y la prevalencia de abortos en las vacas afectadas (Barker et al., 1998; Schrick et al., 2001; Hockett et al., 2005; Nava-Trujillo et al., 2010). Diversos mediadores inflamatorios e inmunolgicos liberados por el tejido mamario durante la mastitis, influencian varios sistemas fisiolgicos que alteran la delicada relacin funcional entre los diferentes componentes del eje reproductivo (hipotlamo, hipfisis, ovarios y tero) causando subfertilidad y atraso en la preez (Petroff et al., 2001; Edwards et al., 2005; Lavon et al., 2008, 2011; Williams et al., 2008). En este captulo se describen los mecanismos asociados a la infertilidad en las vacas con mastitis.

www.venezuelaganadera.com

154 / Fernando Perea Ganchou y Carlos Gonzlez Stagnaro

EXPERIENCIAS DEL EFECTO DE LA MASTITIS SOBRE LA FERTILIDAD

Un primer reporte referido al efecto de la mastitis sobre el comportamiento reproductivo de los vacunos fue publicado hace 20 aos (Moore et al., 1991). Dicho estudio mostraba que las vacas con mastitis causada por microorganismos gran negativos tuvieron ciclos estruales ms cortos que las vacas sanas del mismo rebao. En apariencia, una luteolisis anticipada ocasion muerte embrionaria y el inicio de un nuevo ciclo interestrual pocos das despus. Independiente del microorganismo aislado al momento de detectarse la enfermedad, las vacas afectadas con mastitis clnica entre la primera IA y el diagnstico de preez necesitaron significativamente (P<0,01), mayor nmero de servicios por concepcin (s/c) para concebir (2,9 0,3 vs 1,6 0,3 s/c), a la vez que prolongaron el lapso parto-concepcin (136 13,3 vs 113,7 10,8 d) que aquellas diagnosticadas enfermas antes del primer servicio o despus de ser diagnosticadas gestantes (1,7 0,1 s/c y 92,1 4,6 d, respectivamente) (Barker et al., 1998). En otro reporte, las vacas identificadas con mastitis clnica o subclnica previa a la primera IA tuvieron mayor nmero de s/c e intervalos a la primera IA y a la concepcin ms prolongados que las vacas control, libres de la enfermedad (Schrick et al., 2001; Tabla 1). Segn estos autores, el comportamiento reproductivo estuvo ms severamente afectado cuando la mastitis subclnica, una vez instaurada, progres a la fase clnica. Tabla 1. Efecto de la mastitis clnica y subclnica sobre algunos parmetros reproductivos en vacas diagnosticadas con mastitis entre el 1er-servicio y la concepcin (Schirick et al., 2001)
Tipo de mastitis Clnica Subclnica No mastitis
a, b

N 81 229 326

Parto-1er servicio 77,3 2,7

a

Parto-concepcin Servicios por concepcin 110,0 6,9 a 107,7 6,9 a 85,4 5,8 b 2,1 0,2 a 2,1 0,2 a 1,6 0,2 b

74,8 2,7 a 67,8 2.2 b

P < 0.05.

El anlisis hormonal de vacas a las cuales se les indujo mastitis de forma experimental por inoculacin de Streptococcus uberis en dos cuartos de la glndula, demostr que las vacas con mastitis mostraron concentraciones ms elevadas de cortisol que las vacas testigo (sanas) a los 4 y 7 das de la inoculacin (Hockett et al., 2000). Otras hormonas tales como la hormona luteinizante (LH), prolactina (PRL), estradiol (E2) y progesterona (P4) no difirieron entre ambos grupos (Hockett et al., 2000). Sin embargo, un estudio ms reciente (Hockett et al., 2005) mostr que 75 % (8/12) de las vacas inoculadas con Streptococcus uberis contrajeron mastitis experimentalmente, pero no exhibieron signos de celo y mostraron una significativa reduccin de la concentracin mxima y del nmero de pulsos de LH, as como de la concentracin de 17-b estradiol durante las 24 horas previas a la descarga ovulatoria de LH (en los grupos que ovularon), comparado con las vacas que fueron inoculadas y que mostraron signos celo (4/12) o que no desarrollaron mastitis (n=5), al igual que con las vacas sana (n=12).

www.venezuelaganadera.com

Manejo de la Mastitis Bovina y Programas de Control Mecanismos causantes de infertilidad durante la mastitis bovina

/ 155

Recientes resultados de un estudio en vacas mestizas en la cuenca del Lago de Maracaibo (Nava-Trujillo et al., 2010), indicaron que las vacas identificadas con mastitis clnica en el periodo entre el parto y la primera IA tuvieron intervalos al 1er-servicio y a la concepcin mucho ms prolongados que las vacas sanas, sin que el numero de s/c y la tasa de concepcin al 1er servicio hayan sido afectados por el estatus clnico de la glndula mamaria; adems, el efecto de la enfermedad fue ms acentuado en vacas primparas que en multparas (Tabla 2). Las vacas primparas con mastitis tuvieron una fertilidad 17,5 puntos ms baja (42,9 vs. 60,4%) que en las vacas sanas de la misma categora (P>0,05). Independiente del nmero de partos, las vacas que contrajeron mastitis luego de 60 das de lactancia tuvieron intervalos al 1er-servicio y a la concepcin ms extensos que las diagnosticadas enfermas en das previos de la lactancia (Nava-Trujillo et al., 2010). Tabla 2. Efecto de la mastitis clnica diagnosticada antes de la primera IA sobre algunos parmetros reproductivos en vacas mestizas primparas y multparas (Modificado de Nava-Trujillo et al., 2010).
Intervalos postparto (das) Grupo Mastitis Control *Difer.
a, b

Parto-1AH servicio Primparas 165,6 8,7> 112,1 7,7= 53.5 Multparas 84,9 4,6= 22,0

Parto-concepcin Primparas 161,8 12,7= 68,3 Multparas 126,1 7,6= 18,1

Servicios/ concepcin Primparas

Fertilidad al primer servicio (%)

Multparas Primparas Multparas 42,8 60,4 -17,6 51,8 54,6 -2,8

106,9 5,3> 230,1 14,4> 144,2 8,6=

2,47 0,31 2,22 0,18 2,20 0,27 2,23 0,16 0,27 -0,01

P < 0.05; * Diferencia entre vacas de la misma paridad.

El anlisis retrospectivo de la relacin entre el nmero de clulas somticas en muestras de leche y el comportamiento reproductivo en vacas Holstein (Pinedo et al., 2009), demostr que las vacas con al menos un conteo elevado de clulas somticas (CCS) antes de la concepcin aumentaron el intervalo a la preez en 48,7 das y necesitaron 0,49 servicios adicionales para concebir que las vacas control con bajos CCS. Adems, vacas con CCS durante los primeros 90 de gestacin incrementaron el riesgo de aborto en 1,2 (Pinedo et al., 2009) comparado con las vacas controles; mientras que las vacas que se diagnosticaron con mastitis en los primeros 45 das de gestacin tuvieron un riesgo de aborto 2,7 mayor durante los siguientes 90 das, que las vacas sanas (Risco et al., 1999).

MECANISMOS ASOCIADOS CON LA MASTITIS QUE ALTERAN LA FUNCIN REPRODUCTIVA DE LA VACA

Respuesta inmune y mediadores inflamatorios Durante la mastitis las citoquinas liberadas localmente por leucocitos y clulas epiteliales mamarias intervienen en la respuesta inflamatoria (Sordillo et al., 2009). Las citoquinas son mediadoras moleculares de la inflamacin y de la respuesta inmune que incrementan durante la infeccin de la glndula mamaria. Ellas son responsables directa o indirectamente de muchos de los mecanismos a travs de los cuales la funcin reproductiva se ve suprimida o alterada en vacas con mastitis

www.venezuelaganadera.com

156 / Fernando Perea Ganchou y Carlos Gonzlez Stagnaro (Hansen et al., 2004). Ciertos componentes moleculares txicos de la superficie de las bacterias gram negativas (lipopolisacridos) y gram positivas (peptidoglicanos) evocan una respuesta inmunolgica que conduce a la secrecin de citoquinas, tales como el factor de necrosis tumoral a (TNF-a), las interleuquinas 1b (IL-1b), 6, (IL-6), 8 (IL-8), 10 (IL-10), 12 (IL-12), el interferon g (INF-g) entre otras (Sordillo et al., 1995; Chockalingam et al., 2005; Bannerman et al., 2009). Efectos sobre el crecimiento folicular y la ovulacin La administracin de lipopolisacridos (LPS) de bacterias, en particular de Escherichia coli, ha sido usado como modelo experimental para recrear el efecto de la mastitis sobre diversos aspectos de la funcin reproductiva. La aplicacin intravenosa (IV) de 5 g de LPS de Escherichia coli a las 42 horas de administrarse una dosis luteoltica de PGF2a en novillas, redujo la concentracin plasmtica de 17 b-estradiol y la frecuencia pulstil de LH, a la vez que increment la concentracin media y la amplitud de los pulsos de LH, comparado con el grupo control (inyeccin IV de solucin fisiolgica). Asimismo, mientras que las novillas testigo tuvieron un intervalo entre la inyeccin de PGF2a y la ovulacin de 4,2 0,2 das, las tratadas con LPS ovularon con un atraso de ms de 90 horas (8,0 1,3 das) (Suzuki et al., 2001). En un estudio posterior, una dosis similar de LPS de Escherichia coli se administrada por va intravenosa (LPS-IV) o intramamaria (LPS-IMM) dentro de los 30 minutos posteriores a la deteccin del celo sincronizado con un progestgeno intravaginal (Lavon et al., 2008). Cualquiera que se la va de administracin, cerca de un tercio de las vacas tratadas con LPS extendieron el intervalo estro y ovulacin (IEO) hasta en 75 20,3 horas, es decir, por casi 45 horas, comparado con las tratadas con LPS, que exhibieron un IEO de duracin normal y con las tratadas con solucin fisiolgica (29 2,4 y 31 2,7 horas respectivamente). Las vacas del grupo LPS-IV que prolongaron el IEO y que ovularon, manifestaron un pico adicional de estradiol alrededor de 44 horas posteriores al inicio del celo, seguido por signos tpicos de estro y de una segunda descarga ovulatoria de LH, ms o menos, 53 horas luego de detectarse el primer celo (Lavon et al., 2008). Similar retraso en la ovulacin fue observado en 30% de las vacas naturalmente afectadas con mastitis clnica o subclnica crnica (Lavon et al., 2010). En este caso no se observ alteracin del patrn de secrecin de LH, aunque la concentracin del estradiol en plasma fue menor en las vacas con mastitis con IEO ms largo (3,1 0,4 pg/ml) que en las enfermas con IEO normal o con las no afectadas con mastitis (5,8 0,5 y 5,5 0,5 pg/ml respectivamente). Por otra parte, la concentracin de E2 y androstenediona, as como la relacin E2:P4 en el fluido de folculos preovulatorios colectados 43 horas despus de una dosis luteoltica de PGF2a, en el da 8 del ciclo estrual en vacas con mastitis subclnica, fue significantemente menor que en las vacas sanas o en las hembras recuperadas de una mastitis previa (Tabla 3). De manera adicional, la concentracin de ARNm para el receptor de LH y para algunas enzimas asociadas con la esteroidognesis fue significativamente menor en las clulas de la teca o granulosa de folculos preovulatorios colectados de vacas con mastitis subclnica comparado con los colectados de vacas sanas (Lavon et al., 2011).

www.venezuelaganadera.com

Manejo de la Mastitis Bovina y Programas de Control Mecanismos causantes de infertilidad durante la mastitis bovina

/ 157

Tabla 3. Concentracin de esteroides y relacin E2:P4 en el fluido folicular de folculos preovulatorios obtenidos de vacas con mastitis clnica, recuperadas de mastitis y sanas en el da 8 del ciclo estrual, 42 horas luego de una dosis luteoltica de PGF2a (Lavon et al., 2011).
Estatus Clnico M. subclnica Recuperada de mastitis clnica No mastitis
a,b

N 28 9 24

Estradiol (ng/mL) 673 83 a 1115 126

b

Androstenediona Progesterona Relacin (ng/mL) (ng/mL) E2:P4 121 21 a 137 43

a,b

65 6 a 82 12 72 6 a
a

12 2 a 15 2 b 19 2 b

1170 100 b

196 32 b

P<0.05.

Luego que la prostaglandina uterina desencadena la luteolisis al final del diestro y la progesterona plasmtica disminuye rpidamente, el efecto supresor de la misma sobre la secrecin de la GnRH se reduce y se establece un patrn pulstil de LH de alta frecuencia que favorece el crecimiento folicular y la adquisicin del estatus ovulatorio del folculo dominante presente en los ovarios (Bao & Garverick, 1998). El folculo responde a este estmulo aumentando la produccin de estradiol, que acta en el hipotlamo e hipfisis a travs de un mecanismo de retroalimentacin positivo, e incrementa la frecuencia de los pulsos de LH. La creciente concentracin de estradiol folicular en respuesta a la LH, desencadena la descarga ovulatoria de LH/FSH y pocas horas despus ocurre la ovulacin (Karsch et al., 1987). La presencia de LPS en el organismo alteran el patrn de secrecin de LH (Battaglia et al., 2000) y modifican la tasa de produccin de esteroides foliculares (Williams et al., 2008; Lavon et al., 2011), motivo por el cual la ovulacin no ocurre o sucede varias horas ms tarde de lo normal, como demuestran las evidencias reseadas en prrafos anteriores (Suzuki et al., 2001; Lavon et al., 2008; 2010). Los folculos con un perodo de crecimiento ms prolongado de lo normal (folculos persistentes) debido a bajas concentraciones de P4 durante el ciclo estrual o tratamiento hormonal, estn asociados con una mayor secrecin de estradiol durante el perodo preovulatorio y una subsecuente baja fertilidad (Savio et al., 1993; Stock & Fortune, 1993). Breuel et al. (1993) observaron que las vacas con folculos mas grandes (12,9 0,9 mm) 5 das previos a la descarga ovulatoria de LH tuvieron mayor concentracin de estradiol y una reducida fertilidad (36 vs 91%) comparada con las hembras con tallas foliculares menores (7,5 1,8 mm). Mas an, la prolongacin de la fase de crecimiento folicular con implantes de progesterona, retras la descarga ovulatoria de LH/FSH y disminuy la fertilidad de las vacas tratadas con implantes de Norgestomet por 6 (57%) o 10 das (0%) comparado con 88% del grupo de vacas testigo (Mihm et al., 1994). De esta manera, el incremento del IEO debido a un inapropiado patrn de secrecin de LH en las vacas con mastitis, podra mantener condiciones fisiolgicas similares, como por ejemplo, un ovocito expuesto a elevadas concentraciones de estradiol folicular por un perodo de tiempo ms extenso, comprometiendo la viabilidad del gameto y como consecuencia la fertilidad de la vaca. Asimismo, la alteracin del patrn de secrecin pulstil de LH pudiera conducir al desarrollo de quistes foliculares e infertilidad de las vacas afectadas (Kaneko et al., 2002).

www.venezuelaganadera.com

158 / Fernando Perea Ganchou y Carlos Gonzlez Stagnaro En ovejas ovariectomizadas, se ha demostrado que las endotoxinas bacterianas previenen el incremento del estradiol folicular, debido a que los LPS impiden la instauracin de un patrn pulstil de LH de alta frecuencia (Battaglia et al., 1997; 2000), como requiere la sucesin de eventos fisiolgicos que desencadenan la descarga ovulatoria de LH/FSH y luego la ovulacin (Figura 1). Este hecho aparentemente se debe a que los LPS inhiben la actividad neuroendocrina a nivel hipotalmico suprimiendo la secrecin pulstil de GnRH en la sangre porta-hipofisiaria (Battaglia et al., 1997). Asimismo, la secrecin pulstil de LH es alterada debido a que las endotoxinas bacterianas reducen la sensibilidad de la hipfisis a la GnRH, y porque la hipfisis parece ser ms sensible que el hipotlamo a los LPS (Battaglia et al., 1999; Williams et al., 2001).

Figura 1. Secrecin de estradiol, LH, FSH y patrn pulstil de LH en una muestra representativa de ovejas con infusin simulada (SHAM INFUSION) o tratadas con LPS (ENDOTOXIN). El tiempo (horas EE) desde el retiro del dispositivo intravaginal con progesterona (DIP) al pico ovulatorio de LH se muestra por la barra horizontal negra en el tope del cuadrante a y b. El inicio de la fase folicular fue sincronizado mediante el retiro del DIP. La infusin endotoxina (300 ng/Kg/h) y infusin simulada se extendi por 26 horas comenzando a las 12 horas de retirado el DIP. Los pulsos de LH fueron monitoreados por muestreo de la vena yugular a intervalos de 5 minutos al comienzo (1), mitad (2) y final (3) del perodo infusin. Crculos negros en el perfil de LH indican los pulsos de la hormona (Reproducido de Battaglia et al., 2000; con permiso).

Por otra parte, la presencia de LPS en la circulacin, activa el eje hipotlamo-hipfisis-corteza adrenal (HHA). Este hecho aumenta la concentracin de la hormona liberadora de corticotropina (CRH) y vasopresina (AVP) en la sangre porta-hipofisiaria (Karsch et al., 2002; Dobson et al., 2003) y de ACTH y cortisol en la circulacin perifrica (Hockett et al., 2000; Karrow et al., 2010). El incremento de cortisol en respuesta al tratamiento con LPS reduce la concentracin plasmtica de estradiol y suprime la descarga ovulatoria de LH/FSH (Macfarlane et al., 2000). Las evidencias hacen suponer que la CRH pudiera inhibir la secrecin pulstil de GnRH y en consecuencia de LH, alterando el crecimiento folicular e impidiendo o retrasando la ovulacin, cuando las endotoxinas bacterianas alcanzan el hipotlamo (Ghuman et al., 2010); no obstante, la activacin del axis HHA durante la exposicin a LPS, pudiera tambin afectar la secrecin de LH

www.venezuelaganadera.com

Manejo de la Mastitis Bovina y Programas de Control Mecanismos causantes de infertilidad durante la mastitis bovina

/ 159

desde la hipfisis (Dobson & Smith, 2000). Todo lo anterior afectara que el folculo dominante no reciba un adecuado estmulo gonadotrpico para estimular una suficiente produccin de estradiol que induzca la descarga ovulatoria de LH/FSH. En su defecto se tendran folculos persistentes destinados a ovular ovocitos, que aunque pueden ser competentes para ser fecundados, producen embriones con atraso en su desarrollo que mueren antes de alcanzar el estado embrionario de 16 clulas (Ahmad et al., 1995). Efectos sobre el cuerpo lteo Luego de la ovulacin, el folculo colapsado experimenta cambios celulares y estructurales que lo convierten en una nueva estructura ovrica, el cuerpo lteo (CL). El CL sintetiza y secreta P4 con la finalidad de establecer las condiciones fisiolgicas uterinas que favorecen el desarrollo embrionario temprano, la implantacin, la placentacin, etc. No obstante, si la fecundacin del ovocito no ocurre, la secrecin uterina de PGF2a al final de diestro inicia la regresin luteal. La lutelisis es un proceso fisiolgico complejo y coordinado que involucra clulas luteales, endoteliales y del sistema inmune, que a travs de mecanismos autocrinos y paracrinos modulan los cambios endocrinos, vasculares y estructurales que conducen al cese funcional del CL (McCracken et al., 1999; Pate & Landis Keyes, 2001). Las citoquinas producidas durante la mastitis pueden afectar la integridad funcional del CL de dos formas. La primera, a travs del efecto estimulatorio de estos mediadores inflamatorios sobre la produccin de PGF2a y PGE2 por las clulas del endometrio uterino (Skarzynski et al., 2000) (ver Figura 2). La adicin de TNF-a o IL-1a y en menor magnitud de IL-1b estimularon la secrecin de PGF2a y PGE2 de las clulas del estroma endometrial cultivadas in vitro por 24 horas, y este efecto se reverti si al cultivo se le agreg un inhibidor de la fosfolipasa A2 o de la ciclooxigenasa 2 (Tanikawa et al., 2008), dos enzimas claves para la sntesis de prostaglandinas.
A B

Figura 2. Efecto de TNFa dependiente del tiempo de incubacin (horas; panel A) y de la dosis (nM; panel B) sobre la produccin de PGF2a por clulas endometriales bovinas in vitro. Todos los valores estn expresados como un porcentaje del valor basal del tratamiento control. Luego de 1 hora de preincubacin 20 a 30 mg de tejido endometrial fue expuesto a 0,6 nM de TNFa por 0,5, 1, 2 y 4 horas (panel A), o a 0, 0,06, 0,6 y 6 nM de TNFa por 4 horas (panel B). Letras diferentes indican diferencias significativas (P<0,01) (Tomado de Miyamoto et al., 2000 con permiso).

www.venezuelaganadera.com

160 / Fernando Perea Ganchou y Carlos Gonzlez Stagnaro Adicionalmente, TNF-a ejerci su efecto estimulatorio sobre la secrecin de PGF2 a endometrial mediante la induccin de xido ntrico (ON), que tambin parece estar involucrado en las cascada de eventos moleculares que conducen a la regresin del cuerpo lteo (Skarzynski et al., 2003). En el segundo caso, por el efecto inhibidor de las citoquinas sobre la funcin endocrina de las clulas luteales, y mediante el estmulo de la sntesis de PGF2a luteal (Townson & Pate, 1994). Se han identificado receptores de TNF-a en clulas endoteliales de CL (Okuda et al., 1999), as como en las clulas luteales grandes y pequeas (Friedman et al., 2000), aumentando su concentracin (P<0,05), luego de una dosis luteoltica de PGF2a (Friedman et al., 2000). Asimismo, luego de dos horas de inducida la luteolisis, la concentracin de ARNm para las citoquinas TNF-a, IFN-g e IL-1b en el tejido luteal bovino fue significativamente mayor que en el CL de las vacas testigo (Neuvians et al., 2004). Adems de inhibir la sntesis de P4 y de estimular la produccin de PGF2a luteal, TNF-a e INF-g redujeron la viabilidad celular e indujeron la apoptosis de las clulas luteales, en aproximadas 48 horas despus de ser expuestas a las citoquinas (Petroff et al., 2001). Tomadas en conjunto, las evidencias experimentales discutidas hacen suponer que durante la mastitis, las citoquinas producidas en la glndula mamaria y liberadas al torrente circulatorio, alcanzan el endometrio y estimulan la sntesis y secrecin de PGF2a uterina. Esta hormona llega al CL mediante su transferencia desde la vena tero-ovrica a la arteria uterina (Ginther, 1974). En el CL, la PGF2a uterina inicia el mecanismo de la lutelisis que involucra la afluencia y activacin de clulas del sistema inmune que secretan una variedad de citoquinas. Estas protenas producidas localmente junto con las provenientes de la glndula mamaria, suprimen la secrecin de P4, a la vez que estimulan la produccin de PGF2a por las clulas luteales grandes (Niswender et al., 2007). De esta manera, mediante un mecanismo de estimulacin recproca, la PGF2a, las citoquinas y otros mediadores moleculares de la luteolisis, causan la desaparicin funcional y estructural del CL, ocasionando la muerte embrionaria, y como consecuencia la ocurrencia de un ciclo estrual infrtil. Efectos sobre el ovocito y el embrin Durante la mastitis los LPS y PG bacterianos conjuntamente con las citoquinas liberadas por la glndula mamaria desencadenan el mecanismo de la fiebre y el incremento de la temperatura corporal sobre los valores normales. La hipertermia resultante causa estrs calrico (EC) que compromete la funcin reproductiva, pudiendo reducir la fertilidad hasta 25% por cada grado que aumente la temperatura rectal (Ulberg & Burfening, 1967). Un amplio cmulo de evidencias indica que el incremento de la temperatura corporal altera la dinmica folicular y luteal durante el ciclo estrual, y tiene efectos detrimentales sobre la viabilidad del ovocito y del embrin. Durante la hipertermia inducida artificialmente (Wilson et al., 1998), los folculos dominantes de vacas sometidas EC produjeron menos estradiol, cuya concentracin comenz a elevarse 4 das ms tarde que en los folculos de las vacas testigo; al mismo tiempo, alter el mecanismo de lutelisis y retras su inicio en 9 das. Adems, el EC aument la concentracin de P4 en el fluido folicular y alter la

www.venezuelaganadera.com

Manejo de la Mastitis Bovina y Programas de Control Mecanismos causantes de infertilidad durante la mastitis bovina

/ 161

produccin de esteroides por las clulas de la granulosa y de la teca cultivadas in vitro (Roth et al., 2001; Bridges et al., 2005). Los embriones producidos por ovocitos expuestos a temperaturas por encima del rango normal fueron menos competentes para desarrollarse y alcanzar el estado de blastocito (Edwards & Hansen, 1996), debido probablemente a un acelerado proceso de maduracin (Edwards et al., 2005). Incluso, aunque algunos embriones provenientes de ovocitos expuestos a EC son capaces de desarrollar a estadios ms avanzados, y parecen ser morfolgicamente normales, su capacidad para continuar su desarrollo no fue similar a los embriones originados de ovocitos no sometidos a EC (Edwards et al., 2009). De igual forma, la exposicin de embriones bovinos a estrs trmico afect su desarrollo, con lo cual solo una menor proporcin de ellos fueron competentes para avanzar hacia estadios posteriores (Rivera & Hansen, 2001). Las citoquinas inflamatorias provenientes de la glndula mamaria que llegan al ovario durante el proestro, pueden afectar la integridad del ovocito y comprometer su competencia para alcanzar el estatus ovulatorio o para desarrollarse luego de la fecundacin; cuando su afluencia ocurre luego de una IA frtil, pueden reducir la viabilidad del embrin o causar su muerte. La maduracin in vitro de ovocitos bovinos en presencia de TNF-a o LPS no afect la tasa de segmentacin celular luego de la FIV, pero redujo el porcentaje de ovocitos que una vez fertilizados, alcanzaron el estado de blastocitos (Soto et al., 2003ab). Asimismo, los embriones con ms de 8 clulas expuestos a TNF-a tuvieron un porcentaje mayor de blatmeras que experimentaron apoptosis (Soto et al., 2003a). El efecto nocivo de los LPS y de ciertas citoquinas inflamatorias sobre la viabilidad del ovocito y embrin puede ocurrir a travs de otros mediadores moleculares generados durante la inflamacin. El ON es un radical libre altamente reactivo que afecta diversos aspectos de la funcin reproductiva, como se mencion en prrafos anteriores. La exposicin de embriones bovinos a nitroprusiato de sodio, un donador de ON, disminuy significativamente la proporcin de ovocitos que se desarrollaron a blastocitos (Soto et al., 2003b; Viana et al., 2007). Por otra parte, la PGF2a, adems del efecto luteoltico descrito anteriormente, tiene un efecto embriotxico. La aplicacin diaria de PGF2a a vacas suplementadas con progesterona sinttica entre los das 5 y 8 del ciclo estrual retras el desarrollo de los embriones colectados el da 8 de la IA y redujo la cantidad de embriones con calidad para ser transferidos (Hockett et al., 2004). Asimismo, la PGF2a tuvo un efecto nocivo sobre los embriones bovinos producidos in vitro u obtenidos in vivo, ya que redujo la habilidad de los embriones de 16-32 clulas para progresar al estado de blastocito, momento en que aparentemente estos fueron ms susceptibles al efecto embriotxico de la PGF2a (Scenna et al., 2004).

CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Las evidencias experimentales descritas en este trabajo demuestran que la mastitis clnica o subclnica, a travs de los diversos mecanismos reseados en la Figura 3, afecta la fertilidad de las vacas lecheras, incrementando el nmero de inseminaciones por concepcin y los das vacos. Esto implica que adems de las prdidas econmicas causadas por la enfermedad, hay que considerar el valor econmico del atraso en conseguir las gestaciones y ms costosas debido al incremento en

www.venezuelaganadera.com

162 / Fernando Perea Ganchou y Carlos Gonzlez Stagnaro

Figura 3. Papel de las citoquinas y efectos de la inflamacin bacteriana de glndula mamaria sobre los componentes del eje reproductivo que trae como consecuencia la infertilidad y anestro. Las bacterias colonizan el tejido secretor mamario e inducen la afluencia de clulas de sistema inmune y una reaccin inflamatoria que involucra la secrecin de diversas citoquinas y otras biomolculas. Las citoquinas liberadas al torrente circulatorio (1) alcanzan varios tejidos clave del eje reproductivo. En el hipotlamo, las citoquinas inhiben la actividad de las neuronas productoras de GnRH (2), por lo cual la pulsatilidad de este pptido se altera, a la vez que la sensibilidad de la hipfisis a la GnRH se reduce (3). Como consecuencia, la frecuencia de los pulsos de LH es insuficiente para que el mecanismo de estimulacin recproca entre el estradiol folicular y la LH se establezca y para que el folculo dominante del proestro alcance el estatus ovulatorio. Como resultado la ovulacin no ocurre o se retrasa varios das. En el ovario y endometrio, las citoquinas estimulan la secrecin de PGF = luteal (4) y uterina (5), respectivamente, que inducen la regresin del cuerpo lteo (6), suprimiendo el soporte progestacional, que conjuntamente con el efecto embriotxico de la PGF = (7) causan la muerte del embrin. La citoquinas (8) y otros mediadores moleculares de la inflamacin, como el xido ntrico (9), ejercen un efecto nocivo directo sobre el ovocito y/o embrin que reducen su competencia para progresar al estado de blastocito. Asimismo, durante la mastitis, los LPS y PG bacterianos, conjuntamente con las citoquinas inflamatorias desencadenan el mecanismo de la fiebre. La hipertermia resultante (10) afecta las etapas iniciales de desarrollo embrionario, causando la muerte del embrin y la ocurrencia de un ciclo estrual infrtil.

www.venezuelaganadera.com

Manejo de la Mastitis Bovina y Programas de Control Mecanismos causantes de infertilidad durante la mastitis bovina

/ 163

el nmero de pajuelas de inseminacin por preez. Tomando como referencia el incremento de los das vacos en las vacas mestizas detectadas con mastitis antes de la primera IA en el estudio de Nava-Trujillo et al. (2010) y un valor de 2 dlares USA por cada da vaco adicional a partir del da 90 posparto (Perea et al., 2002), el costo adicional por atraso de la preez en las 177 vacas mestizas diagnosticadas con la enfermedad en esa operacin comercial, alcanzara la suma de 13.275,oo dlares (75 dlares/vaca 177 vacas). Esta cantidad representa slo el 46% de las prdidas econmicas totales debido a la mastitis, que si se anan a las prdidas que corresponden por la disminucin del volumen y calidad de la leche, descarte de animales, etc, que segn calcul Alonso Amelot (1982) variaba alrededor de 87 dlares por vaca/ao, elevara las prdidas a un valor total de 28.745,oo dlares USA.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Ahmad N, Schrick FN, Butcher RL, Inskeep EK. 1995. Effect of persistent follicles on early embryonic losses in beef cows. Biol Reprod 52:1129-1135. Alonso Amelot FR. 1982. Programas de control de mastitis subclnica bovina en la cuenca del Lago de Maracaibo. Su estrategia, resultados y economa. Rev Vet Venez. pp 11-93. Bannerman DD. 2009. Pathogen-dependent induction of cytokines and other soluble inflammatory mediators during intramammary infection of dairy cows. J Anim Sci 87 (Suppl 1):10-25. Bao B, Garverick HA. 1998. Expression of steroidogenic enzyme and gonadotropin receptor genes in bovine follicles during ovarian follicular waves: a review. J Anim Sci 76:1903-1921. Barker AR, Schrick FN, Lewis MJ, Dowlen HH, Oliver SP. 1998. Influence of clinical mastitis during early lactation on reproductive performance of Jersey cows. J Dairy Sci 81:1285-1290. Battaglia DF, Bowen JM, Krasa HB, Thrun LA, Vigui C, Karsch FJ. 1997. Endotoxin inhibits the reproductive neuroendocrine axis while stimulating adrenal steroids: a simultaneous view from hypophyseal portal and peripheral blood. Endocrinology 138: 4273-4281. Battaglia DF, Beaver AB, Harris TG, Tanhehco E, Vigui C, Karsch FJ. 1999. Endotoxin disrupts the estradiolinduced luteinizing hormone surge: interference with estradiol signal reading, not surge release. Endocrinology 140:24712479. Battaglia DF, Krasa HB, Padmanabhan V, Vigui C, Karsch FJ. 2000. Endocrine alterations that underlie endotoxin-induced disruption of the follicular phase in ewes. Biol Reprod 62:4553. Breuel KF, Lewis PE, Schrick FN, Lishman AW, Inskeep EK, Butcher RL. 1993. Factors affecting fertility in the postpartum cow: role of the oocyte and follicle in conception rate. Biol Reprod 48:655-661. Bridges PJ, Brusie MA, Fortune JE. 2005. Elevated temperature (heat stress) in vitro reduces androstenedione and estradiol and increases progesterone secretion by follicular cells from bovine dominant follicles. Dom Anim Endocr 29:508-522. Dobson H, Smith RF. 2000. What is stress, and how does it affect reproduction? Anim Reprod Sci 60-61:743-752.

www.venezuelaganadera.com

164 / Fernando Perea Ganchou y Carlos Gonzlez Stagnaro

Dobson H, Ghuman S, Prabhakar S, Smith R. 2003. A conceptual model of the influence of stress on female reproduction. Reprod 125:151-163. Edwards JL, Hansen PJ. 1996. Elevated temperature increases heat shock protein 70 synthesis in bovine two-cell embryos and compromises function of maturing oocytes. Biol Reprod 55 (2):341-346. Edwards JL, Saxton AM, Lawrence JL, Payton RR, Dunlap JR. 2005. Exposure to a physiologically relevant elevated temperature hastens in vitro maturation in bovine oocytes. J Dairy Sci 88:4326-4333. Edwards JL, Bogart AN, Rispoli LA, Saxton AM, Schrick FN. 2009. Developmental competence of bovine embryos from heat-stressed ova. J Dairy Sci 92:563-570. Friedman A, Weiss S, Levy N, Meidan R. 2000. Role of tumor necrosis factor alpha and its type I receptor in luteal regression: induction of programmed cell death in bovine corpus luteum-derived endothelial cells. Biol Reprod 63:1905-1912. Ghuman SP, Morris R, Spiller DG, Smith RF, Dobson H. 2010. Integration between different hypothalamic nuclei involved in stress and GnRH secretion in the ewe. Reprod Dom Anim 45(6):1065-1073. Ginther OJ, Del Campo CH. 1974. Vascular anatomy of the uterus and ovaries and the unilateral luteolytic effect of the uterus: Cattle. Am J Vet Res 35:193-203. Hansen PJ, Soto P, Natzke RP. 2004. Mastitis and fertility in cattle - possible involvement of inflammation or immune activation in embryonic mortality. Am J Reprod Immunol 51:294-301. Hockett ME, Hopkins FM, Lewis MJ, Saxton AM, Dowlen HH, Oliver SP, Schrick FN. 2000. Endocrine profiles of dairy cows following experimentally induced clinical mastitis during early lactation. Anim Reprod Sci 58:241-251. Hockett ME, Rohrbach NR, Schrick FN. 2004. Alterations in embryo development in progestogen-supplemented cows administered prostaglandin F2alpha. Prostaglandins Other Lipid Mediat 73:227-236. Hockett ME, Almeida RA, Rohrbach NR, Oliver SP, Dowlen HH, Schrick FN. 2005. Effects of induced clinical mastitis during preovulation on endocrine and follicular function. J Dairy Sci 88:2422-2431. Hogeveen H, Huijps K, Lam T. JGM. 2011. Economic aspects of mastitis: new developments. New Zealand Vet J 59:16-23. Kaneko H, Todoroki J, Noguchi J, Kikuchi K, Mizoshita K, Kubota C, Yamakuchi H. 2002. Perturbation of estradiol-feedback control of luteinizing hormone secretion by immunoneutralization induces development of follicular cysts in cattle. Biol Reprod 67:1840-1845. Karrow NA, You Q, McNicoll C, Hay J. 2010. Activation of the ovine hypothalamic-pituitary-adrenal axis and febrile response by interleukin-6: a comparative study with bacterial lipopolysaccharide endotoxin. Can J Vet Res 74:30-33. Karsch FJ. 1987. Central actions of ovarian steroids in the feedback regulation of pulsatile secretion of luteinizing hormone. Ann Rev Physiol 49:365-382. Karsch FJ, Battaglia DF, Breen KM, Debus N, Harris TG. 2002. Mechanisms for ovarian cycle disruption by immune/inflammatory stress. Stress 5:101-112. Lavon Y, Leitner G, Goshen T, Braw-Tal R, Jacoby S, Wolfenson D. 2008. Exposure to endotoxin during estrus alters the timing of ovulation and hormonal concentrations in cows. Theriogenology 70:956-967.

www.venezuelaganadera.com

Manejo de la Mastitis Bovina y Programas de Control Mecanismos causantes de infertilidad durante la mastitis bovina

/ 165

Lavon Y, Leitner G, Voet H, Wolfenson D. 2010. Naturally occurring mastitis effects on timing of ovulation, steroid and gonadotrophic hormone concentrations, and follicular and luteal growth in cows. J Dairy Sci 93:911-921. Lavon Y, Leitner G, Klipper E, Moallem U, Meidan R, Wolfenson D. 2011. Subclinical, chronic intramammary infection lowers steroid concentrations and gene expression in bovine preovulatory follicles. Dom Anim Endocr 40:98-109. Macfarlane MS, Breen KM, Sakurai H, Adams BM, Adams TE. 2000. Effect of duration of infusion of stress-like concentrations of cortisol on follicular development and the preovulatory surge of LH in sheep. Anim Reprod Sci 63:167-175. McCracken J, Custer EE, Lamsa JC. 1999. Luteolysis: a neuroendocrine-mediated event. Physiol Rev 70:263-324. Mihm M, Baguisi A, Boland MP, Roche JF. 1994. Association between the duration of dominance of the ovulatory follicle and pregnancy rate in beef heifers. J Reprod Fertil 102:123-130. Miyamoto Y, Skarzynski DJ, Okuda K. 2000. Is tumor necrosis factor alpha a trigger for the initiation of endometrial prostaglandin F(2alpha) release at luteolysis in cattle? Biol Reprod 62:1109-1115. Moore DA, Cullor JS, Bondurant RH, Sischo WM. 1991. Preliminary field evidence for the association of clinical mastitis with altered interestrus intervals in dairy cattle. Theriogenology 36:257-265. Nava-Trujillo H, Soto-Belloso E, Hoet AE. 2010. Effects of clinical mastitis from calving to first service on reproductive performance in dual-purpose cows. Anim Reprod Sci 121:12-6. Neuvians TP, Schams D, Berisha B, Pfaffl MW. 2004. Involvement of pro-inflammatory cytokines, mediators of inflammation, and basic fibroblast growth factor in prostaglandin F2alpha-induced luteolysis in bovine corpus luteum. Biol Reprod 70:473-480. Niswender GD, Davis TL, Griffith RJ, Bogan RL, Monser K, Bott RC, Bruemmer JE, Nett TM. 2007. Judge, jury and executioner: the auto-regulation of luteal function. Soc Reprod Fertil Suppl 64:191-206. Okuda K, Sakumoto R, Uenoyama Y, Berisha B, Miyamoto A, Schams D. 1999. Tumor necrosis factor alpha receptors in microvascular endothelial cells from bovine corpus luteum. Biol Reprod 61:1017-1022. Pate JL, Landis Keyes P. 2001. Immune cells in the corpus luteum: friends or foes? Reproduction 122:665-676. Perea F, Soto E, Gonzlez C. 2002. Das vacos y produccin de leche en vacas mestizas. En: Avances en la Ganadera Mestiza de Doble Propsito. C Gonzlez-Stagnaro, E Soto-Belloso, I Ramrez-Iglesia (eds). Fundacin GIRARZ. Ediciones Astro Data S.A. Maracaibo, Venezuela, pp 401-425. Perea F, Soto E, Gonzlez C, Soto G, Hernndez H, 2005. Factors affecting fertility according to the postpartum period in crossbred dual-purpose suckling cows in the tropics. Trop Anim Health Prod 37:559-572. Perea F, Inskeep EK. 2008. Infertility associated with the duration of luteal phase in postpartum cows. Arch Latinoam Prod Anim 16 (3):187-198. Perea F, Gonzlez S, C. 2010. Fertilidad en la vaca postparto. En: Portillo Martnez G (ed). Manejo Reproductivo de la Vaca Postparto. Cuadernos Cientficos GIRARZ 7. Fundacin GIRARZ. Ediciones Astro Data S.A. pp 189-203.

www.venezuelaganadera.com

166 / Fernando Perea Ganchou y Carlos Gonzlez Stagnaro

Petroff MG, Petroff BK, Pate JL. 2001. Mechanisms of cytokine-induced death of cultured bovine luteal cells. Reproduction 121:753-760. Pinedo PJ, Melendez P, Villagomez-Cortes JA, Risco CA. 2009. Effect of high somatic cell counts on reproductive performance of Chilean dairy cattle. J Dairy Sci 92:1575-1580. Rainard P, Riollet C. 2006. Innate immunity of the bovine mammary gland. Vet Res 37:369-400. Risco CA, Donovan GA, Hernandez J. 1999. Clinical mastitis associated with abortion in dairy cows. J Dairy Sci 82:1684-1689. Rivera RM, Hansen PJ. 2001. Development of cultured bovine embryos after exposure to high temperatures in the physiological range. Reproduction 121(1):107-115. Roth Z, Meidan R, Shaham-Albalancy A, Braw-Tal R, Wolfenson D. 2001. Delayed effect of heat stress on steroid production in medium-sized and preovulatory bovine follicles. Reproduction 121(5):745-751. Savio JD, Thatcher WW, Morris GR, Entwistle K, Drost M, Mattiacci MR. 1993. Effects of induction of low plasma progesterone concentrations with a progesterone-releasing intravaginal device on follicular turnover and fertility in cattle. J Reprod Fertil 98:77-84. Scenna FN, Edwards JL, Rohrbach NR, Hockett ME, Saxton AM, Schrick FN. 2004. Detrimental effects of prostaglandin F2alpha on preimplantation bovine embryos. Prostaglandins Other Lipid Mediat 73:215-226. Schrick FN, Hockett ME, Saxton AM, Lewis MJ, Dowlen HH, Oliver SP. 2001. Influence of subclinical mastitis during early lactation on reproductive parameters. J Dairy Sci 84:1407-1412. Skarzynski DJ, Miyamoto Y, Okuda K. 2000. Production of prostaglandin F (2alpha) by cultured bovine endometrial cells in response to tumor necrosis factor alpha: cell type specificity and intracellular mechanisms. Biol Reprod 62:1116-1120. Skarzynski DJ, Jaroszewski JJ, Bah MM, Deptula KM, Barszczewska B, Gawronska B, Hansel W. 2003. Administration of a nitric oxide synthase inhibitor counteracts prostaglandin F2-induced luteolysis in cattle. Biol Reprod 68:1674-1681. Sordillo LM, Pighetti GM, Davis MR. 1995. Enhanced production of bovine tumor necrosis factor-alpha during the periparturient period. Vet Immunol Immunopath 49:263-270. Sordillo LM, Shafer-Weaver K, DeRosa D. 1997. Immunobiology of the mammary gland. J Dairy Sci 80:1851-1865. Sordillo LM, Contreras GA, Aitken SL. 2009. Metabolic factors affecting the inflammatory response of periparturient dairy cows. Anim Health Res Rev 10:53-63. Soto P, Natzke RP, Hansen PJ. 2003a. Actions of tumor necrosis factor-alpha on oocyte maturation and embryonic development in cattle. Am J Reprod Immunol 50:380-388. Soto P, Natzke RP, Hansen PJ. 2003b. Identification of possible mediators of embryonic mortality caused by mastitis: actions of lipopolysaccharide, prostaglandin F2alpha, and the nitric oxide generator, sodium nitroprusside dihydrate, on oocyte maturation and embryonic development in cattle. Am J Reprod Immunol 50:263-272.

www.venezuelaganadera.com

Manejo de la Mastitis Bovina y Programas de Control Mecanismos causantes de infertilidad durante la mastitis bovina

/ 167

Stock AE, Fortune JE. 1993. Ovarian follicular dominance in cattle: relationship between prolonged growth of the ovulatory follicle and endocrine parameters. Endocrinology 132:1108-1114. Suzuki C, Yoshioka K, Iwamura S, Hirose H. 2001. Endotoxin induces delayed ovulation following endocrine aberration during the proestrous phase in Holstein heifers. Dom Anim Endocrin 20:267-278. Tanikawa M, Lee HY, Watanabe K, Majewska M, Skarzynski DJ, Park SB, Lee DS, Park CK, Acosta TJ, Okuda K. 2008. Regulation of prostaglandin biosynthesis by interleukin-1 in cultured bovine endometrial cells. J Endocrinol 199:425-434. Townson DH, Pate JL. 1994. Regulation of prostaglandin synthesis by interleukin-1 beta in cultured bovine luteal cells. Biol Reprod 51:480-485. Ulberg LC, Burfening PJ. 1967. Embryo death resulting from adverse environment on spermatozoa or ova. J Anim Sci 26:571577. Williams, CY, Harris, TG, Battaglia, DF, Viguie, C, Karsch, FJ. 2001. Endotoxin inhibits pituitary responsiveness to gonadotropin-releasing hormone. Endocrinology 142:1915-1922. Williams EJ, Sibley K, Miller AN, Lane EA, Fishwick J, Nash DM, Herath S, England GC, Dobson H, Sheldon IM. 2008. The effect of Escherichia coli lipopolysaccharide and tumor necrosis factor alpha on ovarian function. Am J Reprod Immunol 60:462-473. Wilson SJ, Marion RS, Spain JN, Spiers DE, Keisler DH, Lucy MC. 1998. Effects of controlled heat stress on ovarian function of dairy cattle. 1. Lactating cows. J Dairy Sci 81(8):2124-2131.

www.venezuelaganadera.com