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cas del IPN, el Hospital de Especialidades del Centro Mdico Nacional Siglo XXI del IMSS, el servicio de dermatologa del Hospital General de Mxico de la SSA, el Instituto Dermatolgico de Jalisco de la SSA; el Hospital Universitario de la Facultad de Medicina de la UANL, el Centro Dermatolgico de Yucatn, entre otras. El objetivo principal de estos simposios es que los profesionistas y estudiantes con inters en los actinomicetos cuenten con un foro para comunicar sus conocimientos y experiencias en la investigacin; adems de propiciar un intercambio de colaboracin entre las instituciones para fortalecer los proyectos de trabajo. Ambos objetivos se han cumplido satisfactoriamente, puesto que el resultado son investigaciones ms slidas y con un mayor impacto acadmico. El laboratorio de micologa mdica, del departamento de microbiologa y parasitologa de la Facultad de Medicina de la UNAM, ha participado en todas las reuniones y comparte el inters en el desarrollo de estas reuniones con el laboratorio de inmunopotenciadores del departamento de sistemas biolgicos de la UAM-Xochimilco. Criterios diagnsticos en actinomicosis maxilofacial Javier Araiza, Rosa Margarita Mndez Alvarado, Alejandro Bonifaz Departamento de micologa mdica, Hospital General de Mxico, OD. La actinomicosis es una enfermedad de evolucin crnica producida por un grupo de actinomicetos anaerobios o microerfilos (principalmente Actinomyces israelii), que forman parte de la microbiota normal de las distintas cavidades del organismo del hombre y los animales. Las lesiones generadas se caracterizan por ndulos con trayectos fistulosos de los que drena material seropurulento copioso con abundantes leucocitos y parsitos de los agentes etiolgicos; suelen ser granos blanco-amarillentos, multilobulados, de consistencia blanda, formados por numerosos filamentos microsifonados. Los factores de inmunocompromiso, aunque no es un criterio excluyente, como los procesos quirrgicos previos, las lesiones por cuerpos extraos (en la regin cervicovaginal por el dispositivo intrauterino) o los tratamientos cariodentales crnicos son antecedentes para sufrir actinomicosis. La forma clnica que se manifiesta con Dermatologa Rev Mex
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Segundo Simposio de Actinomicetos. 24 y 25 de octubre del 2002 Presentacin Rubn Lpez Martnez,* Laura E. Castrilln Rivera,** Alejandro Palma Ramos** *Departamento de microbiologa y parasitologa, Facultad de Medicina, UNAM. **Departamento de sistemas biolgicos, Laboratorio de inmunopotenciadores, Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco. Si se considera que en el orden de los actinomicetales se agrupa un gran nmero de organismos patgenos para el hombre, es un acierto interesante la iniciativa del Laboratorio de inmunopotenciadores, del departamento de sistemas biolgicos de la UAM-Xochimilco, organizar cinco reuniones sobre los avances en la investigacin del Actinomadura madurae y dos simposios de actinomicetos. Estas dos ltimas reuniones responden al gran inters de un amplio nmero de mdicos, miclogos, dermatlogos e investigadores de las diversas instituciones de salud sobre los organismos patgenos de este grupo. Es un hecho que en nuestro pas los micetomas, las actinomicosis, la nocardiosis, la tuberculosis y la lepra son enfermedades consideradas como infecciones recurrentes y que, lejos de disminuir su frecuencia, constituyen un problema creciente de salud pblica. La convocatoria para este Segundo Simposio dada a conocer por los organizadores, la Dra. Laura E. Castrilln y el MC Alejandro Palma Ramos, tuvo una respuesta muy significativa, ya que se cont con la asistencia de un considerable nmero de ponentes de diversas instituciones, como el departamento de sistemas biolgicos de la UAMXochimilco, la Facultad de Medicina de la UNAM, la seccin de micologa del departamento de dermatologa del Hospital General Dr. Manuel Gea Gonzlez, el Centro Dermatolgico Pascua, la Escuela Nacional de Ciencias Biolgi-

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mayor frecuencia es la cervicofacial, que afecta el cuello y los maxilares de forma unilateral. El diagnstico completo y preciso de la enfermedad tiene algunas dificultades, los aspectos clnicos son de mucha utilidad; sin embargo, la comprobacin de su naturaleza requiere un manejo adecuado de las muestras obtenidas. El examen directo, los cultivos, los estudios histolgicos, la imagenologa y las pruebas inmunolgicas son las pruebas ms comunes. En el examen directo se toma la muestra de una fstula con drenaje del material purulento, se hace presin en la base de los ndulos fistulosos. Se buscan las formas parasitarias, nomotcnicamente denominados grnulos de azufre. El material se coloca con una gota de SSI o lugol en un portaobjetos y se observa al microscopio seco dbil y seco fuerte; disgregando y fijando uno de los granos obtenidos. Es posible hacer tincin de Ziehl-Neelsen para ver su carcter de no AAR y apreciar mejor las estructuras microsifonadas que integran los granos. Cultivos: Deben realizarse en medios para aislamiento de microorganismos anaerobios, en la medida de lo posible hay que lavar antes las muestras con un poco de SSI estril para eliminar la mayor cantidad posible de los microorganismos contaminantes ya que pueden, incluso, inhibir el desarrollo de las colonias de Actinomyces; los medios ms usados son gelosa de Brewer, agar vertical de Emmons, tioglicolato de sodio o BHI agar; los microorganismos se identifican con tinciones de ZiehlNeelsen y pruebas bioqumicas y fisiolgicas, como la fermentacin de los diversos carbohidratos, reduccin de nitratos y pruebas de hidrlisis. Estudios histolgicos: Las biopsias se toman profundas, deben incluir tejido celular subcutneo, de preferencia de un ndulo fistuloso no abierto, las tinciones de HE y PAS son las ms tiles y permiten apreciar un infiltrado crnico compuesto por neutrfilos y clulas gigantes con reaccin al cuerpo extrao; si las lesiones son crnicas habr fibrosis, en los granos se observan basfilos o ambfilos inclusive, multilobulados y microsifonados con clavas abundantes. Imagenologa: En los rayos X se observa osteoartritis maxilotemporal, espondiloartritis, lesiones apicales dentarias, lesiones osteolticas, quistes y geodos; las fistulografas indican el grado de avance de las lesiones y la ubicacin de su centro; tambin la tomografa axial computada es til y tiene los mismos fines que las pruebas radiolgicas. Pruebas inmunolgicas: el inmunoensayo y la inmunofluorescencia son las ms ventajosas, mientras que la determinacin de precipitinas, aglutininas y fijacin del complemento son Dermatologa Rev Mex
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inespecficas. Los tratamientos habituales incluyen penicilina procanica a dosis de 800,000 U hasta la remisin o bien penicilina benzatnica 1,200,000 U durante ocho das hasta completar de 50 a 120 millones, seguidos de penicilina sdica cristalina por va intravenosa, 10 a 12 millones al da durante 20 a 45 das. Los pacientes con reacciones adversas a la penicilina pueden recibir sulfametoxazol-trimetoprim 80/400 mg dos veces al da hasta la curacin. Conclusiones el Conclusiones: diagnstico de la actinomicosis cervicofacial desde el inicio es til para establecer la teraputica adecuada por lo prolongado de los tratamientos; sin embargo, la toma de la muestra y la identificacin etiolgica correctas requieren un adiestramiento apropiado que permita seleccionar las mejores pruebas diagnsticas. Cuantificacin de la activacin in vitro de los leucocitos polimorfonucleares en humanos estimulados por Actinomadura madurae y otros agentes Gilberto Casillas Petriz, Marcos Mendoza Meja, Alejandro Palma Ramos, Laura E. Castrilln Rivera Laboratorio de inmunopotenciadores, departamento de sistemas biolgicos, Universidad Autnoma MetropolitanaXochimilco. Introduccin: Introduccin una de las manifestaciones clnicas del micetoma son los granos constituidos por acumulaciones de bacterias rodeados de leucocitos polimorfonucleares, que forman una corona que, a su vez, est rodeada por eosinfilos dispuestos en forma radial (clavas) y externamente por macrfagos. Puesto que los polimorfonucleares producen una de las primeras respuestas del sistema inmunolgico durante la infeccin del micetoma, se necesita conocer su grado de activacin cuantificada en su naturaleza inespecfica (reduccin del NBT) y en su papel de clulas accesorias de la respuesta especfica, por la va de produccin de citocinas, como la interleucina 1-beta (IL-1). Objetivo: Objetivo evaluar la activacin de los polimorfonucleares durante su exposicin in vitro a A. madurae y otros microorganismos. Metodologa: Metodologa los leucocitos polimorfonucleares humanos, obtenidos de la sangre venosa de donadores sanos, se purificaron por centrifugacin en gradiente de densidad con Polymorphoprep y se cultivaron en medio RPMI 1640, suplementado con suero fetal de ternera, durante ocho horas

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continuas para producir citocinas y durante 40 minutos para la reduccin de NBT. Los microorganismos que se utilizaron como activadores fueron: Actinomadura madurae ATCC 19425, Nocardia asteroides y Nocardia brasiliensis (ambas aisladas de algunos de los pacientes del Centro Dermatolgico Pascua, SSA), Candida albicans ATCC 10231, Staphylococcus aureus ATCC 6538 y Escherichia coli proporcionada por los ceparios de la UAM Xochimilco. Las concentraciones de la suspensin para cada activador, en la produccin de citocinas, se ajustaron para tener diez clulas activadoras por cada polimorfonuclear cultivado. Para la reduccin de NBT la concentracin se ajust al tubo nm. 1 del nefelmetro de McFarland (3108 ufc/mL). La cuantificacin de citocinas se hizo con la tcnica de ELISA y la reduccin de NBT por microscopia ptica y espectrofotometra de luz visible. Resultados: Resultados la activacin de los leucocitos polimorfonucleares se favorece con C. albicans y fue el mejor activador de los probados. A. madurae y N. asteroides tambin generan una activacin de los polimorfonucleares, aunque menor que con la levadura. Es interesante que la activacin de los neutrfilos con A. madurae y N. asteroides disminuya porque eso podra estar implicado con la condicin crnica de la infeccin conocida como micetoma. Epidemiologa del micetoma de 1977 depar partamento al 2002 en el de par tamento de matolo tologa General der ma tolo ga del Hospital Gener al Dr. Manuel Gonzlez Dr. Man uel Gea Gonzle z Dora Molina de Soschin, Roberto Arenas Guzmn Seccin de micologa, departamento de dermatologa, Hospital General Dr. Manuel Gea Gonzlez. El micetoma es una enfermedad crnica inflamatoria producida por actinomicetos aerobios (actinomicetoma) o por hongos verdaderos (eumicetoma). El objetivo de este trabajo fue estudiar la epidemiologa de los casos diagnosticados como micetoma en el servicio de dermatologa del Hospital General Dr. Manuel Gea Gonzlez, desde junio de 1977 hasta junio del 2002. Fue un estudio retrospectivo, longitudinal y descriptivo. La informacin se recopil de los archivos de los servicios de dermatologa y micologa (1977-2002). Se encontraron 70 pacientes con diagnstico comprobado de micetoma por histopatologa y/o examen micolgico directo y por cultivo. La incidencia acumulada entre los aos 1990 y 2002 fue de

0.14%; sin embargo, la frecuencia para el ao 2000 fue de 0.5%. El 74.3% de los pacientes correspondi al sexo masculino y 25.7%, al femenino. Las edades fluctuaron entre los 13 y 80 aos. El grupo de edad ms afectado fue de los 21 a los 30 aos con 30% de los casos. El 45.7% de los pacientes fueron menores de 40 aos. El 42.8% procedan de los estados de Guerrero y Morelos y 41.5% eran campesinos. La afeccin de los miembros inferiores ocurri en 60.5% de los casos y la ocasion el actinomiceto, mientras que 15.1% la causaron hongos verdaderos. La evolucin fue entre uno y cinco aos para 47.1% de la poblacin. Se considera que a pesar de no ser una enfermedad frecuente, el tiempo para hacer el diagnstico, el grupo de poblacin afectado y la localizacin de las lesiones son causas de gran morbilidad. La educacin de los mdicos en las reas de mayor incidencia y el establecimiento de las ayudas diagnsticas ms adecuadas son elementos necesarios para evitar las secuelas de esta enfermedad. Estudio de la proliferacin de Actinomadura madurae posinfeccin in vitro en macrfagos murinos Mirna G. Encinas Parra, Alejandro Palma Ramos, Laura E. Castrilln Rivera Departamento de sistemas biolgicos, Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco. Introduccin: Introduccin el micetoma es una infeccin crnica de la piel, del tejido subyacente y en casos graves afecta el hueso. Se caracteriza por el aumento en el volumen de los tejidos debido a la inflamacin y las fstulas que drenan material seropurulento y granos. Los agentes causantes pueden ser las bacterias aerobias: actinomicetos u hongos verdaderos (eumicetos). El Actinomadura madurae es uno de los agentes que pueden causar el micetoma. En las infecciones por actinomicetos se ha evaluado el papel de los fagocitos mononucleares durante la infeccin bacteriana, y representan un hbitat esencial para estos patgenos, tradicionalmente los fagocitos son los principales efectores de defensa del husped. Se han descrito diferentes medios que permiten este fenmeno de invasin, como son: la invasin de fagocitos no profesionales, la evasin dentro del compartimiento citoplasmtico, la interferencia con la generacin de intermediarios reactivos del oxgeno, la inhibicin de la formacin del fago-lisosoma, la neutralizacin del pH fagosomal, la resistencia a las enzimas lisosomales y la induccin de Dermatologa Rev Mex
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protenas de choque trmico, por lo que los microorganismos deben resistir a estas actividades microbicidas para crecer en el interior del husped. general: Objetivo general determinar la existencia y proliferacin del Actinomadura madurae posinfeccin in vitro en macrfagos murinos. Metodologa: Metodologa para obtener los macrfagos peritoneales se realiz un lavado peritoneal a ratones CFW y se mantuvo en medio RPMI suplementado con 10% de suero fetal de ternera. Despus se hizo el proceso de infeccin in vitro adicionando Actinomadura madurae e incubndolo durante una hora y se realiz un conteo de clulas viables por la tincin de azul de tripano. Para la prueba de activacin celular se utiliz la tcnica de NBT, adems, se realiz una cuantificacin bacteriana con la tcnica de vaciado en placa a diferentes das de cultivo. Y para observar la existencia de las bacterias dentro de los macrfagos se hizo un marcaje con anticuerpos fluorescentes. Resultados: Resultados en cuanto a la prueba de viabilidad celular, las clulas infectadas se afectan significativamente despus de 24 horas posinfeccin. En el ensayo de activacin de macrfagos infectados el porcentaje de activacin oscila entre 74 y 65% a una hora posinfeccin y el porcentaje de fagocitosis fluctu entre 75 y 81%. La cuantificacin del Actinomadura madurae de clulas infectadas no fue posible por el elevado nmero de bacterias y el tipo de crecimiento. En cuanto a la tcnica de inmunofluorescencia indirecta se demostr la existencia de la bacteria dentro de los macrfagos. Conclusin: Conclusin los macrfagos peritoneales de los murinos son capaces de fagocitar en un alto porcentaje a la bacteria; sin embargo, no todas las clulas fagocticas son capaces de destruirla. Estudio epidemiolgico del micetoma en Mxico R. Lpez Martnez,* LJ Mndez Tovar,** A. Bonifaz,*** R. Arenas,**** J. Mayorga,1 O. Welsh,2 N. Eljure,3 P. Lavalle,4 A. Saul,4 E. Macotela-Ruiz5 * Facultad de medicina, UNAM. ** Hospital de Especialidades, Centro Mdico Nacional Siglo XXI, IMSS. ***Hospital General de Mxico, SSA, ****Hospital General Dr. Manuel Gea Gonzlez, SSA. 1 Instituto Dermatolgico de Jalisco, SSA 2 Hospital Universitario, Facultad de Medicina, UANL. 3 Centro Dermatolgico de Yucatn. Dermatologa Rev Mex
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Centro Dermatolgico Pascua, SSA. Centro de Salud Rural y Dermatologa Tropical, Santiago Yancutlalpan, Pue., SSA. El micetoma (actinomictico y eumictico) es una infeccin de trascendencia clnica por su invasividad, cronicidad y problemas teraputicos, as como por afectar principalmente a la poblacin rural econmicamente activa. Para conocer la frecuencia y magnitud del problema en Mxico se realiz un estudio multicntrico, tomando los datos de edad, sexo, ocupacin, distribucin geogrfica, regin corporal afectada, tipo de micetoma y agentes etiolgicos. Se analizaron 2,543 casos procedentes de 24 estados de la Repblica Mexicana, de los cuales 72.5% correspondieron al sexo masculino y 24.8% al femenino. La edad oscil entre los 0 y los 80 aos, la mayor frecuencia se observ entre los 16 y 50 aos (59%). La ocupacin ms comn fue la de campesino (38.14%) y ama de casa (15.10%). Los estados donde se registr la mayor incidencia fueron: Jalisco, 485; Nuevo Len, 205; Morelos, 168 y San Luis Potos, 160. Las extremidades inferiores fueron las ms afectadas (59.60%), seguidas por el tronco (20%). El actinomicetoma predomin sobre el eumicetoma con una frecuencia de 98.5% para el primero y 1.5% para el segundo. Se observ Nocardia brasiliensis en 61.02%, seguido de Actinomadura madurae en 8.12%. De los agentes de eumicetoma los ms comunes fueron Madurella grisea, 31.57%; M. mycetomatis, 22.8% y Scedosporium apoiospermum, 8.77%. La distribucin por sexos de N. brasiliensis fue de 69.5% en hombres y 30.5% en mujeres; en tanto A. madurae fue muy similar en ambos, con 47.5% en hombres y 52.5% en mujeres. Por lo anterior se considera que el micetoma es un problema de salud importante en Mxico y requiere ms investigacin y mayor atencin para disminuir su frecuencia y evitar complicaciones. Estudio de la activacin de clulas polimorfonucleares infectadas con Actinomadura madurae cuantificando IL-1 la expresin de la IL-1 Marcos Mendoza Meja, Alejandro Palma Ramos, Laura E. Castrilln Rivera, Gilberto Casillas Ptriz Laboratorio de inmunopotenciadores, departamento de sistemas biolgicos, Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco.

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El actinomicetoma es una infeccin localizada, crnica, progresiva y destructiva de la piel y el tejido subcutneo que termina por daar el hueso. Esta enfermedad la causan varios gneros de actinomicetos aerobios: Actinomadura madurae, Actinomadura pelletieri, Nocardia brasiliensis, Nocardia asteroides, Nocardia otitidiscaviarum y Streptomyces somaliensis, y con menos frecuencia N. farcinica y Nocardiopsis dassonvillei. La distribucin de los agentes causales es mundial, pero el padecimiento es un problema sanitario de los pases tropicales y subtropicales. Es endmico en localidades situadas en las latitudes de 15 S, 30 N, como India, Mxico, Senegal, Somalia, Sudn y Amrica Central y del Sur. Por el carcter granulomatoso e inflamatorio del micetoma, la respuesta inmunolgica inespecfica tiene un papel muy importante en la evolucin de la infeccin, en particular, la participacin de las clulas fagocticas. Como resultado de la activacin de la clula polimorfonuclear destaca la produccin de monocinas, sustancias que favorecen la respuesta inflamatoria, una de estas molculas es la IL-1 que amplifica la respuesta inmunitaria como producto de estmulos exgenos; por lo tanto, la cuantificacin de esta molcula sirve como marcador de la activacin inmunitaria ante los procesos infecciosos. En el caso particular de las infecciones por actinomicetos, los estudios de los mecanismos moleculares que participan en la relacin husped-parsito describen infecciones por Nocardia y Mycobacterium; sin embargo, en el caso de Actinomadura no existen reportes relacionados con estos procesos, en consecuencia, el estudio de la expresin de IL-1 en estas infecciones permitir ofrecer elementos que pueden participar en la enfermedad provocada por este microorganismo. Objetivo general del proyecto: estudiar la activacin de las clulas polimorfonucleares humanas que fagocitan a A.madurae por la cuantificacin de IL-1 como citocina proinflamatoria. Objetivos especficos del proyecto: uso de la tcnica de RT-PCR para determinar el tiempo de expresin del gen de IL-1, en polimorfonucleares humanos estimulados con E. coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Actinomadura madurae, Nocardia brasiliensis y Nocardia asteroides. Cuantificar la concentracin de IL1 en medio de cultivo de polimorfonucleares humanos estimulados con los microorganismos citados, con el ensayo inmunoenzimtico de ELISA. Correlacionar los ni-

veles de expresin del gen de IL-1 con la protena secretada. Metodologa: Metodologa para la determinacin de las cinticas de expresin del gen (sntesis de RNAm) y produccin de IL1, se realizaron a partir de pools de clulas polimorfonucleares neutrfilas provenientes de la sangre venosa de individuos sanos (tres sujetos), que se estimularon con E. coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans, A.madurae, Nocardia asteroides y Nocardia brasiliensis durante ocho horas a 37o C en atmsfera de CO2 al 5%, en medio RPMI suplementado con suero de ternera al 10%, una concentracin de clulas de 1 106 PMN/mL de medio y a una proporcin de 10 microorganismos por polimorfonuclear. Las clulas polimorfonucleares neutrlfilas se mantuvieron en incubacin por periodos de ocho horas. Una vez transcurrida cada hora se centrifug el cultivo y se obtuvo el sobrenadante al cual se le cuantific por duplicado, con la tcnica de ELISA, la concentracin de IL-1. Para determinar el nivel de expresin del gen de IL-1 de las clulas polimorfonucleares neutrfilas provenientes de los cultivos en las condiciones descritas, se procedi a la extraccin de RNA total seguida de la amplificacin del producto purificado utilizando la tcnica de RT-PCR de un solo paso. Resultados: Resultados en todos los casos en que las clulas polimorfonucleares neutrfilas se expusieron a los diferentes microorganismos se observ la expresin del gen de IL1; sin embargo, dicha expresin tuvo patrones de tiempo e intensidad especficos para cada microorganismo activador utilizado. As, para E. coli la expresin se dio a las horas 1 y 6 posteriores al estmulo y por ELISA se detect la sntesis proteica a partir de la hora 4; con Staphylococcus aureus, la RT-PCR detect la expresin a las horas 2 y 4, sin que se detectara por ELISA la IL-1 en el sobrenadante, mientras que para Candida albicans la deteccin del RNAm se hizo a las horas 1 y 8, detectndose la sntesis de IL-1 a partir de la hora 1; para Actinomadura madurae, la expresin del gen se detect a las horas 2 y 4 y la sntesis de IL-1 desde la hora 1 con mximos de concentracin a las horas 3 y 8; a Nocardia asteroides slo se le detect la expresin de RNAm a la hora 7 y la sntesis de IL-1 desde la hora 3 con mximos de concentracin a partir de la hora 6. Por ltimo, para Nocardia brasiliensis se detect la expresin a las horas 3 y 5, y la sntesis de IL-1 a partir de la hora 2. Dermatologa Rev Mex
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Estudio de las poblaciones de linfocitos cooperadores en micetoma por Actinomadura madurae y en lepra lepromatosa nodular Ma. Eugenia Castro Mussot,* Laura Estela Castrilln Rivera,** Alejandro Palma Ramos,** Jos Fernando Flores Flores,** Teresa Izquierdo Snchez,** Ma. del Carmen Padilla Desgarennes*** *Departamento de inmunologa, Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional. **Departamento de sistemas biolgicos, Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco. ***Centro Dermatolgico Pascua. Introduccin: Introduccin en el presente trabajo se identificaron las poblaciones celulares de los linfocitos T en los cortes de biopsias de tres pacientes con diagnstico de actinomicetoma por A. madurae y un corte de biopsia de un paciente con diagnstico de lepra lepromatosa nodular (M. leprae). Metodologa: Metodologa las muestras se sometieron a un tratamiento con anticuerpos Anti-CD4+ y Anti-CD8+ marcados con fluorescena y rodamina cada uno, respectivamente. Resultados: Resultados en la inmunodeteccin con los anticuerpos Anti-CD4+ y Anti-CD8+ hay un mayor porcentaje de clulas con fenotipo CD8+ (clulas citotxicas) en comparacin con las clulas marcadas con Anti-CD4+ (clulas cooperadoras), en ambos tipos de enfermedad. Conclusin: Conclusin la principal subpoblacin de linfocitos en los micetomas por Actinomadura madurae son los CD8+ (linfocitos citolticos). Estudio del efecto inmunopotenciador del polisacrido (T L) de tamarindo ( Tamarindus indica L ) en ratones Balb/c infectados con Actinomadura madurae Carola Elizabeth Lpez Gonzlez, Teresa Izquierdo Snchez, Alejandro Palma Ramos, Laura E. Castrilln Rivera Departamento de sistemas biolgicos, Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco. Introduccin: Introduccin la infeccin por A. madurae (actinomicetoma) se distingue por hinchazn de la zona infectada y acumulaciones bacterianas o granos que llegan a degradar el hueso (geodos); por lo tanto, es importante desarrollar nuevas Dermatologa Rev Mex
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teraputicas que mejoren la calidad de la respuesta inmunitaria y ayuden a erradicar el microorganismo de los pacientes. El uso de inmunopotenciadores naturales, como es el caso del polisacrido extrado del Tamarindus indica L (PsP), se apoya en estudios recientes en los que se muestra el efecto estimulante en los macrfagos peritoneales de murinos. Objetivo: Objetivo evaluar el efecto inmunopotenciador del polisacrido de tamarindo en ratones hembra Balb/c infectados con A. madurae. Metodologa: Metodologa se utilizarn dos grupos de 30 ratones. El primero estar dividido en grupos de cinco murinos. A cada grupo se le inocular con 0.1 mL de una suspensin de A. madurae (solucin salina, 400 106 UFC, 1,200 106 UFC, 1,500 106 UFC, 1,800 106 UFC) por va intravenosa, se extraer el suero y se cuantificarn los anticuerpos por el mtodo de ELISA. Al segundo grupo (30 ratones) primero se les administrar el polisacrido de tamarindo a una concentracin de 100, 50 y 5 mg por gramo de peso, va parenteral, comparado con dos grupos a los que se les administrar -glucano en las mismas concentraciones que el polisacrido como testigo, se extraer el suero y se realizar la cuantificacin por ELISA. Se evaluar estadsticamente por anlisis de varianza. Estudio histoqumico comparativo entre los granos de micetomas por Actinomadura, Actinomadura , Nocardia y Madurella Floridalba Reyes Fuentes,* Laura E. Castrilln Rivera,* Carmen Padilla Desgarennes,** Alejandro Palma Ramos* *Departamento de sistemas biolgicos, Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco. **Laboratorio de micologa, Centro Dermatolgico Pascua. Introduccin: Introduccin los micetomas se dividen en dos grupos segn el agente causal; los producidos por hongos (eumicetomas) y los provocados por bacterias (actinomicetomas). Los gneros responsables de los actinomicetomas ms comunes en nuestro pas son Actinomadura y Nocardia y de los eumicetomas es el gnero Madurella. Estos microorganismos son saprfitos del suelo y causan infeccin cuando se introducen al organismo a travs de pequeas heridas, crecen lentamente y se forman los granos y el micetoma. Mariat determin en 1977 que en actinomicetomas por Actinomadura no haba cemento de unin; sin embargo,

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Palma, en 1998, mediante la tcnica de inmunoperoxidasa con anticuerpos especficos contra Actinomadura, demostr que las bacterias del grano no se marcan, lo cual indica la existencia de un cemento que mantiene unidas a las bacterias y no permite el acceso a los anticuerpos. En un trabajo posterior, Palma (1999), con tcnicas histoqumicas, estudi la naturaleza qumica del cemento de unin en el grano, y encontr que es un polisacrido cido sulfatado. Objetivo: Objetivo estudiar la naturaleza qumica y la existencia del cemento de unin en los granos extrados de pacientes con micetoma por Actinomadura, Nocardia y Madurella. Metodologa: Metodologa a los granos extrados se les incluy en parafina y se les realizaron las siguientes tcnicas histoqumicas: hematoxilina-eosina, cido peridico de Schiff (PAS), metenamina de plata y azul alciano. Resultados: Resultados en los granos de Actinomadura se corrobor la existencia del cemento constituido por un polisacrido cido sulfatado, tambin se demostr que en los granos de Nocardia, el cemento lo forma un polisacrido neutro y en el caso de los granos por Madurella, no existe cemento de unin. Discusin: Discusin el cemento de unin en los granos producidos por Actinomadura y Nocardia es diferente para cada caso, ya que en el primero es un polisacrido cido sulfatado y en el segundo es un polisacrido neutro. En los granos de Madurella no hay cemento de unin y las reacciones se observan en la superficie del microorganismo por la quitina que constituye la pared. Conclusin: Conclusin las mucinas encontradas en los granos en los cementos de unin de los actinomicetos las producen los microorganismos y no los tejidos del husped, como una posible respuesta primaria inespecfica. Identificacin de Actinomyces sp enfer en la enf er medad periodontal en pacientes de las clnicas estomatolgicas de la UAMXochimilco S Macn C,* D Hernndez,* L Castrilln R,* A Palma R,* I Ordez,* R Gonzlez,* M Snz A,** C Quirino B* * Divisin de ciencias biolgicas y de la salud, Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco. ** Facultad de Odontologa, Universidad Complutense de Madrid, Espaa. La enfermedad periodontal tiene una etiologa de carcter infeccioso que afecta al aparato de insercin del diente. Las

especies bacterianas implicadas en la colonizacin de la superficie dentaria en el surco gingival son distintas, lo que ocasiona una respuesta inflamatoria y sangrado (gingivitis). En fases ms avanzadas da lugar a la periodontitis que se distingue por la prdida de insercin epitelial y subsecuentemente por la destruccin del periodonto. Entre los agentes causales de la enfermedad que se encuentran en la placa dental figuran varios microorganismos anaerobios y facultativos, como los Actinomyces sp, que estimulan la respuesta inflamatoria de la enca, en particular el Actinomyces viscosus, que predomina en la gingivitis. En los pacientes de dos clnicas estomatolgicas de la UAM-Xochimilco, con diagnstico clnico de gingivitis y periodontitis, se obtuvieron muestras de la placa subgingival en la etapa preoperatoria del tratamiento clnico, para realizar una comparacin con las muestras de la fase posoperatoria. La recoleccin de las muestras de la boca de los pacientes se hizo con tiras estriles de papel, que se pesaron en Periotron, para despus depositarse previo a su anlisis, en tubos Eppendorf con RTF para su transporte. Las muestras se analizaron con tcnicas de identificacin morfolgica y pruebas bioqumicas para detectar y cuantificar la existencia de especies de Actinomyces y otras bacterias anaerobias. De una muestra preliminar de 22 pacientes, 4 con gingivitis y 18 con periodontitis, en 75% se identific el Actinomyces, en la primera, y 77.4% en la segunda; sin embargo, es necesario valorar los resultados microbiolgicos de la siguiente etapa del tratamiento clnico, para que junto con el anlisis de las caractersticas de la muestra, se conozca el papel que juegan estos microorganismos en ambas enfermedades. for L Obtencin de for mas L de Actinomadura madurae en macrfagos de murinos in vitro Erika Lizette Ramos Navarro, Alejandro Palma Ramos, Laura Castrilln Rivera Departamento de sistemas biolgicos, Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco. Introduccin: Introduccin por la importancia que tienen las formas L en la patogenia y cronicidad de las infecciones, y la falta de informacin sobre el papel que juegan, un aspecto interesante de analizar es el desarrollo de las formas L del Actinomadura madurae en las clulas fagocticas (macrfagos). Dermatologa Rev Mex
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Objetivo: Objetivo obtener formas L de Actinomadura madurae en macrfagos peritoneales de murinos in vitro. Metodologa: Metodologa se obtuvieron macrfagos por lavado peritoneal y se infectaron con Actinomadura madurae durante una hora, se lavaron y mantuvieron en medio de RPMI complementado durante tiempos diferentes. Una vez concluido el tiempo las clulas se colocaron en medio PPLO y de Sabouraud. Resultados: Resultados no se obtuvieron formas L en clulas lisadas mantenidas en PPLO. En el medio de Sabouraud slo la muestra del matraz testigo (con formas L) y uno de los tiempos no crecieron; para corroborar se sembraron estos dos en BHI y nicamente el testigo no creci. Discusin: Discusin hay formas L que pueden revertir a formas normales y ste puede ser el caso de la muestra problema, que se compara con el testigo que contena formas L. Perfiles de susceptibilidad al ketoconazol, fluconazol, anfotericina B y caspofungina de aislamientos de Candida procedentes de pacientes inmunocomprometidos MA Martnez Rivera,* C Jimnez Galicia,** A Ros Quiroz,** J Alba Flores** *Becario COFFA y EDD. **Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas. Instituto Politcnico Nacional. Antecedentes: Antecedentes los pacientes con compromiso inmunolgico con ms frecuencia tienen infecciones por levaduras oportunistas del gnero Candida. Las recidivas son continuas y la infeccin diseminada, por lo general es mortal. Los fracasos teraputicos con los antifngicos recomendados son comunes en las candidiasis mucocutneas y sistmicas. La resistencia de especies de Candida a azoles como: fluconazol y ketoconazol es un hecho cada vez ms documentado, en especial, en los aislamientos de pacientes multitratados. No obstante que la anfotericina B se considera el frmaco de oro en la terapia antifngica, tambin se describe la resistencia que adquiere en los tratamientos prolongados, principalmente para C. tropicalis, C. parapsilosis, C. guilliermondii, C. glabrata, C. krusei y C. lusitaniae. La caspofungina es un nuevo antifngico en fase III que inhibe la sntesis de (1-3)-D-glucanas, componente esencial de la pared fngica. Este medicamento es de aparicin reciente en el mercado, hecho que permite detecDermatologa Rev Mex
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tar cepas resistentes intrnsecamente, ya que no se ha aplicado como tratamiento en los cuadros clnicos de candidiasis; por lo tanto, la mayor parte de las especies de Candida no han estado en contacto con este frmaco. Metodologa: Metodologa cepas de referencia: Candida krusei ATCC6258, Candida parapsilosis ATCC 22019 y Candida albicans ATCC 10231 y 160 cepas de Candida procedentes de pacientes con candidiasis y SIDA, leucemia, trasplante renal y sepsis. La susceptibilidad a los antifngicos se determin mediante el mtodo M27-A NCCLS, modificado por EUCAST (micromtodo). Se utilizaron microplacas de 96 pozos, medio RPMI 1640 adicionado de glucosa al 2%, MOPS 0.165 M a pH 7.0. Las concentraciones de los frmacos probadas fueron 16 a 0.03 mcg/mL para ketoconazol, anfotericina B y caspofungina y de 128 a 0.025 mcg/mL para el fluconazol. El inculo de las cepas se obtuvo a partir de cultivos en fase logartmica de crecimiento (105 ufc/mL). Se incluyeron testigos de reactivos y de crecimiento celular. Se incubaron a 35o c/24 horas y el crecimiento se evalu por DO a 405 nm. La concentracin mnima inhibitoria se determin por la disminucin del 50% del crecimiento para ketoconazol y fluconazol, y la reduccin de 100% para anfotericina B y caspofungina, en comparacin con el testigo de crecimiento levaduriforme. Resultados: Resultados en este estudio los puntos de corte para considerar una cepa resistente fueron: para el ketoconazol y anfotericina B, concentracin mnima inhibitoria > 4 mcg/ mL; caspofungina > 1 mcg/mL y fluconazol > 64 mcg/mL. En el cuadro 1 se muestran los porcentajes de resistencia al ketoconazol. Para el fluconazol la resistencia observada fue de C. albicans 38%, C. glabrata 83%, C. tropicalis 94% y C. krusei 100%, mientras que la mayor parte de los aislamientos de C. parapsilosis fueron susceptibles (6/8). La resisCuadro 1. Porcentaje de resistencia de las especies de Candida al ketoconazol

Especie

CMI* en g/mL Nm. de aislamientos 0.03-2.0 4.0

87 6 15 7 3 1 26 12 2 1 0 0

Resistencia (%)

C. C. C. C. C. C.

albicans glabrata tropicalis parapsilosis krusei lusitaniae

23 66.7 11.8 12.5 0 0

*concentracin mnima inhibitoria.

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tencia global al fluconazol de todas las cepas aisladas se muestra en la figura 1. Para la anfotericina B, la concentracin mnima inhibitoria requerida fue < 1 mcg/mL para todos los aislamientos, por lo que no se detectaron cepas resistentes y, por ltimo, para la caspofungina, casi todos los aislamientos (146/160) mostraron una concentracin mnima inhibitoria < 1 mcg/mL (figuras 2 y 3) y slo 14 aislamientos requirieron 1 mcg/mL.

den de pacientes con cuadros clnicos de candidiasis recidivante y, por lo tanto, multitratados. En trabajos previos de aislamientos procedentes de individuos sanos slo se observ resistencia en C. albicans (15%), mientras que todas las especies diferentes a C. albicans fueron susceptibles (< 8 mcg/mL) al fluconazol. Estos datos permiten considerar que la aplicacin teraputica sin conocer la susceptibilidad del aislamiento al frmaco incrementa considerablemente la resistencia. No se observ resistencia cruzada de las cepas entre el fluconazol y el ketoconazol. De acuerdo con los resultados obtenidos, la anfotericina B sigue siendo el frmaco de eleccin en el tratamiento antifngico, ya que todos los aislamientos fueron susceptibles.

Figura 1. Puntos de corte para el fluconazol en g/mL: < 8 sensibles; 16-32 susceptible dependiente de la dosis y > 64 resistentes.

Figura 3. Susceptibilidad de C. glabrata a la caspofungina. Distribucin bimodal de C. glabrata (18 aislamientos).

Figura 2. Susceptibilidad de C. albicans a la caspofungina. Distribucin unimodal de C. albicans (110 aislamientos).

conclusiones: Discusin y conclusiones en la actualidad no se han establecido los puntos de corte para el ketoconazol, la anfotericina B ni la caspofungina. Sin embargo, con base en la literatura especializada, se consideraron los puntos de corte mencionados para cada frmaco. En el ketoconazol se observ resistencia en funcin de la especie. C. glabrata, que fue la que tuvo mayor resistencia intrnseca a los azoles. Los porcentajes de resistencia observados en este estudio coinciden con los reportados en la actualidad y es posible que se explique por qu la mayor parte de las cepas proce-

Por ltimo, no se detectaron cepas con resistencia intrnseca a la caspofungina. La concentracin mnima inhibitoria mxima requerida para inhibir totalmente el crecimiento fue de 1 mcg/mL y slo se observ en C. glabrata (6/18) y C. parapsilosis (6/8). Son posibles especies con resistencia intrnseca. Estos resultados resaltan la importancia de aplicar la terapia especfica en funcin de la especie y de la susceptibilidad al antifngico del aislamiento in vitro.
BIBLIOGRAFA 1. IV Curso Hispano-Argentino de Micologa Mdica. Determinacin de la resistencia a los antifngicos en el laboratorio. 2001. Buenos Aires, Argentina. Bastert J, et al. Current and future approaches to antimycotic treatment in the era of resistant fungi and immunocompromised hosts. International Antimicrobial Agents 2001;17:81-91.

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Produccin de un lote de emulgel con kanamicina Imelda Meja Balbuena,* Alejandra Hernndez Len,* Alejandro Palma Ramos,* Laura Castrilln Rivera,* Carmen Padilla Desgarennes** *Departamento de sistemas biolgicos, Universidad Autnoma Metropolitana- Xochimilco. ** Centro Dermatolgico Pascua. Introduccin: Introduccin al centro dermatolgico llegan casos de actinomicetomas causados por Actinomadura madurae que ya han recibido el tratamiento tradicional (DDS, trimetoprimsulfametoxazol) en diferentes hospitales sin resultados alentadores, por esto, en el Centro Dermatolgico Pascua se trabaja con el aminoglucsido de kanamicina complementado con DDS y trimetoprim-sulfametoxazol, en dos o ms ciclos, y ha dado buenos resultados. Se piensa en la formulacin de un emulgel que contenga kanamicina, como un medicamento de ayuda a este padecimiento, para un posible tratamiento tpico de baja toxicidad y que el paciente pueda usarlo en casa. Objetivo: Objetivo produccin y control de un emulgel con kanamicina. Metodologa: Metodologa se mezcla veegum, carbopol, vaselina lquida, tween 80, agua desmineralizada, benzoato de sodio, sulfato de kanamicina. Pruebas de control: aspecto, pH, lmite microbiano. Resultados: Resultados en el lmite microbiano se us como concentracin terica 3.2 mg/mL, y como microorganismo patrn al Bacillus subtilis para comparar los resultados obtenidos con Actinomadura madurae, para el primero se obtuvo un valor de 101.6% de inhibicin y para el segundo de 100%. Discusin: Discusin la inhibicin obtenida de la kanamicina sobre A. madurae es tan buena como los obtenidos para B. subtilis, por lo que se cree que dar buenos resultados como un medicamento tpico auxiliar en el tratamiento del actinomicetoma. Dermatologa Rev Mex
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Ttulos de inmunoglobulinas en pacientes con actinomicetoma causado por Nocardia brasiliensis LJ Mndez Tovar,* F Hernndez Hernndez,** R Lpez Martnez,** P Manzano Gayosso,** R Mondragn Gonzlez,* A Bonifaz,*** PMC Desgarennes**** * Unidad de investigacin mdica en dermatologa y micologa, Hospital de Especialidades, Centro Mdico Nacional Siglo XXI, IMSS. ** Laboratorio de micologa mdica, Facultad de Medicina, UNAM. *** Laboratorio de micologa mdica, Hospital General de Mxico, SS. **** Laboratorio de micologa mdica, Centro Dermatolgico Pascua. La respuesta inmunolgica humoral es eficaz para controlar muchas de las infecciones bacterianas o virales. Sin embargo, en las micosis sistmicas, como la histoplasmosis, la coccidioidomicosis y en infecciones por bacterias del orden Actinomycetales, como la tuberculosis y la lepra, las concentraciones elevadas de anticuerpos sricos, por lo general, son un dato de mal pronstico. Determinaciones de anticuerpos publicadas por investigadores, como Gonzlez Ochoa y sus colaboradores en 1962, Mahgoug ES y su equipo en 1977 y Singhavi A y sus colegas en 1996, muestran que en ambos tipos de micetoma parece darse el mismo fenmeno. El objetivo de este trabajo fue determinar los ttulos sricos de IgM, IgG y las subclases de un grupo de pacientes con actinomicetoma por N. brasiliensis y comparar los resultados con los ttulos obtenidos de un grupo de personas control sin micetoma habitantes de una zona endmica. Se incluyeron 25 pacientes con actinomicetoma y 25 personas control sin micetoma. A todos se les tom una muestra de 5 mL de sangre perifrica. Se determinaron los ttulos de IgG total, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 e IgM por la tcnica de ELISA. Los antgenos empleados fueron PPD, N. brasiliensis crudo (NB) y cinco derivados de ste: NB2, NB4, NB6, NB8 y NB10. En todos los experimentos los ttulos de inmnoglobulinas fueron mayores en los sueros de los pacientes que en los controles. La diferencia fue notable cuando se analizaron los resultados de IgG3 con los antgenos NB, NB4 y NB8 y ms clara an con las de IgG4, en donde los pacientes tuvie-

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ron mayores ttulos de inmunoglobulinas con todos los antgenos con valores de p< 0.005. Se concluye que los pacientes con micetoma por N. brasiliensis tienen aumento en IgG3 e IgG4 que sugiere una respuesta inmunolgica predominantemente de TH2, la cual es ineficiente para el control de esta infeccin. uberculosis Diagnstico Tuber culosis cutnea. Dia gnstico cultiv for orma por cultivo y PCR en una for ma ugosa colicuati tiv ver r ug osa y una colicua ti v a Alejandrina Martnez B, Elisa Vzquez del Mercado M. Seccin de micologa, Hospital General Dr. Manuel Gea Gonzlez. Caso 1 Se presenta el caso de un paciente masculino de 28 aos de edad con una dermatosis caracterizada por placas verrucosas con reas de atrofia central, hipo e hiperpigmentacin, ndulos y costras que afectaba los glteos y la regin inguinal. Se realiz examen directo, ZN, PPD, biopsia y PCR, por el que se detect DNA de M. tuberculosis. Caso 2 Es un paciente masculino de 48 aos de edad con una dermatosis caracterizada por deformidad, aumento de volu-

men, hiperpigmentacin, orificios de trayectos fistulosos con material purulento y cicatrices en la regin gltea y perineal. Se realiz examen directo, ZN, PPD, biopsia y cultivo de la lesin, este ltimo mostr crecimiento de M. tuberculosis. La tuberculosis cutnea es una enfermedad infecciosa crnica causada por Mycobacterium tuberculosis que puede generar formas fijas (habitadas) y hematgenas (hiperrgicas). La tuberculosis verrucosa (caso 1) ocurre en 8% y se debe a reinfeccin exgena. La tuberculosis colicuativa (caso 2) es la forma ms frecuente en Mxico (51%), aparece por extensin de un foco tuberculoso en los ganglios, los huesos o las articulaciones. El estndar de oro para el diagnstico de la tuberculosis cutnea es el cultivo del tejido y la inoculacin en cobayo, ambos mtodos tienen la desventaja de tardar de cuatro a siete semanas. Otros procedimientos de ayuda diagnstica incluyen: hallazgos histolgicos, examen directo con BAAR, el PPD, tcnicas moleculares como PCR y la prueba teraputica. La tuberculosis contina siendo un problema de salud pblica en nuestro pas y en el mundo. Sus manifestaciones cutneas son muy variables y las deben conocer el mdico con el fin de instaurar el tratamiento al paciente y vigilar a sus contactos.

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Congreso Iberolatinoamericano de Dermatologa Del 21 al 25 de octubre del 2003 Centro de Convenciones Milton Buenos Aires Buenos Aires, Argentina

Secretara administrativa : Av. Rivadavia 1977, piso 11 A (C1033AAJ) Buenos Aires, Argentina Tel./fax: (54-11) 4953-1505 E-mail: xvcongreso@xvcilad.org Pgina web: www.xvcilad.org
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