PREPARACIN DEL MATERIAL DE VIDRIO DE USO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

En los procedimientos microbiolgicos es frecuente el empleo de material de vidrio y dado que ste tiene una gran influencia en la calidad de los resultados, es muy importante tomar en cuenta su adecuada limpieza y esterilizacin, es decir, se debe prestar un especial cuidado a su preparacin. Los mtodos de limpieza del material debern adaptarse al tipo de sustancia que sea necesario remover. En principio vamos a tener dos tipos de materiales: el contaminado (el que ha tenido contacto con microorganismos) y el no contaminado. Cuando se trata de material contaminado (placas de Petri inoculadas, tubos conteniendo cultivos de microorganismos, frascos empleados en el cepario, etc.), se debe esterilizar en autoclave a 121C, 15 libras de presin, durante 20 a 30 minutos antes de someterlo al proceso de lavado. Para llevar a cabo el proceso de lavado, primero se elimina los residuos por arrastre, se enjuaga, se realiza la limpieza con detergente, luego se enjuaga con agua de cao, posteriormente se enjuaga con agua destilada y se deja secar a temperatura ambiente o estufa a 60 80 C. Para eliminar las partes gruesas de suciedad o residuos no infecciosos (grasa, resto de pegamento, cinta adhesiva, carbono, tinta de rotulado, etc.). Se emplear el raspado con esptulas, cepillo, esponjas metlicas, paos, etc. Se enjuagar repetidas veces bajo el chorro de agua corriente a presin (conectando a la canilla un tapn perforado o tapando parcialmente con un dedo). Se aconseja un ltimo enjuague con agua destilada. Se dejar secar en canasto o rejilla de alambre boca abajo a temperatura ambiente o estufa a 60 80 C. Si se requiere limpiar material de vidrio que tiene manchas de grasa u otros de difcil remocin, se recomienda sumergirlo en una solucin de dicromato de sodio o potasio en cido sulfrico concentrado (mezcla sulfocrmica) durante 24 horas. Luego se enjuaga con abundante agua, y finalmente con agua destilada. Se deja secar a temperatura ambiente. Una vez que el material est limpio y seco debe ser esterilizado, para ello previamente debe empacarse de manera que se pueda mantener estril hasta el momento de su uso. El material que sirve de envoltura final, o que se emplea para su preparacin, debe tener las caractersticas siguientes: Ser adecuado para el proceso de esterilizacin. Por ejemplo si va a ser utilizado para envolver un material que va a ser esterilizado por vapor a presin, debe permitir la circulacin del vapor y a la vez deber ser resistente a la humedad y la presin.

 Ser resistente a pinchazos y abrasiones. Permitir envolver el material completamente. Permitir la identificacin del material estril. Permitir retirar el material estril con facilidad. Estar libre de colorantes y sustancias txicas. Ser econmico. Entre los materiales que ms se emplean para envolver el material antes de su esterilizacin, se encuentran: Para la esterilizacin por calor hmedo: papel Craft. Para la esterilizacin por calor seco: papel Craft o papel de aluminio. Finalmente es importante realizar controles de modo de verificar si el material de vidrio fue convenientemente sometido a limpieza y esterilizacin. PROCEDIMIENTO Tubos de ensayo Colocar a cada tubo una tapa plstica o de metal o una torunda de algodn con la ayuda de un trozo de madera, siguiendo las instrucciones dadas por el profesor. Colocar los tubos preparados en una cesta destinada para tal fin. Cubrir la cesta con papel Craft y sujetar el mismo con pabilo. Matraz (baln, fiola) Colocar un tapn de algodn siguiendo las instrucciones dadas por el profesor. Cubrir el algodn con una porcin de papel Craft y sujetar el mismo con pabilo. NOTA: cuando se utiliza algodn para cubrir tubos, fiolas o balones se debe tomar la precaucin de que ste pueda ser manipulado con facilidad, para ello no debe quedar ni muy apretado ni muy flojo y debe alcanzar aproximadamente 3 cm dentro del material de vidrio. Pipetas Colocar una pequea torunda de algodn en el extremo superior de la pipeta. Envolver completamente con papel Craft (desde la punta, zona de goteo hacia el extremo superior, zona donde se coloca la propipeta). Seguir las indicaciones dadas por el profesor. Rotular, por la parte externa del papel, la capacidad de la pipeta. Por ejemplo: 5 1/10 ml, 1 1/100 ml, etc. Placa de Petri. Envolver con papel Craft siguiendo las indicaciones del profesor.

NOTA: Las pipetas, as como las placas de Petri, se pueden envolver individualmente de la manera indicada, o se pueden colocar en grupos, en recipientes metlicos especialmente diseados para tal fin, denominados pipeteros y plaqueros respectivamente. Una vez preparado todo el material de vidrio: Esterilizar

Control de Esterilidad Ensayos que se realizan en el laboratorio para verificar si el proceso de esterilizacin cumple con las especificaciones. Entre ellos mencionaremos: 1. Termosensores. 2. Tubos de Browne: tubos de vidrio cerrados con 0,15 ml de un fluido rojo que cambia a verde al aumentar el calor. 3. Indicador Biolgico: Tiras de papel impregnadas con esporas o tubos conteniendo esporas, se incuban luego del tratamiento para evaluar la supervivencia. 4. Tiras indicadoras: responden al calor hmedo entre 115-123 C. Indican la dosis de calor por distancia recorrida de un colorante azul 5. Cinta Testigo o Cinta adhesiva de autoclave: indica que el vapor, a un mnimo de 120 C, alcanz la cinta cuyas rayas se tornan de blancas a negras. No asegura esterilidad sino que un objeto ha sido procesado mediante vapor. 6. Colocar una muestra del material esterilizado en contacto con un medio de cultivo estril, el cual, despus de ser incubado a 35C +/- 2C x 24 48 h, se observa para determinar si hay o no evidencia de crecimiento microbiano.

NOTA: Papel Kraft (Craft): Fabricado, segn normas IRAM 3106: papel Kraft blanco puro monolcido. Es un papel de resistencia mecnica elevada, obtenido de la pasta qumica de la madera blanqueada. El gramaje aceptado es de 60 a 80 gr/m2, con una humedad de 8%. Posee porosidad menor de 0,3 ug, por lo cual resulta ser una buena barrera antimicrobiana en las condiciones adecuadas de almacenamiento. Presenta un lado spero (exterior) y uno satinado (interior), de modo que no libera pelusas.

INFORME N 1 APRENDO INVESTIGANDO

1. Tienes que esterilizar el siguiente material de vidrio: pipetas, tubos, placas de Petri y matraz. Indica los pasos que realizas. 2. Pasteurizacin es sinnimo de esterilizacin? Diga en qu casos se aplica la Pasteurizacin. Fundamente la respuesta. 3. Elabore un organizador grfico con las lecturas de los siguientes link: http://www.biolene.com/espanol/downloads/bt20.pdf http://www.biolene.com/espanol/downloads/bt50.pdf http://www.efelab.com/site/files/es/cintas_folleto.pdf 4. Qu mtodo de esterilizacin se recomienda para materiales termolbiles? Cite ejemplos. 5. Cmo acta el xido de etileno? 6. Leer los puntos: 6.2 Principios bsicos de bioseguridad y 6.3 Bioseguridad del personal de laboratorio (pginas 18 a 27) de la norma tcnica: Bioseguridad en laboratorios de ensayo, biomdicos y clnicos. Analice y realice un organizador grfico. (Obtener en documentos compartidos). 7. Leer el item 6.7. Manejo de desechos de laboratorio (pgina 42) de la norma tcnica: Bioseguridad en laboratorios de ensayo, biomdicos y clnicos. Analice y realice una sntesis. (Obtener en documentos compartidos).