QUIMIORRESITENCIA EN GARRAPATAS Rhipicephalus (Boophilus) microplus.

LILIAN PAOLA GUEVARA MUETON 010100172010 JUAN CAMILO VASQUEZ BOLAOS 010100072010 CRISTHIAN EDUARDO LOZANO HERNNDEZ 010100052010

EDGAR DAZ RIVERA

UNIVERSIDAD DEL TOLIMA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA IBAGUE, 17 DE MARZO DE 2011.

OBJETIVOS

General:

Aplicar y analizar pruebas de resistencia en garrapatas Rhipicephalus (Boophilus) microplus a travs de una prueba basada en el test de Drummond, para reconocer la sensibilidad a diferentes principios activos de compuestos ixodicidas en el corregimiento del totumo en la finca las margaritas.

Especficos:

Analizar la eficacia reproductiva de las hembras ingurgitadas despus de la exposicin a ixodicidas tales como: Carbamatos, Piretroides, Organofosforados y Amidinas.

Evaluar el porcentaje de control de la eficacia reproductiva para cada ixodicida usado, tomando como referencia un grupo control.

MARCO TEORICO

El problema de la quimio resistencia de garrapatas marca a gran escala la economa ganadera en Colombia, especialmente con la especie Rhipicephalus (Boophilus) microplus, debido a su amplia distribucin en la regin y a su carcter parasitario. Para identificar la Boophilus es necesario tener en cuenta sus palpos son muy cortos, la base de su captulo es hexagonal, no posee festones, los peritremos son redondos y el macho tiene cuatro placas perianales (Quiroz Romero, 2005, p. 773). El ciclo de vida de la B. microplus comprende, segn Santos y Furlong (2002), dos fases: La fase no parasitaria, que es cuando la teleogina cae al suelo y all ocurre la ovoposicin y posterior eclosin; y la fase parasitaria, cuando la larva sube y se alimenta de su hospedador hasta que madura a teleogina o ganandro.

En Colombia se han identificado 68 especies, correspondiendo al 9% de todas las especies del mundo (Barreto V, Prada S, 1990, p. 18). Segn Barreto V, Prada S, se ha estimado que en Colombia la garrapata B. microplus, es la que ms se presenta en el territorio seguida por la especie Anocentor nitens, Amblyoma cajennense y Rhipicephalus sanguineus. En Colombia Boophilus, tiene una distribucin muy amplia, encontrndose desde el nivel del mar hasta los 2700 de altitud y temperaturas que oscilan entre los 15 y 35 grados centgrados (Parra T, Pelez S, Segura C, Arcos D, Londoo A, Daz Rivera, Vanegas R). De acuerdo a Barreto V, Prada S, un estudio realizado sobre bovinos de 33 municipios del Tolima en donde se colectaron 15.809 garrapatas estableci que la B. microplus es la especie de garrapata ms abundante en el territorio tolimense. Del anterior nmero de garrapatas recolectadas, un 96.4% pertenecan a B. microplus, un 3.2% a Anocentor nitens y un 0.4% a Amblyoma cajennense.

El impacto negativo de B. microplus a la ganadera se debe a efectos directos, dao a las pieles por accin de las picaduras, prdida de sangre y disminucin de parmetros productivos; e indirectos dado por los agentes etiolgicos que transmiten (Daz, Vivas, Snchez, Cruz, 2006, p. 105). A su vez Daz et al. (2006) plantean que la resistencia es uno de los mayores problemas, debido a que la disponibilidad de nuevos antiparasitarios es cada vez ms escasa.

Daz et al. (2006), definen la resistencia como la capacidad adquirida por individuos de una poblacin parsita que les permite sobrevivir a dosis de qumicos que generalmente son letales para una poblacin normal. Tambin mencionan dos tipos de resistencia: la resistencia cruzada (RC) que es el mecanismo que utilizan especies de insectos resistentes para sobrevivir a la exposicin de insecticidas relacionados qumicamente, usando un patrn de destoxificacin genrico; y la resistencia mltiple (RM) que es la utilizacin de varios mecanismos hacia la accin de varias clases de insecticidas no relacionados qumicamente. De igual forma cabe resaltar los factores que influyen directamente en el desarrollo de la evolucin de la resistencia, los cuales se clasifican en: genticos, biolgicos y operacionales del qumico. Finalmente se indican los mecanismos de resistencia a los ixodicidas, en cuatro categoras. La primera, resistencia del comportamiento, es cuando el organismo modifica su conducta para evitar el contacto con el ixodicida. La segunda, resistencia de la penetracin, es una modificacin del exoesqueleto del organismo para inhibir o retardar la penetracin del qumico. La tercera, resistencia metablica, es la destoxificacin del ixodicida por procesos enzimticos que radica en la modificacin de las vas metablicas. Finalmente, insensibilidad del sitio de accin, es la modificacin del sitio de accin del ixodicida para disminuir la sensibilidad del qumico. Para finalizar cabe resaltar que para el diagnostico de resistencia existen en general tres mtodos: Bioensayos (Prueba de paquete de larvas, Prueba de inmersin de adultas), Pruebas bioqumicas

y Pruebas moleculares. Entre los principales compuestos a los que se ha presentado quimio resistencia por parte de las garrapatas, es pertinente resaltar los siguientes:

Organofosforados: Segn Barreto V, Prada S, su blanco principal, es inhibir la accin de la colinesterasa irreversiblemente; afectando as al sistema nervioso de la garrapata. Este se manifiesta, a travs de la sobre estimulacin colinrgica de tipo muscarnico, nictico y central, interrumpiendo el proceso normal entre colinesterasa y acetilcolina a nivel del espacio sinptico.

Carbamatos: Su accin es similar a la de los organofosforados. Los carbamatos, presentan el acido carbmico y producen una accin parasimptico-mimtica al inhibir reversiblemente la acetilcolinesterasa permitiendo el acumulo de acetilcolina (Barreto V, Prada S, 1990, p. 56). Esto genera un incesante estimulo nervioso, a consecuencia de la dilatacin de los canales para el ingreso del sodio; conllevando a la inestabilidad del sistema nervioso.

Piretroides: Su efecto va dirigido al sistema nervioso afectando la permeabilidad del Sodio. Dicho bloqueo, afecta la actividad motriz del parasito manifestndose en la incoordinacin de los movimientos, letargo, parlisis y muerte de este (Barreto V, Prada S, 1990, p. 57)

Amidinas: De acuerdo a Daz R, estos compuestos tienen como fundamento inhibir la funcin de la monoaminooxidasa en el sistema nervioso. Este efecto, genera parlisis muscular, incapacidad en la ingesta de protenas sangre y problemas en el desarrollo de los ovarios. La sustancia de este tipo ms reconocida es el Amitraz.

Teniendo en cuenta todo lo anterior se han desarrollado diferentes pruebas de laboratorio para determinar la resistencia a ixodicidas por parte de B. microplus. En la seleccin de una prueba de laboratorio adecuada para la resistencia a los acaricidas, los siguientes requisitos deben cumplirse. El ensayo deber ser lo suficientemente sensible para identificar la resistencia al principio de su aparicin. Tambin debe abarcar toda la gama de grupos qumicos que estn en uso, incluyendo los ingredientes activos de ms reciente desarrollo. La prueba de diagnstico debe ser simple y de bajo costo. Tambin debe crear un resultado rpido y fiable, y ser apta para la estandarizacin entre los laboratorios en muchos pases. Las ms ampliamente utilizadas pruebas in vitro son los bioensayos aplicados a las larvas y las garrapatas hembras llenas de sangre. Ninguno de ellos cumple con todos los requisitos anteriores, y la mejora de los protocolos para el diagnstico de la resistencia a los acaricidas debe ser un objetivo permanente (FAO, 2004, p. 47 48).

Las cepas resistentes de las garrapatas se pueden diagnosticar sin tener protocolos de pruebas estandarizados y reconocidos internacionalmente, como la tcnica de inmersin de larvas de Shaw, la cual determina el porcentaje de mortalidad de larvas con concentraciones teraputicas del acaricida (Bravo, Coronado y Henrquez, 2008, p. 41). Entonces, segn la FAO en 2004, para facilitar la vigilancia mundial y proporcionar una base para la comparacin de los resultados de las pruebas, la FAO promueve distintas pruebas de laboratorio in vitro como lo son:

Prueba del paquete larval (LPT): Se considera como la ms repetible, aunque est limitada por la longitud del tiempo que toma (6 semanas). Por lo tanto, sigue siendo la prueba de eleccin para los estudios y para la confirmacin definitiva de un diagnstico de la resistencia. En esta prueba, las larvas de garrapatas estn expuestas a papel de filtro impregnado con el compuesto

qumico y su mortalidad posterior se cuantifica despus de 24 horas. El kit contiene los materiales y procedimientos estandarizados permitiendo que los datos obtenidos de diferentes partes del mundo sean directamente comparados y discutidos. (FAO, 2004, p. 54).

Prueba de inmersin de adultos (AIT): Se desarrollo segn la tcnica descrita por Drummond et al. (1971) y publicada por el ICA; donde la efectividad del acaricida se mide en trminos de su capacidad de controlar la eficacia reproductiva. Esta se calcula dividiendo el peso (mg) de los huevos producidos entre el peso de las teleoginas (mg) y el resultado es multiplicado por el porcentaje de eclosin y por 20.000 (es una constante que representa el numero de larvas contenidas en un gramo de huevo).

A su vez, a travs de esta prueba, se busca obtener, el porcentaje de control de eficacia reproductiva (PCONER), el cual se determina mediante la comparacin de la eficacia reproductiva de cada tratamiento contra la eficacia reproductiva del grupo control, recopilando los datos para cada tratamiento.

Finalmente, segn la FAO citada por Bravo, Coronado y Henrquez en 2008, es importante medir el factor de resistencia el cual es un indicativo de resistencia al acaricida empleado, as:

METODOLOGIA

Recoleccin de garrapatas

Se realizo la bsqueda por zonas del Norte y Centro del Tolima, y finalmente en el corregimiento del totumo se selecciono la finca las margaritas, propiedad del Seor Isaas Barn. All, se inicio el trabajo de recoleccin de teleoginas hacia las 7:00 am el da 13 de de marzo, con un grupo total de 15 bovinos doble propsito de los cuales se eligieron 8 individuos que se encontraban altamente parasitados. Cabe resaltar que de este grupo muestra haban dos terneros. (Imagen 1).

La utilizacin de compuestos ixodicidas por el propietario consiste en la aplicacin de ivermectina cada 3 meses y en el momento de recoleccin la ltima aplicacin se haba ejecutado hace ms de dos meses.

Se recolectaron alrededor de 70 hembras de las cuales el 40% no estaban totalmente ingurgitadas. Enseguida se transportaron en una caja de cartn con papel peridico y se refrigeraron a una temperatura de 4C durante 1 da. Esto con la finalidad de bajar el metabolismo de la muestra, evitando la ovoposicin, y dando as el tiempo suficiente para llevar a cabo la prueba.

Posteriormente la muestra fue transportada al laboratorio donde se llevo a cabo su identificacin y clasificacin de acuerdo a su tamao, separndolas en 2 grupos: 30 hembras ingurgitadas (> 7mm), con sus estructuras completas y de la especie B. microplus; 9 hembras

ingurgitadas con su aparato bucal incompleto; 3 hembras ingurgitadas de la especie Rhipicephalus sanguineus; y 28 hembras que no se encontraban ingurgitadas. (Imagen 2).

Test de Drummond

Es una prueba, desarrollada en 1973 por Drummond, diseada para medir la eficacia reproductiva de un grupo de garrapatas ante una exposicin previa a un qumico. Es de aclarar, que el test utilizado estuvo sujeto a modificaciones, por lo tanto, la prueba aplicada no es la original. Para llevarla a cabo se utilizaron los siguientes compuestos ixodicidas: Amitraz, Cipermetina, Dravafos y Ficam los cuales se disolvieron en 50ml de agua destilada por medio de una micropipeta en las siguientes cantidades 0.08 ml, 0.05 ml, 0.03 ml y 0,15 gr respectivamente. (Imagen 3).
Grupo Compuesto Activo 1 2 3 4 5 Amidina Control Piretroide Organofosforado Carbamato Producto Amitraz Agua destilada Cipermetrina Concentrado emulsionable Concentrado Ethin emulsionable Bendiocarb Polvo Soluble 15% 83% 80% Cipermetrina Dravafos Ficam Genfar Genfar Bayer 1:1000 1:1300 200 gr/Kg Presentacin Comercial Dilucin Tipo Concentracin Nombre Comercial Laboratorio Recomendada Concentrado 12,50% Amitrax Vicar 1:600 emulsionable

Tabla 1. Generalidades Compuestos.

A continuacin se procedi con el lavado de las garrapatas con agua destilada y su posterior secado, luego se dividieron por pesos separando 5 grupos de 5 garrapatas cada uno. Con un peso promedio por garrapata de 120 mg y unos pesos por grupo as: Grupo 1 Amitraz (599mg), Grupo 2 Control (582mg), Grupo 3 Cipermetina (607mg), Grupo 4 Dravafos (615mg) y Grupo Ficam (600mg).

Antes de continuar con el procedimiento metodolgico cabe resaltar que el principio activo de cada compuesto de acuerdo a su nombre comercial es: Amitraz (Amidina), Cipermetina (Piretroide), Dravafos (Organofosforado) y Ficam (Carbamato).

Se prosigui con la inmersin de las garrapatas en las disoluciones durante 30 segundos, se filtraron por medio de una toalla absorbente y luego se secaron, as se procedi a enumerar las cajas de Petri de 1 a 5 y se colocaron las garrapatas por medio de cinta adhesiva doble cara en posicin dorsal ubicando el aparato bucal hacia el centro de la caja. Se almacenaron durante 10 minutos en un recipiente trmico junto con papel peridico y las cajas totalmente cerradas, esto para conservar la temperatura antes de ubicarlas dentro de la incubadora. (Imagen 4).

Es de resaltar que la incubadora en donde se realizo el proceso de incubacin, fue de fabricacin casera, usando una cava de icopor, un termmetro de pared, un bombillo tradicional de 60 W y un octavo de cartulina negra. Esta se adapto para conservar una temperatura entre 27C y 28C. Se aislaron de la luz por medio de la cartulina y las cajas de Petri se conservaron abiertas para permitir la circulacin de oxigeno y entrada de la humedad que se favoreci con la incorporacin de dos recipientes con agua. (Imagen 5).

Luego de esto se realiz una observacin detallada de los posibles cambios que pudiesen llegar a ocurrir durante la incubacin durante 20 das. Cabe resaltar que ningn individuo del Grupo 4 ovoposito durante este periodo de tiempo. (Imagen 6).

Al cumplirse el periodo de tiempo establecido por la prueba, se procedi a desechar las garrapatas y a realizar el pesaje de los huevos por su respectivo grupo. Luego de esto los huevos

se depositaron en tubos de ensayo identificados de acuerdo al grupo y al compuesto qumico utilizado. Estos se llevaron nuevamente a la incubadora con las mismas condiciones a las que se incubaron las garrapatas, durante un periodo de 30 das a la espera de la eclosin de estos. (Imagen 7).

Al cabo de este tiempo, se procedi al contar 200 huevos identificando los que eclosionaron y los que no, desechando las larvas. Este proceso se repiti 3 veces por cada grupo. Para evaluar el porcentaje de eclosin se realizaron los siguientes formatos, en los que se especifica el grupo y el nombre comercial del compuesto utilizado. En estos formatos las letras S representan huevos eclosionados y la letra N representa huevos sin eclosionar. (Imagen 8).

De acuerdo a los datos obtenidos durante toda la prueba se realizaran lo respectivos anlisis.

RESULTADOS Y ANALISIS

La recoleccin de las teleoginas, se realizo en poca de lluvias, lo que dificulto dicha labor. Segn los resultados obtenidos por Hocayen y Furlong en 2002, durante pocas de invierno, el porcentaje de teleoginas es alrededor del 35% de la carga parasitaria del animal, en relacin con la poca de verano donde el porcentaje de teleoginas es alrededor del 42%. Esto podra ser una explicacin al bajo nmero de poblacin de garrapatas durante la poca de invierno en regiones tropicales. Por ende la recoleccin mostro el siguiente comportamiento:

B. microplus completas 28 30 B. microplus incompletas R. sanquineus 3 No ingurgitadas 9

Grfica 1. Relacin de garrapatas recolectadas.

En el laboratorio, al momento de procesar la muestra se establecieron 5 grupos de garrapatas con los siguientes pesos: Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 599 582 607 615 600 120mg x individuo 600,6mg x grupo Tabla 2. Peso de hembras por grupo.

Peso Hembras (mg) Peso promedio muestra

Durante el trabajo realizado por Barreto y Prada en 1990, en donde se aplico el test de Drummond a 8 haciendas diferentes del Departamento del Tolima, se reporta que el peso promedio de las garrapatas muestreadas en 5 de las haciendas coinciden cercanamente con el promedio del peso de las garrapatas obtenidas para este trabajo. Esto podra indicar que este trabajo tuvo un desarrollo correcto con respecto a otras pruebas similares.

Durante la incubacin el proceso de ovoposicin inicio a partir del cuarto da con los grupos 2 (control), grupo 3 (Cipermetrina) y grupo 5 (Ficam). La siguiente ovoposicin ocurri hacia el da 7 por parte del grupo 1 (Amitraz). Finalmente, transcurrido los 20 das de incubacin el grupo 4 (Dravafos) no presenta ovoposicin.

Los resultados obtenidos por los grupos 3 y 5 podran indicar que los compuestos a los que estuvieron expuestos no afectan el desarrollo de esta etapa del ciclo biolgico, pues estos tuvieron el mismo comportamiento que el grupo control. Se podra decir que el retraso en la ovoposicin del grupo 1 en relacin al grupo control se debe a los daos ocasionados por el Amitraz, por ende la muestra empieza a mostrar ciertos signos de sensibilidad a las Amidinas. En relacin al grupo 4, organofosforado, se puede indicar que aun no se ha desarrollado resistencia por parte de las garrapatas hacia este compuesto. Segn Soberanes, Rosario, Santamara y Garca en 2005, la resistencia a organofosforados y a piretroides se da por la sobreproduccin de esterasas que hidrolizan el compuesto ixodicida. De acuerdo con los resultados obtenidos se puede decir que este factor de resistencia no se ha expresado en la poblacin estudiada.

Pasado el periodo de incubacin se procedi a pesar los huevos por grupo, obteniendo as los siguientes resultados:

Peso Huevos (mg)

Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 58,8 204 148,4 0 Tabla 3. Peso de huevos por grupo.

Grupo 5 221,4

Segn los resultados obtenidos para el grupo 1 se reafirma la sensibilidad de las garrapatas a las Amidinas, reflejado en los daos reproductivos que el compuesto genera. Cabe destacar que el grupo 3 en relacin al grupo control mostro cierta sensibilidad ante los Piretroides al finalizar esta etapa de la prueba, pues la diferencia de pesos con respecto a control fue considerable. As mismo, no se ha mostrado sensibilidad por parte del grupo 5 hacia el Carbamato, dado a que los resultados obtenidos en el pesaje de los huevos muestran un comportamiento acorde al grupo control.

Por tanto, segn lo planteado por Alves en 2006, se puede concluir que hasta el momento que la poblacin de garrapatas es sensible al organofosforado (Ethin) debido a que hubo muerte de las hembras y no hubo ovoposicin. De igual forma el tratamiento con Amidinas (Amitraz) y con piretroides (Cipermetrina) ha mostrado tolerancia debido a que hubo ovoposicin incompleta en relacin al grupo control. Por ltimo, el Carbamato (Bendiocarb) ha mostrado resistencia debido a que tuvo una ovoposicin normal con respecto a control.

En la siguiente tabla se plasman los porcentajes de eclosin, la eficacia reproductiva, los porcentajes de control de la eficacia reproductiva (PCONER), y el factor de resistencia estimados para cada grupo luego de finalizar la incubacin de estos:

Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5

Nombre Comercial Peso Hembras mg Peso Huevos mg Eclosin Eficacia Reproductiva PCONER Factor de Resistencia Amitraz 599 58,8 0,83% 16,37 99,62 1,004 Control Cipermetrina Dravafos Ficam 582 607 615 600 204 148,4 0 221,4 62% 26,83% 0% 10,5% 4346,39 1312,08 0 774,9 0 69,81 100 82,17 1,43 1 1,22

Tabla 4. Resumen Resultados.

El comportamiento del grupo control muestra un porcentaje de eclosin del 62% lo cual podra indicar que hubo ciertos problemas de anaerobiosis y de falta de humedad que ocasionaron que dicho porcentaje no haya sido ms alto. Segn Barreto y Prada en 1990, los tubos de ensayo utilizados inicialmente fueron la causa de deshidratacin y de larvas atrapadas en los cascarones de los huevos, lo que se manifest en porcentajes bajos de eclosin. Esto podra ser la explicacin a lo sucedido con el grupo control, y por ende con el resto de grupos.

Para establecer la sensibilidad en los grupos tratados se debe tener en cuenta que el PCONER debe ser mayor o igual al 90%, y por ende el factor de resistencia no debe ser mayor a 1.1, segn la FAO citado por Bravo, Coronado y Henrquez en 2008. Entonces, el PCONER obtenido para el grupo 1 evidencia una sensibilidad muy alta ante la exposicin a Amidinas, lo cual corrobora lo planteado anteriormente, respecto a los posibles daos ocasionados.

Respecto a los resultados finales obtenidos en el grupo 3 se concluye que la eficacia de los piretroides tienen mayor incidencia sobre la ovoposicin, como se planteo anteriormente, pues a diferencia de lo que se esperaba el porcentaje de eclosin fue el ms alto del resto de grupos problema, por ende, el PCONER ms bajo (69,81%), lo cual segn Junquera en 2010, muestra

tolerancia hacia este compuesto. Tambin cabe resaltar que con respecto al grupo control, los piretroides pueden causar daos sobre alrededor de 2/3 de la poblacin de huevos ovopositados, teniendo en cuenta que le porcentaje de eclosin para control es del 62% y para grupo 3 del 26,83%. Por otra parte, los resultados tambin indican que existen individuos que expresan resistencia ante la Cipermetrina que, segn Alves en 2006, por la expresin de las esterasas EST1 y EST-2 las cuales hidrolizan las molculas del piretroide; y segn Haiqui en 1999, hay mutacin en el gen que codifica los canales del sodio.

Con relacin a grupo 5, el comportamiento que tuvo el Carbamato sobre este fue contrario a lo observado para grupo 3. En este, la accin del compuesto se ve reflejada en el porcentaje de eclosin, ms que en la tasa de ovoposicin, pero a diferencia del grupo 3 presenta una mayor efectividad, de acuerdo al comportamiento del PCONER que para este caso fue del 82,67%. Con respecto al grupo control, se deduce que existe una sensibilidad moderada hacia los Carbamatos, debido a la diferencia considerable en el porcentaje de eclosin. Sin embargo, al identificar el factor de resistencia se establece que la cepa estudiada es tolerante a Carbamatos. Lo anterior indica, la existencia de individuos que empiezan a expresar resistencia frente a Bendiocarb, que segn Alves en 2006, posiblemente se debe a la mutacin del gen que codifica la acetilcolinesterasa. Tambin cabe resaltar que la mnima resistencia que se mostro es un indicador del desarrollo a futuro de resistencia a organofosforados, ya que segn Junquera en 2010, los Carbamatos y los organofosforados tienen resistencia cruzada.

Los comportamientos de los grupos anteriormente mencionados se ilustran en las siguientes grficas.

Grafica 2. Relacin de Resultados.

CONCLUSIONES

La carga parasitaria del ganado esta mediada principalmente por condiciones medioambientales tales como el clima (temperatura, humedad, luz, etc.) hora del da y presencia de animales predadores tales como las garzas, puesto que esto dificulta la recoleccin de muestras. Tambin cabe resaltar la importancia de las razas, debido a que el ganado ceb blanco expresa una resistencia natural a las garrapatas ya que suelen tener menor carga parasitaria respecto al ganado de razas Bos taurus.

Los animales jvenes presentan mayor carga parasitaria, puesto que durante la recoleccin de teleoginas se encontraron un nmero mayor de garrapatas ingurgitadas respecto a las encontradas en animales adultos. Esto indica que la resistencia a garrapatas por parte del ganado bovino se adquiere con el transcurso del tiempo y la exposicin a estas mismas. Cabe aclarar que no es raro encontrar otras especies de garrapatas diferentes a la B. microplus, como es el caso de Rhipicephalus sanguineus, esto debido a la interaccin de animales portadores de este tipo de garrapatas con el ganado.

Al ejecutar la inmersin es necesaria la preparacin de los compuestos de soluto y solvente en las cantidades indicadas por la casa comercial ya que cualquier variacin puede ocasionar efectos adversos sobre los resultados obtenidos, tanto en la ovoposicin como en la eclosin de los huevos. Los resultados del test pueden ser ms verdicos dado el caso en que se pueda controlar la humedad ya que es un factor importante para el desarrollo de la incubacin. En este punto, se recomienda la utilizacin de cajas de Petri en remplazo de los tubos de ensayo ya que esto permitir mayor flujo de la humedad y del aire sobre los huevos.

En relacin con el comportamiento de los ixodicidas utilizados se concluye, que el compuesto de mayor eficacia es el organofosforado Ethin, pues mostro un 100% de inhibicin

de la ovoposicin, y por tanto un factor de resistencia de 1, es decir, una total sensibilidad. Por tanto, para la finca Las Margaritas se recomienda el uso de este producto para el control de garrapatas. Sin embargo el Amitraz mostro una alta efectividad frente al control de la eficacia reproductiva y del factor de resistencia, por lo cual tambin es recomendable su uso.

Como ltima medida se recomienda evitar el uso excesivo de un nico compuesto ixodicida, esto para evitar el desarrollo de resistencias en la finca por parte de B. microplus a estos garrapaticida. As mismo, es importante evitar las fallas humanas en el momento de los baos en lo que se refiere a las dosis recomendadas y a la cantidad de solucin por animal, del mismo modo que es aconsejable el uso de un sistema de manejo integrado de plagas, para disminuir la frecuencia de baos.

El uso del Carbamato Bendiocarb no es aconsejable ya que tambin presento un PCONER menor al 90% y un factor de resistencia mayor a 1.1, de lo cual presenta una tolerancia leve por parte de las garrapatas. De igual forma el uso del Piretroide Cipermetrina como medida para controlar la poblacin de esta garrapata en dicha finca no es recomendable, puesto que los resultados obtenidos no evidencian una eficacia confiable del producto, pues muestran una tolerancia marcada.

BIBIOGRAFA

Alves Baffi, M. (2006). Estarases e Resistncia a Acaricidas no Carrapato Bovino Boophilus microplus (Acari, Ixodidae). Tesis de grado. Universidade Federal de Uberlndia, Uberlndia, MG.

Barreto Valero, G., Prada Serrano, E. (1990). Evaluacin de la efectividad de bases qumicas utilizadas en el control de Boophilus microplus en zonas agropecuarias del Tolima. Tesis de grado obtenido no publicada. Universidad del Tolima, Ibagu, Colombia.

Bravo, M.; Coronado, A.; Henrquez, H. (2008). Eficacia in vitro del Amitraz sobre Poblaciones de Boophilus microplus Provenientes de Explotaciones Lecheras del Estado Lara, Venezuela. Zootecnia Tropical, Volumen 26 (1), pp. 37 38.

Daz, A., Vivas, R., Snchez, F., Cruz, R., (2006). Resistencia de la garrapata Boophilus microplus a los ixodicidas. Archivo Medico Veterinario, Volumen 38 (2), pp. 106-113.

Daz Rivera E; Parasitologa Veterinaria-Conceptos Generales. Ibagu: Universidad del Tolima

Dos Santos, A., Furlong, J., (2002). Competio Intraespecfica em Boophilus Microplus. Cincia Rural, Volumen 32 (6), pp.1033-1038.

Food and Agriculture Organization of the United Nations (2004). Guidelines Resistance Management and Integrated Parasite Control in Ruminants. Roma: FAO.

Junquera, P. (2010). Organofosforados para el Control de Ectoparsitos en el Ganado Bovino, Ovino, Caprino, Porcino y Aviar. Parsitos del Ganado, ltima Actualizacin Octubre 2010.

--------. (2010). Resistencia de los Parsitos (Moscas, Garrapatas, Piojos, Helmintos, Etc.) a los Antiparasitarios. Parsitos del Ganado, ltima Actualizacin Septiembre 2010.

Quiroz Romero, H. (2005). Parasitologa Animal. Mxico: Editorial Limusa S.A.

Parra Trujillo, M.; Pelez Surez, L.; Segura Canizales, F.; Arcos Dorado J.; Londoo Arango, J.; Daz Rivera, E.; Vanegas Rivera, M. (1999). Manejo Integrado de Garrapatas en Bovinos. Ibagu: Corpoica.

Soberanes Cspedes, G.; Rosario Cruz, R; Santamara Vargas, M; Garca Vsquez, Z. (2005). Variabilidad en la Actividad General de Esterasas de la Garrapata Boophilus microplus y su Relacin con la Resistencia a Organofosforados. Tcnica Pecuaria en Mxico, Volumen 43 (002), pp. 239 246.

ANEXOS

Imagen 1. Recoleccin.

Imagen 2. Seleccin.

Imagen 3. Diluciones.

Imagen 4. Pesaje, Clasificacin e Inmersin.

Imagen 5. Construccin Incubadora.

Imagen 6. Incubacin Da 20.

Imagen 7. Pesaje de Huevos.

Imagen 8. Conteo de Huevos.