EVALUACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO PARA LA INDUCCION Y PRODUCCION DE BIOMASA Y POLIS ACARIDOS DE LENTINUS

JESSICA BETANCUR TAMAYO C.C. 1026144155 SANDRA MILENA CUERVO R C.C. 39388510

ASIGNATURA PRACTICAS EN EL REA FARMOQUMICA.

ASESORA CAROLINA ARBOLEDA

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACIA MEDELLN 2013

JUSTIFICACIN. Los basidiomicetos Lentinus, son una de las setas comestibles ms populares en el mercado mundial (1). Es conocido por ser rico en fibra, minerales, vitaminas, y varias sustancias activas. Debido a los beneficios para la salud percibidos, este hongo ha ganado gran popularidad como un alimento saludable en los pases del este de Asia. (2) Actualmente, un gran inters se centra en los polisacridos producidos por estos hongos, debido a su actividad biolgica (3) Est bien establecido que los polisacridos de Lentinus exhiben una fuerte actividad antioxidante y pueden reducir el estrs oxidativo en ratas. El lentinan por ejemplo, (1-3 -D-glucano), extrado de dicho hongo, ayuda a las clulas T para destruir las bacterias y los virus, tiene propiedades anticncer, efectos antitumorales y anticoagulantes. Contiene otros nutrientes tiles para fortalecer el sistema inmunolgico y luchar contra organismos patgenos. Adems trabaja para prevenir las enfermedades del corazn mediante la reduccin de la presin arterial y los niveles de colesterol. (4) Las investigaciones recientes de este hongo tambin han revelado la presencia de muchos compuestos bioactivos que funcionan como agentes anti-VIH (1) La utilizacin del Lentinus permite entonces, el aprovechamiento de un recurso natural y de reconocida actividad para: El desarrollo de nuevos y mltiples medicamentos, a travs de tcnicas biotecnolgicas. La bioremediacin de aguas contaminadas con cromo y algunos metales pesados. (5) La produccin de enzimas extracelulares, importantes en lo que respecta la biodegradacin de los colorantes. (6)

En la actualidad, existen medios de produccin altamente costosos, por lo que se ha visto la necesidad de buscar nuevas alternativas, a partir de materiales de menor costo, pero que igualmente brinden los nutrientes para que el crecimiento se d de manera ptima, en este caso se usaron, residuos agroindustriales. Este proyecto se enfoca en la evaluacin de medios de cultivo para la induccin y produccin de biomasa y polisacridos de Lentinus, en residuos agroindustriales.

OBJETIVOS. General Sembrar y mantener dos especies diferentes de Lentinus en un medio de residuos agroindustriales para la produccin de polisacridos. Especficos. Valorar dos medios de cultivo diferentes de mezclas agroindustriales. Evaluar la efectividad de polisacridos y biomasa a partir de dos cepas de Lentinus (Sp1 y Sp2) y su mezcla. Cuantificar polisacridos mediante espectrofotometra UV.

METODOLOGA. 1. Siembra y mantenimiento.

Tomar 1 plog de una caja de petri con micelio crecido del hongo

Sembrarlo en Agar extracto de malta, durante 8 das a 30 C (*)

(*)

Este proceso se realiza para la cepa Sp1 y Sp2 del hongo Lentinus.

2. Bioproceso de clulas sumergidas.

Tomar 4 plogs de la caja de petri anterior

Sembrarlos en erlemeyer de 250 mL + 80 mL de medio (mezcla de residuos agroindustriales) + Buffer Citrato fosfato pH 4 Realizarlo por triplicado (4 plogs para cada erlemeyer)
(*)

Este proceso se realiza para la cepa Sp1 y Sp2 del hongo Lentinus y para la mezcla de ambas, en cuyo caso sern dos plog de cada cepa. Finalmente se tendrn en total 18 erlemeyer.

3. Determinacin de biomasa.

Se determina la biomasa por el mtodo de peso seco, en una estufa de aire a 60 C. 4. Determinacin de polisacridos mediante el mtodo colorimtrico fenolsulfrico. Mtodo de Dubois El mtodo determina glcidos totales. Reactivos: - fenol 5% p/v en agua destilada - cido sulfrico concentrado Preparacin de la curva:
Estndar de glucosa: Preparar 100 mL de solucin de glucosa de 400g/mL 40 mg de glucosa anhidra grado analtico, disolver con agua destilada y llevar a volumen con agua destilada. Rotular y mantener almacena a 4C. Preparacin de las muestras: Tomar 7 tubos de ensayo bien limpios y adicionar lo descrito en la tabla:
No. Dilucin L estandar L Agua de glucosa destilada 0 25 50 75 100 125 150 1000 975 950 925 900 875 850 [ ] de glucosa en mg/L 0 10 20 30 40 50 60

1 2 3 4 5 6 7

Blanco: 1mL de agua destilada

Preparacin de las muestras: En tubos bien limpios y sumergidos en bao de agua-hielo y agregar a cada tubo: 0,5 ml muestra + 0,5 ml fenol 5% p/v + 2,5 ml SO4H2 conc.

Agitar de forma enrgica o agitar con vrtex cada tubo. Llevar todo los tubos a bao Mara hirviendo durante 15 min. Enfriar rpidamente en agua-hielo

Leer la a 492 nm (color naranja estable 24 hs).

Realizar una curva de calibracin (lmites del mtodo: concentracin de azcares: 5-50g/ml) y un blanco

CRONOGRAM A.

BIBLIOGRAF A. 1. Lee S, Bae H, Kim N, Hwang S. Optimization of Growth Conditions of Lentinus edodes Mycelium on Corn Processing W aste Using Response Surface Analysis. Journal of Bioscience and Bioengineering. 2008;105(2):161-3. 2. C.P. Pokhrel, S. Ohga, Submerged culture conditions for mycelial yield and polysaccharides production by Lyophyllum decastes, Food Chem. 105 (2007) 641 646. 3. Feng Y-L, Li W -Q, W u X-Q, Cheng J-W , Ma S-Y. Statistical optimization of media for mycelial growth and exo-polysaccharide production by Lentinus edodes and a kinetic model study of two growth morphologies. Biochemical Engineering Journal. 2010;49(1):104-12. 4. Xu C, HaiYan Z, JianHong Z, Jing G. The pharmacological effect of polysaccharides from Lentinus edodes on the oxidative status and expression of VCAM-1mRNA of thoracic aorta endothelial cell in high-fat-diet rats. Carbohydrate Polymers. 2008;74(3):445-50. 5. Chen G-Q, Zeng G-M, Tu X, Niu C-G, Huang G-H, Jiang W . Application of a by-product of Lentinus edodes to the bioremediation of chromate contaminated water. Journal of Hazardous Materials. 2006;135(13):249-55. 6. Hatvani N, Mcs I. Effect of the nutrient composition on dye decolorisation and extracellular enzyme production by Lentinus edodes on solid medium. Enzyme and Microbial Technology. 2002;30(3):381-6.