Instituto Politcnico Nacional Centro de Estudios Cientficos y Tecnolgicos No.

6 Miguel Othn de Mendizbal Garca Ruiz Alan Jair Hernndez Osornio Nancy Hernndez Zavala Oscar Lpez Obregn Ana Karina Lucas Pineda Marina Prez Mendieta Lucia Brenda Romero Galicia Elizabeth Semestre: Cuarto Grupo: 4IM2/4102C

Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa Clnica Tema: Urocultivo Q.B.P. Miguel ngel Morales Gil Turno: Matutino Ciclo Escolar: Enero 2012 Agosto 2012

Urocultivo
I. Introduccin Las enfermedades crnicas que suelen ser reconocidas en un estadio relativamente tardo, es decir, despus de que ha ocurrido un dao severo, y que evidentemente en tales circunstancias el tratamiento es menos eficaz, y que por lo tanto se requiere de un conocimiento oportuno de este tipo de enfermedades con el objeto de efectuar una prevencin adecuada. El diagnstico de las infecciones de las vas se hace demostrando bacteriuria por medio del cultivo. El urocultivo cuantitativo permite distinguir la bacteria significativa de la simple contaminacin de la muestra. II. Fundamento Entre las enfermedades crnicas debilitantes destaca la insuficiencia renal como consecuencia de un proceso infeccioso que se manifiesta tardamente. La presencia de bacterias en la orina debe detectarse a tiempo para evitar el desarrollo de una infeccin en las vas urinarias de graves consecuencias. La orina que normalmente se encuentra estril en la vejiga resulta un medio de cultivo excelente para diversos microorganismos como las enterobacterias. La orina de pacientes con pielonefritis tiene mayor nmero de leucocitos que el normal, y el nmero de bacterias viables de la porcin media de la miccin excede de 100 000 en un ml. En la actualidad existen diversos mtodos para cuantificar las bacterias en la orina; la eficiencia reproductibilidad y facilidad de cada uno de ellos ha sido cuidadosamente valorado. III. Material y equipo 1. Asas calibradas (de 4 mm de dimetro de 0.01 ml). 2. Medios de cultivo: gelosa sangre y EMB. 3. Solucin de cloruro de benzalconio. 4. Algodn. 5. Equipo habitual en un laboratorio de microbiologa.

IV. Mtodo IV.1 Material biolgico La orina es tomada por el paciente en su domicilio con previo aseo general, haciendo nfasis en los rganos genitales externos. La orina se recolecta en un frasco estril. Una vez que empieza la miccin, se desecha la primera orina que arrastrar los organismos contaminantes; se interrumpe la miccin para recoger el frasco estril la porcin media de la muestra y se desecha el resto de la orina. En los nios tambin se asean los rganos genitales externos y regiones vecinas, se aplica despus el dispositivo de Machuca o bolsas de plstico adhesivas. El urocultivo debe hacerse, dentro de la hora siguiente a la recoleccin de la orina, o bien si esto no es posible, debe guardarse la orina en el refrigerador a 4C hasta que pueda cultivarse, sin exceder de algunas horas. IV. 2 Cuenta de bacterias Mtodo con asa calibrada. El mtodo cuantitativo que se utiliza de rutina es el de asa calibrada para inocular. Dicha asa es de 4 mm de dimetro y de 0.01 ml de capacidad. Se toma una asada de la orina y se hace una siembra por estras en toda la superficie de la placa. Como en las infecciones del tracto urinario pueden encontrarse bacterias Gram positivas (estreptococos y estafilococos) y bacilos Gram negativos (E. coli, Proteus) es conveniente sembrar la orina en una placa de agar sangre y en uno de los medios selectivos para las bacterias Gram negativas tal como el medio EMB. En ambas placas la orina debe sembrarse del modo descrito anteriormente, incubarlas a 37C y examinarlas despus de 24 a 48 horas y se multiplica por 100 el nmero de colonias que aparecen en la placa para determinar el nmero de bacterias que existen en un mililitro de orina. Ordinariamente se hace antibiograma a las bacterias encontradas en el urocultivo.

V. Observaciones V. 1 Estimacin cuantitativa de las colonias En general, cuentas menos de 10 000 colonias por mililitro de orina indican contaminacin. Cuando el numero esta entre 10 000 y 100 000 se sospechar infeccin cuando solo existe un tipo colonial, y si es mayor de 100 000 se confirmar la sospecha. Hay casos de pielonefritis en los que el nmero de bacterias es menor de 100 000 en un mililitro de orina. Esos casos se presentan cuando un volumen de orina es muy grande y por lo tanto disminuye la concentracin de bacterias en la unidad de volumen. Cuando el paciente tiene micciones frecuentes, y cuando estas siendo tratado con agentes antimicrobianos o cuando el pH de la orina es menor de 5. V. 2 Microorganismos presentes en el tracto urinario Las infecciones bacterianas del tracto urinario pueden presentarse en pacientes de cualquier edad y cualquier sexo y pueden variar desde infecciones inaparentes hasta enfermedades sistemticas severas. El diagnstico clnico de pielonefritis frecuentemente pasa inadvertido, debido a la ausencia de sntomas en el tracto urinario. La relacin entre bacteriuria y pielonefritis activa inaparentemente solo ha sido demostrada recientemente en autopsias. La demostracin de los microorganismos por cultivos apropiados es, por lo preciso, la nica manera posible de hacer el diagnstico. Debido a que las muestras de orina frecuentemente se contaminan en su recoleccin, el desarrollo de los microorganismos, an de los patgenos conocidos, no establece necesariamente el diagnstico de infeccin de tracto urinario. La cuenta de bacterias en orina fresca de pacientes con infeccin de las vas urinarias es habitualmente mayor de 100 000 en un mililitro, mientras que las muestras de personas no infectadas y normales o son estriles o no contienen ms de 10 000 colonias en un mililitro. Por lo tanto, para valorar el significado clnico de un cultivo de orina, se recomienda tomar en cuenta el nmero de bacterias presentes en la muestr

Microbiota Patgena Estreptococo beta hemoltico Staphylococcus aereus coagulasa positivo Candida albicans Enterobacterias Staphylococcus coagulasa negativo (S. epidermis) (S. saprophyticus)

Microbiota No Patgena Lactobacilus Difteroides Bacilus subtilis

1.- Organismos que son uropatgenos reconocidos y crecen bien en medios de rutina en 24 horas Estos incluyen E.coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, y Pseudomona aeruginosa. Estos patgenos constituyen la causa del 80% de los bacilos Gram negativos aislados. Enterobacter y Citrobacterson tambin comnmente aislados. Enterococcus, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae son los Gram positivos ms frecuentemente aislados. 2.-Organismos que son uropatogenos reconocidos y no crecen en medios de rutina Mycobacterium tuberculosis, es un uropatgeno infrecuente que se asocia a altos recuentos de leucocitos.Chlamidia trachomatis se desarrolla solamente en cultivos celulares y se asocia a uretritis y salpingitispudiendo provocar UTI. Ureaplasma urealyticum, se asocia a otros uropatgenos. Neisseriae gonorrhoeaese desarrollla en Medio Thayer Martin. 3.-Organismos que pueden ser uropatgenos, pueden requerir medios especiales y ms de 24 hrs Hay microorganismos pertenecientes a la flora normal y que aislados en recuentos altos se hanasociado a UTI entre ellos se encuentran: Corynebacterium urealyticum, Corynebacterium seminale stosse desarrollan en A.Sangre CNA.; Haemophylus influenzae, H. parainfluenzae, estos de desarrollan enA.chocolate Gardenella vaginalis en altos recuentos se ha asociado a UTI ste se desarrolla en Human BloodAgar. Todos estos medios especiales deben incubarse por 48 hrs. En CO2 Microorganismos Patgenos Escherichia coli, Normalmente vive en el intestino. Infeccin de orina o del tracto urinario son expresiones que engloban diferentes enfermedades infecciosas (producidas por un microorganismo o germen) y que afectan a cualquier parte del sistema urinario (rin, urteres, vejiga urinaria o uretra). E. coli es la especie tipo del gnero Escherichia. Incluye grmenes generalmente mviles, que producen cido y gas a partir de la glucosa, la arabinosa, y habitualmente de la lactosa y otros azcares. Producen reaccin

positiva de rojo de metilo, y negativa. Proteus mirabilis Es una bacteria Gram-negativa, facultativamente anaerbico. Muestra aglutinacin, motilidad, y actividad ureasa. Esta bacteria de colonias redondeadas tiene la habilidad de producir grandes niveles de ureasa. La ureasa hidroliza urea a amonaco, (NH3) y eso hace a la orina ms alcalina. Y al subir la alcalinidad puede liderar la formacin de cristales de estruvita, carbonato de calcio, y/o apatia. Esta bacteria puede encontrarse en clculos, y esas bacterias escondidas all, pueden reiniciar una infeccin post tratamientos antibiticos. Al desarrollarse los clculos, despus de un tiempo pueden seguir creciendo ms y causar obstruccin dando fallas renales. Enterobacter cloacae Es una bacteria que pertenece al gnero Enterobacter, de la familia de las Enterobacteriaceae. Es un bacilo Gram negativo Oxidasa negativo y Catalasa positivo presente en el aparato digestivo humano. Se han descrito casos de infecciones del tracto urinario, de herida quirrgica e incluso bacteriemia. No obstante, lo ms frecuente son infecciones nosocomiales en pacientes inmunocomprometidos. El tratamiento de eleccin en las infecciones por E. cloacae consiste en la asociacin de un carbapenem (ertapenem, imipenem, meropenem) y un aminoglucsido (gentamicina). Se recomienda hacer siempre un antibiograma, dado que se conoce la aparicin de mltiples resistencias por expresin de cefalosporinasas. Serratia marcescens Es un bacilo gramnegativo de la familia Enterobacteriaceae. Puede ser peligroso para el hombre, ya que a veces es patgena, como causa de infecciones nosocomiales y urinarias. Es un bacilo motil que puede crecer a una temperatura que oscila entre 5-40 C, en niveles de pH que varan entre 5 y 9. El ambiente en el cual predomina es en condiciones hmedas, por esa razn es posible encontrarla creciendo en los baos y las alcantarillas, aunque puede ser eliminada mediante la aplicacin de leja y otros desinfectantes (sin abusar de la dosis, porque sino la bacteria puede volverse inmune a los efectos de los desinfectantes). Bibliografa
Cruz Jimnez , G., Sainz Montoya, J. E., & Segura Ramrez , P. (1994). Manual de bacteriologa Clnica (Primera ed.). D.F., Mxico : Universidad Nacional Autnoma de Mxico . Pg 82-85

Urocultivo

Cultivo Y Aislamiento

A
I

35 + 2 C

Agar Sangre Agar Sangre c/Azida Agar Columbia con 5% Sangre

18-24 hr

Sensibilida Taxo A d a Bacitracina

Identificacin
1. Tincin de Gram 2.Pruebas Serolgicas 3. Fermentacin de carbohidratos 4. Hemlisis 5. pyogenes 1. Solubilidad en bilis 2. Hemlisis 3.Tincin de Gram 4. pneumoniae Bioqumicas TSI Agar de Hierro y Triple Azucar Agar Kligler Medio MIO Agar LIA Caldo Urea H2S (TSI, Kligler) Nitratos Agar Fenilalanina Agar Citrato Agar Prueba DNasa Medio MR-VP Identificacin Serolgica de Enterobacterias -Prueba de Coagulosa + -Prueba de Coagulosa -Fermentacin de Azcares -Agar Prueba DNasa -Prueba de Susceptibilidad a Novoblocina s. aereus

Taxo P

Sensibilida da Optoquina

II
Agar McConkey Agar EMB Agar Desoxicolato Agar CLED
35 + 2C Seleccin de Colonias 18-24 hrs

III
Agar Estafilococos 110 Agar Sal Y Manitol Agar Columbia con 5% Sangre

35 + 2C Seleccin de Colonias 18-24 hrs

B.Con enriquecimiento Medio

Lquido Tioglicolato sin Indicador

35+ 2C 24 hrs e incubar

Agar Sangre Agar EMB Agar MacConkey Agar Sal y Manitol

-Seguir procedimiento Al, Alt, Alt, Allt -Pruebas de suceptibilidad

C.Hongos Y Levaduras
Agar Biggy Agar Dextrosa Sabouraud

25 + 30C 72 hrs

-Frotis Azul de Algodn -Agar para Clamidosporas -Prueba tubo germinal Candida albicans

Coleccin de la Muestra y Transporte Frotis de sedimento Gram

Orina Transporte: -A temperatura ambiente dentro de las primeras 2 hrs -Refrigeracin hasta 24 hrs